Набор для обнаружения pH клеток (синяя флуоресценция) Используйте примечание 1. Реактор, упакованный в трубку микрореактива с спиральной крышкой, должен быть ненадолго центрифугирован перед вскрытием крышки, чтобы собрать жидкость на внутренней стенке крышки до дна трубки, чтобы избежать разбрызгивания жидкости при вскрытии крышки. Перед использованием этот продукт извлекают обратно при комнатной температуре, а затем коротко центрифугируют, чтобы раствор DMSO концентрировался на дне трубы. 2.PH зонд представляет собой раствор DMSO, который при низкой температуре зимой находится в состоянии застывания при комнатной температуре и легко прикрепляется к стенке трубы, стенке всасывающей головки. Обратите внимание, что необходимо разогреть раствор, всасывающая головка также должна быть помещена в инкубатор для подогрева, без чего легко снова застыть на внутренней стенке всасывающей головки, чтобы вызвать потери.
Набор для тестирования pH клеток.
Температура сохранения: 2 - 8°C Светоизоляция
Меры предосторожности
1.Клеточные наборы для pH - тестирования (голубая флуоресценция) долгое время не могут быть сохранены при 20°C. Избегайте повторного замораживания.
2. Зонд А представляет собой раствор DMSO, а при низких зимних температурах - состояние затвердевания, которое легко прилипает к стенке трубы, стенке всасывающей головки. Обратите внимание, что необходимо расплавиться при нагревании и превращении в жидкое состояние после центрифугирования до дна трубки, а затем открыть крышку.
Срок действия: 6 месяцев
Метод обнаружения: проточный цитометр / лазерный конфокальный / флуоресцентный микроскоп
Применимый образец: клетки
Применение продукта: проточный цитометр / / лазерный конфокальный / флуоресцентный микроскоп
Инструменты готовы.
Поточный цитометр или лазерный конфокальный или флуоресцентный микроскоп
2. Центрифуги
3. Мигратор
4.Холодильники
5. Ледяная коробка
Приготовьтесь.
Буфер PBS 2.HBSS 3. (Альтернативный) Nigericin sodium salt (родственный продукт BB - 94002)
Расходные материалы готовы
1. Центробежные трубы
2. Сосущая головка
3.Одноразовые перчатки
Набор реагентов для определения pH лизосомных клеток (синяя флуоресценция)
1. Реактор, содержащийся в трубке микрореактива с винтовой крышкой, должен быть ненадолго центрифужен перед вскрытием крышки, чтобы собрать жидкость с внутренней стенки крышки на дно трубы, чтобы избежать разбрызгивания жидкости при вскрытии крышки. Перед использованием этот продукт извлекают обратно при комнатной температуре, а затем коротко центрифугируют, чтобы раствор DMSO концентрировался на дне трубы.
2.PH зонд представляет собой раствор DMSO, который при низкой температуре зимой находится в состоянии застывания при комнатной температуре и легко прикрепляется к стенке трубы, стенке всасывающей головки. Обратите внимание, что необходимо разогреть раствор, всасывающая головка также должна быть помещена в инкубатор для подогрева, без чего легко снова застыть на внутренней стенке всасывающей головки, чтобы вызвать потери.
Набор для определения pH клеток измеряет уровень pH в клетках с помощью индикатора pH или индукционного зонда pH. Обычно существует несколько способовА.
Флуоресцентный зонд:
Некоторые клеточные pH - реактивы используют флуоресцентные маркированные индукционные зонды pH, которые могут связываться с ионами водорода (H⁺) в клетках. Интенсивность флуоресценции зонда изменяется в зависимости от изменения pH. Измеряя изменения флуоресценции, можно рассчитать уровень pH в клетке.
Например, широко используемыми флуоресцентными зондами являются SNARF - 1 и BCECF, которые изменяют интенсивность флуоресценции и длину волны излучения в различных условиях pH и анализируются с помощью таких устройств, как лазерный конфокальный микроскоп или флуоресцентный спектрофотометр.
Метод pH - индикатора:
Другим распространенным методом является использование индикаторов pH, которые меняют цвет при разных pH. Этот метод обычно используется для наблюдения под микроскопом или в сочетании с проточными цитометрами. Например, индикаторы pH, такие как фенолкрасный цвет, могут иметь разные цвета в клеточной среде при изменении pH.
Метод проточной клеточной хирургии (FACS):
Используя проточную цитологию в сочетании с флуоресцентным зондом, измеряется pH отдельных клеток. Этот метод может быть использован для обнаружения высокого потока pH в клеточной популяции.
Потенциометрический метод:
Закон потенциала использует pH - электроды или ионно - селективные электроды (ISE) для непосредственного измерения изменения потенциала в клетке, чтобы рассчитать pH.
Часто задаваемые вопросы:
Q1: Какой принцип обычно используется для определения pH клеток?
A1: В основном используются флуоресцентные зонды, чувствительные к pH. Эти зонды изменяют интенсивность флуоресценции или длину волны излучения при различных кислотно - щелочных уровнях, точно отражая уровень pH в клеточных сосудах (например, лизосомах) или цитоплазме.
Q2: Зачем нужно проверять pH клеток?
A2: Внутрклеточный pH является ключевым физиологическим параметром, который влияет на различные виды жизнедеятельности, такие как ферментативная активность, клеточная пролиферация, эндотоксия и цитопатия. Аномалия pH тесно связана с патологическими процессами, такими как опухоли и нейродегенеративные заболевания.
Q3: Как часто используются наборы для тестирования pH клеток?
A3: Широко используется для изучения аутофагии клеток (мониторинг подкисления аутофагических растворов), метаболизма опухолевых клеток (эффект Ваборга), изменений pH в процессе проглатывания через рецепторы, а также воздействия лекарств на внутриклеточную среду.
Q4: Каковы основные меры предосторожности при тестировании pH клеток?
A4: Ключевые моменты включают в себя: обеспечение точности кривой калибровки, предотвращение закалки зонда, поддержание стабильности среды культивирования (например, концентрация CO2) во время тестирования и создание разумных положительных и отрицательных контрольных групп для обеспечения надежности результатов.
Q5: Как выбрать подходящий детектор pH клетки?
A5: Специфический зонд должен быть выбран в соответствии с целевым клеточным аппаратом (например, цитоплазмой, лизосомой), а подходящий зонд для возбуждения / излучающей длины волны должен быть выбран в соответствии с конфигурацией лазера и фильтра экспериментального оборудования (например, флуоресцентной микроскопии, проточного цитометра).