RNAfixer Хранилище образцов РНК без жидкого азота

Свойства товара:

Условия сохранения:

Комнатная температура (18 - 25°C) хранится более 1 года, если при использовании обнаруживается осаждение или выделение, можно принять водяную ванну 37°C плюсТепловое повторное растворение после использования, повторное растворение не влияет на качество продукта.
Презентация продукции:
RNAfixer - это жидкая нетоксичная тканевая жидкость, которая быстро проникает в плазму свежих тканевых клеток.Стабилизация на месте и защита РНК в клетках в незамерзающем состоянии. Погрузка в RNAfixer сразу после удаления пластины ткани не влияет на качество и количество РНК, извлеченных в будущем. RNAfixer удалил образцы РНК.Или должен быть жидкий азот для хранения неудобно. После погружения в RNAfixer, РНК в клетках свежей ткани может быть исправленаХранить при 37°C в течение дня, при 25°C в течение недели, при 4°C в течение месяца, при 20°C или - 80°C в течение длительного времени.
Образцы РНК - вирусов, таких как HCV и ВИЧ, могут храниться при температуре 37°C в течение месяца.Применяется к тканям животных (сердце, печень, почки, мышцы, яички, мозг, селезенка и т.д.), культивирующим клеткам, РНК - вирусам, плодамМухи, бактерии, лейкоциты, некоторые растительные ткани и так далее.
Характеристики продукта:
Простота в эксплуатации: ткань в нужном размере погружается в RNAfixer, чтобы ее РНК не разлагалась.
Без жидкого азота: чтобы сохранить образец без жидкого азота, сухого льда или холодильника с температурой 80°C, особенно для клинических и полевых образцовБыстрый и массовый сбор.
Удобный для транспортировки: обработанные образцы могут храниться при температуре 25°C в течение недели, что делает отправку и транспортировку образцов легкой и дешевой и выгоднойАкадемическое сотрудничество и обмены.
Многократное замораживание и таяние: Обработанные RNAfixer образцы могут быть заморожены многократно, в течение которых они могут быть подвергнуты различной обработкеЭто не влияет на качество конечной РНК.
Высокая сопоставимость: RNAfixer может уменьшить погрешности в крупномасштабной обработке образцов и повысить сопоставимость между количеством экспериментов, что особенно полезно для анализа крупномасштабных спектров экспрессии генов.
Описание использования:
RNAfixer используется только в свежих тканях, замороженные ткани запрещены до погружения в RNAfixer. Нужно быстро вводить новыеСвежая ткань растет, ширина, высокая толщина с любой стороны < 0,5 см погружается в RNAfixer (только толщина с одной стороны)Степень не превышает 0,5 см, RNAfixer может быстро проникать, а размер других сторон не имеет значения). Свежие группыТкань замачивается в 5 - кратном объеме RNAfixer и хранится при соответствующей температуре в соответствии с инструкциями.
Животная ткань RNAfixer не разрушает или не растворяет ткани, поэтому погружается в RNAfixer, чтобы достичь проникновенияСбалансированная ткань может быть извлечена из RNAfixer, затем разрезана на более мелкие блоки и помещена обратно в RNAfixer.В следующий раз используйте. Мелкие органы, такие как печень, почки и селезенка мышей, не нуждаются в вырезке и могут быть полностью сохранены в RNAfixer.
Количество RNAstore, рекомендуемое для различных образцов тканей:

