Анализатор немаркированных клеток в реальном времени

xCELLigence RTCA S16Анализатор немаркированных клеток в реальном времени (1x16)Постоянный мониторинг размножения, морфологических изменений и прочности сцепления живых клеток в режиме реального времени с использованием биомаркерных методов с использованием биологических датчиков.

xCELLigence RTCA S16Анализатор немаркированных клеток в реальном времениРаботая в стандартной коробке для культивирования клеток CO2, рабочая станция расположена за пределами инкубатора. Удобное для пользователя программное обеспечение позволяет осуществлять контроль и мониторинг приборов в режиме реального времени, а также анализ данных в режиме реального времени.

характеристика

Получение точки времени непрерывного клеточного анализа на протяжении всего эксперимента.

RTCA обеспечивает непрерывные количественные показания количества клеток, скорости размножения, размера / формы клеток и прочности клеточной адгезии матрицы.

технология

Анализ клеточного сопротивления

Метод клеточного обнаружения находится между восстановительным биохимическим тестированием и экспериментом в организме организма в целом и является важным инструментом в фундаментальных и прикладных биологических исследованиях. Однако полезность многих методов клеточного обнаружения снижается из - за следующих факторов: (1) необходимость использования маркеров, (2) невозможность непрерывного мониторинга (т. е. возможность получения только конечных данных), (3) несовместимость с другими ортогональными методами обнаружения и (4) неспособность обеспечить объективное / количественное чтение. Однако каждый из этих недостатков был преодолен неинвазивным, немаркированным и в реальном времени методом обнаружения клеточного сопротивления.

Функциональная ячейка для обнаружения клеточного сопротивления

Функциональным блоком для обнаружения клеточного импеданса является набор золотых микроэлектродов, которые сливаются с нижней поверхностью отверстия микролитической пластины (рисунок 1). Когда эти электроды погружаются в проводящий раствор (например, в буферную жидкость или стандартную тканевую среду), кросс - электродное наложение потенциала приводит к тому, что электроны вытекают из отрицательного полюса, проходят через корпус раствора, а затем оседают на положительном полюсе, тем самым завершая цепь. Поскольку это явление зависит от взаимодействия электрода с телом раствора, клетки, прикрепленные к стенке, присутствующие на границе электрода - раствора, препятствуют потоку электронов. Размер этого сопротивления зависит от количества клеток, их размера и формы, а также от качества сцепления клеток с матрицей. Важно отметить, что ни поверхность золотого микроэлектрода, ни приложенный к нему потенциал (22 мВ) не влияют на здоровье или поведение клеток.

импедансный электрод

В каждом отверстии электронной микротитровой пластины (E - Plates) компании Agient биодатчики с золотыми микроэлектродами покрывают 70 - 80% поверхности (в зависимости от наличия зоны наблюдения). В отличие от упрощенной пары электродов, показанной на рисунке 1, электроды в каждом отверстии E - Plates соединяются в « полосу», образуя чередующиеся массивы (рис. 2). Такая конфигурация позволяет одновременно контролировать клеточную популяцию, что позволяет чрезвычайно чувствительно обнаруживать следующие показатели: количество клеток, прикрепленных к пластине, размер / форма клетки и качество сцепления клетки с матрицей.

Анализ кривых сопротивления в реальном времени

Сопротивление потоку электронов, вызванное клеточной стенкой, выражается в безразмерном параметрическом клеточном индексе (CI), где CI = (сопротивление точки времени n - сопротивление при отсутствии клеток) / номинальное сопротивление. На рисунке 3 представлен общий пример кривой сопротивления в реальном времени во время установки и работы эксперимента по увяданию.

