TRZOL (реактив для извлечения общей РНК) (красный)

Продукция компании предназначена только для научных исследований и не может быть использована для клинической диагностики!

Реактор TRZOL - это реагент, который извлекает общую РНК непосредственно из клетки или ткани. Он сохраняет целостность РНК при дроблении и растворении клеток. После добавления хлороформа в центрифугу образцы были разделены на водный и органический слои. РНК присутствует в водном слое. После сбора проб воды выше РНК может быть переработана путем осаждения изопропилового спирта.

Независимо от того, являются ли они тканями человека, животных, растений или бактерий, этот метод лучше отделяет небольшое количество и большое количество тканей и клеток. Оперативная простота реактива TRZOL позволяет обрабатывать несколько образцов одновременно. Все операции могут быть выполнены в течение часа. Общая РНК, экстрагированная TRZOL, предотвращает загрязнение ДНК и белков. Это позволяет проводить анализ отпечатков РНК, скрещивание пятен, отбор poly (A) +, транскрипцию in vitro, анализ защиты РНК - ферментов и молекулярное клонирование.

Реактор TRZOL способствует выделению нескольких РНК разных размеров. Например, РНК, извлеченная из печени крысы, была электрофореза агаридным гелем и окрашена бромидом этилена, и было видно много полос с высокой молекулярной массой (мРНК и компоненты hnRNA) между 7 и 15 кб, два доминирующих рибосома ~ 5 кб (28S) и ~ 2 кб (18S), а РНК с низкой молекулярной массой находилась между 0,1 и 0,3 кб (tRNA, 5S). Когда извлеченная РНК разбавляется TE, ее отношение A 260 / A 280 ≥ 1,8.

Хранение продукта: TRZOL стабильно сохраняется при комнатной температуре в течение 12 месяцев. Тем не менее, для достижения оптимального эффекта мы рекомендуем хранить в среде 2–8 °C.

Какие реактивы и оборудование необходимы для реакции PCR?

Реактор:
Шаблон DNA: Реакция PCR требует шаблонной ДНК, такой как извлечение ДНК из клеток, тканей, крови и т. Д. Ссылки: два экстракта реакции PCR, каждый из которых соответствует двум концам шаблонной ДНК для определенных областей, необходимых для расширения, также могут быть синтезированы в экстракт, используемый в таких процессах, как клонирование TA; dNTPs: четыре типа dNTPs необходимы в реакции PCR, включая дезоксиаденозин (dATP), дезоксиденциальную кислоту (dCTP), дезоксиптрин (dGTP), дезоксицитозин (dTTP), для биологических процессов, таких как деление клеток и синтез ДНК, для расширения и расширения шаблонной цепочки ДНК с расширением PCR; Taq DNA - полимераза: полимераза, необходимая для реакции PCR, обычно с использованием Taq - полимеразы, и некоторые другие виды полимеразы, такие как ПФУ, Phusion и т. Д. Для расширения цепочек ДНК; раствор PCR buffer: обладает буферным действием на реакцию PCR, регулирует реакцию pH, тиосульфат водорода SDS, мелкие молекулярные органические соединения, такие как формальдегид, может повысить специфичность реакции PCR, тем самым повышая эффективность реакции; Ферментная система: амплификация PCR часто включает в себя экспериментальные шаги, такие как рекомбинация, построение и секвенирование, и часто требует ферментативной операции. MARK: Стандарт молекулярной массы, инструмент для определения размера фрагментов ДНК. Набор для очистки ДНК: для очистки продуктов реакции PCR;
Оборудование:
Аппарат PCR: используется для контроля температуры реакции и обеспечения строгого контроля различных температурных звеньев при реакции PCR; Электрическая ванна: используется для разделения продуктов усиления PCR; Экстрактор нуклеиновых кислот: полностью автоматическая экстракция нуклеиновых кислот из образцов тканей. Эти реактивы и устройства в молекулярной биологии PCR, и только на упорядоченной основе можно проводить реакцию PCR и получать точные результаты.

Основные эксперименты, связанные с PCR:

Общая полимеразная цепная реакция состоит из 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из следующих трех этапов:

I. СОДЕРЖАНИЕТрансформация:

Для разделения двухцепочечной ДНК используется высокая температура (93 - 98°C). Высокая температура прерывает водородную связь, соединяющую две цепочки ДНК. Перед первым циклом обычно нагревают в течение длительного времени, чтобы обеспечить разделение шаблонов и экстрактов и существуют только в виде одной цепи. Время этого шага составляет 1 - 2 минуты, после чего прибор PCR контролирует температуру в фазу цикла.

II. Отжиг или соединение, комплексность:

После разделения двух цепей ДНК снижение температуры позволяет экстракту связываться с одноцепочечной ДНК. Температура на этой стадии обычно ниже температуры плавления экстракта 5°C. Неправильная температура отжига может привести к тому, что экстракт не будет соединен с шаблоном или ошибочно соединен. Продолжительность этого шага 1 - 2 минуты.

III. Расширение:

ДНК - полимераза начинает синтезировать комплементарные цепи вдоль цепочки ДНК из экстракта, который связывается при охлаждении. Температура на этом этапе зависит от ДНК - полимеразы. Время этого шага зависит от полимеразы и длины фрагментов ДНК, которые необходимо синтезировать. По традиционным оценкам Taq, синтез 1000 бит / мин, более нового Tbr (от термофильного Thermus brockianus) занимает около 40 секунд, а конвергентная полимераза, производимая коммерческими компаниями, занимает всего 10 - 15 секунд.