Растительная ткань Многие растительные ткани могут быть погружены непосредственно в RNAfixer, а некоторые растения имеют естественные барьеры проникновения, такие как паразитЗащитный слой, который сначала разрушает паразитный слой, облегчает проникновение RNAfixer.
3. После того, как клеточные клетки, культивируемые тканями, сдуваются, центробежный сбор клеток, отбрасывается и очищается один раз с помощью буфера PBS в ледяной ваннеУдаление остатков питательных веществ. Взвешивание клеток в небольшом количестве буфера PBS. Добавьте в 5 - 10 раз больше RNAfixer.В среднем.
Сохранение лейкоцитов во всей крови требует выделения лейкоцитов из эритроцитов и сыворотки крови по группамПосле того, как тканевые клетки обрабатываются так же, белые кровяные клетки эффективно сохраняются в RNAfixer. Не кладите всю кровь, плазмуРНК в сыворотке сохраняются в RNAfixer из - за чрезмерного содержания белка, который смешивается с RNAfixer.Легко образуются нерастворимые осадки.
5. Бактерии
Бактерии не растут в RNAfixer, но RNAfixer не разрушает бактерии, E. coli сохраняется при температуре 4°CВ течение трех месяцев может быть получена полная РНК.
Хранение образцов в RNAfixer:
1. Хранить при - 80°CОбразец долго хранится. Поместите образец в РНК - Fixer на ночь при температуре 4°C, а затем вытащите образец, насколько это возможно.Удалите чистую жидкость RNAfixer и поместите ее при температуре - 80°C. Для клеток, культивируемых тканями, их не нужно удалять.RNAfixer， Замораживается непосредственно при - 80°C и не расщепляет клетки. При использовании образец может растаять при комнатной температуре, иОн также может быть повторно заморожен без ущерба для целостности и производства РНК.
2. Хранить при 20°CОбразцы в RNAfixer помещаются на ночь при 4°C, а затем переносятся до 20°C. При 20°C образец не замерзает.Замораживание, но может образовывать некоторые кристаллы, которые не влияют на будущую экстракцию РНК. При использовании образца можно находиться в помещении.Температура тает и может быть заморожена снова, не влияя на целостность и продуктивность РНК.
Хранить при 4°CОбразцы могут храниться при температуре 4°С в течение месяца.
4. Хранить при 25°CРНК, хранящаяся в образце при температуре 25°C, оставалась полной в течение недели, а образцы, хранящиеся в течение двух недель, были слегка разложены.Его едва ли можно использовать в северном анализе, но его качества достаточно для ядерной защиты или RT - PCR.
5. Хранить при 37°CРНК, хранящаяся в образце с температурой 37°C, оставалась полной в течение 24 часов и частично разлагалась в течение 3 дней.RNAfixer сохраняет образцы РНК для извлечения:Взяв образец из RNAfixer, RNAfixer может вылить его прямо в бассейн и смыть водой из водопровода.Специальная обработка.
1. Организация
После извлечения образца из RNAfixer чистым пинцетом, немного отсосав остатки RNAfixer с помощью впитывающей бумаги,РНК может быть извлечена в соответствии со стандартной процедурой измельчения жидкого азота, как и свежие ткани, а затем равномерной обработки.
2.Клетки
Существует два варианта для клеток, хранящихся в RNAfixer. Один из них - извлечение РНК после удаления RNAfixer.Один из них извлекается непосредственно из смеси клеток и RNAfixer.
Извлечение РНК после удаления RNAfixerКлетки, хранящиеся в RNAfixer, становятся менее уязвимыми и могут выдерживать более высокую скорость центрифугирования без разрушения.См. У нас есть опыт успешного сбора клеток в 5000 г центрифуг, так как интенсивность каждой клетки различна.Сначала проведите предварительные испытания с несущественными клетками, чтобы убедиться, что центрифуга не разрушает клетки с используемой скоростью. Другой вариант.Перед центрифугой добавьте изометрический PBS, чтобы разбавить смесь RNAfixer и клеток, чтобы уменьшить плотность раствора,Клеточный раствор может осаждаться.
2) Прямое извлечение РНК без удаления RNAfixer
Также можно добавлять 10 - кратное объём в один шаг, чтобы извлечь реагенты (например, TRIpure, TRI reagent) в клетки иСмесь RNAfixer затем выполняется в соответствии с обычными шагами.

ПЦРОсновные шаги и меры предосторожности?

I. Принцип эксперимента

ПЦРЭто искусственная селективность.ДНКОдин из способов, который аналогиченДНККопирование. Внутри живых организмовДНКДля копирования нужны шаблоны, цитаты,ДНКПолимеразы,ДНКСпирулиназа,dNTP; И вне телаПЦРРеакция также требует аналогичных компонентов, включая шаблоны, экстракты,буфер ПЦРАТакФерменты,dNTP. Среди них экстракт представляет собой искусственно сконструированную конкретную последовательность, реализующую расширение в определенном месте;буфер ПЦРСоздание буферной среды реагирования; Реакция, как и в организме,ДНКДвойная цепь открывается, экстракт соединяется с шаблоном, расширяется, чтобы сформировать новую цепь. Эти процессы зависят отДНКДециклиназа разрушает цепь, в то время как вне организма она достигается путем контроля температуры реакции. Как обычно94℃Шаблоны: ТрансформацияДНКОткройте двойную цепь, при температуре отжига прикладывайте экстракт к шаблону и, наконец,72℃Завершение расширения и повторное повторение этого процесса позволяет достичь определенного фрагментаДНКЗначительное увеличение. И только в начале третьего цикла появляется и мишень.ДНКТе же участки.ДНКМолекулы, далее циркулируют, чтобы создать мишеньДНКИндекс сегмента удваивается.