В первые часы после того, как клетка была добавлена в отверстие для культивирования, сопротивление быстро возрастало. Это связано с тем, что клетки падают из суспензии, оседают на электродах и образуют фокусную адгезию. Если первоначально добавлено меньшее количество клеток и есть свободное пространство на дне культивируемого отверстия, клетки размножаются, что приводит к постепенному и стабильному увеличению клеточного индекса (CI). Когда клетки достигают состояния слияния, значение CI стабилизируется, что отражает отсутствие изменений в части поверхности электрода, которая может быть затронута большим количеством питательных сред. Добавление индуктора апоптоза в это время может привести к снижению значения CI до нуля. Это происходит из - за того, что клетки округляются и выпадают со дна культивируемого отверстия. Хотя этот общий пример включает в себя добавление лекарств при слиянии клеток, метод измерения сопротивления очень гибкий и может также оценить скорость и степень, с которой клетка первоначально прилипает к электроду, или скорость и степень размножения клеток.

Связь сопротивления с клеточными явлениями

Технология клеточного анализа в реальном времени (RTCA) обеспечивает количественное определение количества клеток, скорости размножения, размера / формы клеток и качества клеточной адгезии с матрицей. Поскольку эти физические свойства представляют собой синтез тысяч различных генов / белковых продуктов, технология RTCA может очень широко отражать состояние здоровья и поведение клеток. От эндотелиальных барьерных функций, хемокинга до нитевидных псевдоортопедических движений и клеточного растворения, опосредованного иммунными клетками, прибор xCELligence успешно проанализировал многие аспекты клеточных явлений. Несмотря на широкий спектр применений, тесты xCELligence позволяют исследовать очень специфические биохимические и клеточные явления. Разумно используя контрастные и / или ортогональные методы, мы можем связать характеристики кривых сопротивления с конкретными клеточными / молекулярными явлениями. Чтобы узнать больше о том, как эта связь была создана, и продемонстрировать чувствительность и многофункциональность технологии xCELligence RTCA, ознакомьтесь с рядом конкретных приложений, описанных здесь.

Принцип работы

Обнаружение клеточного поведения в реальном времени в физиологических условиях.

Инструмент xCELLIGENCE RTCA, основанный на импедансной технологии, обеспечивает автоматическое непрерывное обнаружение здоровья и поведения клеток в стандартной клетке для культивирования CO2 в течение нескольких секунд и дней. Просто добавьте клетку к E - plate, чтобы начать мониторинг количества клеток, скорости размножения клеток, размера клеток, морфологии клеток и прочности клеточной адгезии матрицы в реальном времени.

Техническое описание клеточного сопротивления

Этот высокочувствительный анализ сопротивления клеток в реальном времени использует микрозолотые электроды, которые сливаются в дно E - plate, чтобы неинвазивно обнаруживать клеточные свойства. Стенные клетки, присутствующие на стыке электрода и раствора, могут препятствовать потоку электронов. Сила сопротивления зависит от количества, размера, формы клетки и прочности сцепления клетки - матрицы. Поверхность микрозолотого электрода и используемый электрический потенциал (22 мВ) не влияют на жизнеспособность и поведение клеток.

Простой и стабильный процесс проверки

Рабочий процесс xCELligence RTCA помогает пользователям получать высококачественные и воспроизводимые количественные аналитические данные, значительно сокращая время ручной обработки. Просто добавьте клетку в пластину E - Plate, чтобы начать в режиме реального времени определять количество клеток, скорость размножения клеток, размер клеток, клеточную форму и прочность клеточной адгезии матрицы. Необъективный параметр Cell Index используется для сообщения о сопротивлении клеточного тока, вызываемом клетками, прикрепленными к стенке.

приложение

Тест на поражение иммунных клеток

Обычное обнаружение убийства иммунных клеток требует много времени и требует от пользователей использования различных комбинаций технологий для сбора данных в несколько временных точек. В отличие от этого, немаркированный прибор xCELligence RTCA предоставляет полную информацию о поражении иммунных клеток и почти имитирует активность в организме. Эффективность уничтожения иммунных клеток непосредственно обнаруживается в реальном времени с высокой чувствительностью и высокой воспроизводимостью. Этот простой высокопроизводительный рабочий процесс может глубоко изучить механизмы клеточного действия, непрерывное убийство и истощение.