Оптимизация условий реакции PCR:

Температура и время денатурации:

Гарантия шаблонной цепочки решения ДНК является ключом к обеспечению успеха всего расширения PCR. Нагрев 90 ~ 95 °C, 30 ~ 60 s, а затем сложные молекулы ДНК также могут быть преобразованы в одну цепь. Высокие температуры или длительные периоды высокой температуры могут привести к повреждению активности ферментов Taq и молекул dNTP.

Температура и время восстановления:

Специфика усиления PCR зависит от сочетания экстракта и шаблона во время комплексного процесса. Чем выше температура сложности, тем выше специфичность продукта. Чем ниже температура сложности, тем ниже специфичность продукта. Она должна быть установлена в зависимости от значения Tm для экстракта.

Температура и время удлинения:

Как правило, он расположен между оптимальной температурой действия фермента Taq от 70 до 75°C. Когда экстракт меньше 16 нуклеотидов, высокая температура удлинения не способствует соединению экстракта с шаблоном, может медленно нагреваться до 70 ~ 75 °C. Продолжительность реакции может зависеть от длины фрагмента, подлежащего расширению, менее 1 кб, 1 мин достаточно; Более 1 кб требуется длительное удлинение. Ферменты Taq увеличивают время в зависимости от 1 кб / мин. Здесь следует отметить, что слишком длительное продление может привести к неспецифическому расширению. Поэтому необходимо установить правильное время продления.

4 Количество циклов:

После выбора других параметров количество циклов PCR в основном зависит от концентрации шаблонной ДНК. Теоретически, после 20 - 25 циклов накопление продуктов PCR может достичь максимума, так как производительность каждой стадии реакции не может достигать 100%, поэтому независимо от концентрации шаблона, 20 - 30 циклов являются более разумным количеством циклов. Чем больше циклов, тем больше неспецифическое расширение.

Продукция, которую компания продает:

Трзол(В целом РНК Экстракция реагентов)( красный )	Pandemic 2009 H1N1 Вирус гриппа HA Генетический набор для тестирования нуклеиновых кислот	Набор для тестирования содержания коэнзима I NAD (H) (колориметрия)
Трзол(В целом РНК Экстракция реагентов)( Бесцветный )	Набор для тестирования нуклеиновых кислот гена HA подтипа H3N2	НАДКиназа (НАДК) Тестовый ящик (колориметрический метод)
TRzol LS(Образцы жидкостей РНК Экстракция реагентов)	H7N9 Подтип вируса HA Генетический набор для тестирования нуклеиновых кислот	Тестовая коробка для дегидрогеназы молочной кислоты (LDH) (колориметрия)
РНКОчистая Сверхчистая сумма РНК быстроизвлекаемый комплект (ДНАза I)	Набор для тестирования ДНК подтипа вируса H7N9	NAD Яблочная кислота Дегидрогеназа (NADMDH) Испытательная коробка (колориметрия)
ЕСИСпин Вся кровь. РНК быстроизвлекаемый комплект (ДНАза I)	Набор для тестирования нуклеиновой кислоты вируса гриппа В	NADP Яблочная кислота Дегидрогеназа (NADPMDH) Испытательная коробка (колориметрия)
ЕСИСпин Организация / клетка РНК быстроизвлекаемый комплект (ДНАза I)	Набор для тестирования нуклеиновой кислоты Yamagata	Митохондриальный дыхательный цепной комплекс I / NADH Коэнзим Q - редуктаза Испытательная коробка (колориметрический метод)
ЕСИСпин растение РНК быстроизвлекаемый комплект (ДНАза I)	Набор для тестирования нуклеиновых кислот Victoria	Набор для тестирования NADH оксидазы (NOX) (колориметрия)
ПЛАНТАИД растение РНК Помощник	Набор для обнаружения нуклеиновых кислот штамма вируса H7N9 (HPAI - H7)	Лимонная кислотная энзима (CS) Тестовая коробка (колориметрия)
Вирусный геном ДНК/РНК быстроизвлекаемый комплект	Набор для тестирования нуклеиновых кислот гена HA подтипа H1N1	Испытательная коробка для определения содержания этанола (колориметрия)
РНКчистая РНК Очистительный комплект	Набор для обнаружения нуклеиновых кислот вируса гриппа С	Дегидрогеназы (ADH) Тестовый ящик (колориметрический метод)
РНКФиксер Без жидкого азота РНК Жидкость для хранения образцов	Ячейка для обнаружения нуклеиновых кислот для вируса птичьего гриппа евразийского типа (EA - H1N1)	Формальдегидная дегидрогеназа (FDH) Тестовая коробка (колориметрия)
Это безопасно. эффективный RNase инактивирующее вещество	Набор для тестирования на нуклеиновые кислоты вируса гриппа А / В	Аналитическая коробка для ацетальдегидной дегидрогеназы (ALDH) (колориметрия)
Длинная РНК Жидкость длительного хранения	H7N9 Наборы для обнаружения нуклеиновых кислот подтипа вируса	Коэнзим IIНАДП(H)Набор для проверки содержания (колориметрия)
RNase Удало Сила прямого действия RNase инактивирующее вещество	Набор для обнаружения нуклеиновых кислот подтипа H3N2	Набор для тестирования NADP фосфатазы (NADPAse) (колориметрия)