В конце расширения,В результате накопления продуктов,Превращение экспоненциально усиливаемой реакции в плоскую кривую,Продукт больше не увеличивается с цикличностью.,Это называется эффект платформы. Период платформы(Плато)Низкие концентрации неспецифических продуктов, ранее образовавшихся в результате неправильного распределения, будут продолжать существенно увеличиваться до более высоких уровней. Поэтому следует соответствующим образом регулировать количество циклов, завершать реакцию до периода платформы и сокращать неспецифические продукты. Время прибытия на платформу(Плато)Требуемое количество циклов зависит от копии шаблона в образце.

II. Основные компоненты

1.Шаблоны могут быть разными, в основном геномными.ДНКплазмидыДНКГеном носителя вируса.ДНКАПЦРПродукты,cДНКПодождите, но не дляРНК. Для различных типов шаблонов основные различия заключаются в сроках преденатурации и количестве шаблонов. Обычно для больших геномов.ДНКВремя преденатурации10 минутДостаточно, плазмидаДНАминГеном носителя вируса.ДНКПреддегенерация2 минутыАПЦРПредварительная дегенерация продуктов2 минутыДостаточно.

ВниманиеcДНКДля одной цепиДНКНо сделать это все же можноПЦРШаблоны, просто в первом цикле только один экстракт соединяется, синтезируя другую цепь. Начиная со второго раунда, оба экстракта соединяются с экзотическими точками, тем самым достигая обычногоПЦРИнтеграция. То же самое касается одной цепи.РНКНо не может.ПЦРРасширение, причина в реализацииПЦРРеакцией былоДНКПолимеразу можно распознать только специально.ДНКЦепочка.

2.Для количества шаблонов, обычно25улСистемаДНККачество является50100ng. Для генома.ДНКИз - за его сложной структуры концентрация экстракции также часто выше, чтобы предотвратить чрезмерную концентрацию парыПЦРВлияние, которое необходимо для извлеченияДНКПроводить градиентное разбавление. В противном случае чрезмерная концентрация может привести к неспецифическому усилению. Для плазмиды иПЦРПродукт не нуждается в разбавлении из - за его простой структуры и, как правило, низкой концентрации извлечения.

Продукция, которую компания продает:

ПЦРНа какие вопросы следует обратить внимание в экспериментеА?

нетКТзначение

Обнаружены ли результаты?КТЗначение,Проверьте, есть ли следующие вопросыА.

1Недостаточное количество циклов(Обычно не более45цикл,Повышение не только фонового значения,Количественно тоже.);

2АПЦРОшибка настройки программы,Ошибка в обнаружении флуоресцентных сигналов. обычныйSGПрименение метода72℃Сбор при расширении,ТакманПравила обычно собирают сигналы в конце или после отжига.,Кроме того, флуоресцентный сбор выбран*

3Деградация экстракта или зонда. Можно пройтиСтраницаЭлектрофорез определяет, разлагаются ли экстракты и зонды*

4Количество шаблонов может разлагаться или быть недостаточным(не более500нг,В соответствии с инструкцией по комплекту.),Образцы с неизвестными концентрациями должны начинаться с максимальной концентрации в серии разбавленных проб.*Если происходит разложение шаблона,Следует учитывать введение примесей при подготовке образца и повторное замораживание.,Рекомендуется хранить образцы шаблонов в небольших количествах,Избегайте повторного замораживания.*

5Подходит ли зонд для извлечения(Особенно, если экстракт пересекает внутреннюю оболочку.,Обеспечить расширение геномаДНК;Вверх - вниз по течениюТМПревышение значения4℃Это также влияет на увеличение)А.

КТСлишком поздно.

В относительной количественной, КтЗначения обычно контролируются1525Между ними лучше.,Если в абсолютном выражении,Образец с низким числом копий, КТЗначение увеличивается.,Как правило, не следует превышать40цикл,В противном случае количественная неточность.

поэтому,СуждениеКТЯвляется ли поздний срок ненормальным,Это должно быть сделано в соответствии с конкретными экспериментальными конструкциями и целями.

1Низкая эффективность расширения. Неправильное соотношение между экстрактом и зондом.,Требуется оптимизация*Неправильная конструкция экстракта или зонда,Требуется перестройка*

2АПЦРПроцедура неуместна.,Переход на трехэтапный подход,Или оптимизировать отжиг./Температура удлинения,Можно правильно снизить температуру отжига.*Отжиг/Короткое продление(Можно продлить на рекомендованных условиях.10s);

3АMgCl2Концентрация не подходит,Повышение концентрации ионов магния и т.д.ПЦРДеградация различных реакционных компонентов или недостаточное количество проб*

4АПЦРПродукт слишком длинный.ПЦРДизайн продукции превышает500bp;

5В шаблонах присутствуют ингибиторы. Использовать шаблоны высокой чистотыПЦРОбнаружить или разбавить шаблон.