Обнаружение вирусного эффекта

Используйте прибор Agilent xCELLIGENS RTCA для точного обнаружения цитопатического эффекта (CPE) вируса в режиме реального времени, чтобы продвинуть свои исследования по антивирусной терапии или разработке вакцин без длительных и трудоемких экспериментов с пустыми пятнами. Автоматический мониторинг вирусной CPE в течение нескольких минут - дней значительно снижает рабочую нагрузку и ручную обработку образцов. Тестирование динамики размножения клеток, определение оптимальной точки времени для вирусной инфекции при различной плотности вакцинации клеток, оценка вирусного опосредованного клеточного поражения в рабочем процессе.

цитотоксический анализ

Клеточная токсичность препарата или соединения определяется путем мониторинга размножения клеток в реальном времени, размера или морфологии клеток и прочности клеточной адгезии матрицы. Этот простой и высокопоточный анализ клеточной токсичности используется для мониторинга динамики долгосрочных клеточных реакций. Принимайте обоснованные решения о времени обработки клеток без увеличения рабочей нагрузки и легко генерируйте кривые реакции на дозу в нескольких временных точках.

Обнаружение клеточной адгезии

Первичный рак будет иметь миллионы клеток, которые выпадают в циркуляционную систему во время образования опухоли и называются циркулирующими опухолевыми клетками (CTCs). КТС могут повторно адгезироваться, распространяться и перемещаться в удаленные органы. Используя xCELligence RTCA, мы постоянно отслеживаем адгезионную динамику различных типов клеток, чтобы получить более глубокое понимание сложности переноса. Количественная оценка адгезии и растяжения клеток в реальном времени без использования флуоресцентных реагентов или красителей.

Обнаружение клеточного сигнала

G - белковые ассоциированные рецепторы (GPCR), рецепторытирозинкиназа(RTK) или трансдукция сигнала, опосредованная ядерными гормонами, часто приводит к биохимическим изменениям, которые влияют на количество присутствующих клеток, размер / форму клеток и плотность взаимодействия клеток с поверхностью диафрагмы. С помощью xCELLIGENCE RTCA вы можете легко отслеживать изменения размера, формы и скорости размножения клеток в зависимости от событий, связанных с передачей клеточного сигнала. Этот немаркированный постоянный мониторинг позволяет количественно оценить реакцию клеток в первые минуты и дни после обработки.

Анализ стволовых клеток

Исследования стволовых клеток помогают людям понять механизм заболевания, способствуют развитию регенеративной медицины и предлагают альтернативный способ проверки надежности и эффективности новых лекарств. Использование xCELLIGENCE RTCA для прогнозирования функций продуктов стволовых клеток и оценки изменчивости интерцеллюлярных стволовых клеток (MSC) для преодоления проблем в производстве продуктов клеточной терапии. Значительно повысить эффективность анализа с меньшим количеством клеток, постоянно обнаруживая совокупные изменения в количестве клеток, прочности сцепления и морфологии, обеспечивая согласованность на всех этапах.

Функциональный анализ клеточного барьера

Функция клеточного барьера обеспечивается эндотелиальными и эпителиальными клетками, которые могут быть повреждены во многих состояниях заболевания. Эндотелиальные клетки расположены на внутренней поверхности кровеносных сосудов и лимфатических труб. Эпителиальные клетки формируют поверхность нашего тела, которая служит барьером для защиты организма от инородных молекул. Метод обнаружения xCELligence RTCA на основе сопротивления является чувствительным количественным методом, который заменяет традиционные методы, такие как обнаружение проницаемости растворителей и обнаружение трансэндотелиального клеточного сопротивления (TEER) для обнаружения разрушения барьера.