Набор для быстрого извлечения вирусного генома DNA / РНК

Свойства товара:

ПЦРОсновные шаги и меры предосторожности?

I. Принцип эксперимента

ПЦРЭто искусственная селективность.ДНКОдин из способов, который аналогиченДНККопирование. Внутри живых организмовДНКДля копирования нужны шаблоны, цитаты,ДНКПолимеразы,ДНКСпирулиназа,dNTP; И вне телаПЦРРеакция также требует аналогичных компонентов, включая шаблоны, экстракты,буфер ПЦРАТакФерменты,dNTP. Среди них экстракт представляет собой искусственно сконструированную конкретную последовательность, реализующую расширение в определенном месте;буфер ПЦРСоздание буферной среды реагирования; Реакция, как и в организме,ДНКДвойная цепь открывается, экстракт соединяется с шаблоном, расширяется, чтобы сформировать новую цепь. Эти процессы зависят отДНКДециклиназа разрушает цепь, в то время как вне организма она достигается путем контроля температуры реакции. Как обычно94℃Шаблоны: ТрансформацияДНКОткройте двойную цепь, при температуре отжига прикладывайте экстракт к шаблону и, наконец,72℃Завершение расширения и повторное повторение этого процесса позволяет достичь определенного фрагментаДНКЗначительное увеличение. И только в начале третьего цикла появляется и мишень.ДНКТе же участки.ДНКМолекулы, далее циркулируют, чтобы создать мишеньДНКИндекс сегмента удваивается.

В конце расширения,В результате накопления продуктов,Превращение экспоненциально усиливаемой реакции в плоскую кривую,Продукт больше не увеличивается с цикличностью.,Это называется эффект платформы. Период платформы(Плато)Низкие концентрации неспецифических продуктов, ранее образовавшихся в результате неправильного распределения, будут продолжать существенно увеличиваться до более высоких уровней. Поэтому следует соответствующим образом регулировать количество циклов, завершать реакцию до периода платформы и сокращать неспецифические продукты. Время прибытия на платформу(Плато)Требуемое количество циклов зависит от копии шаблона в образце.

II. Основные компоненты

1.Шаблоны могут быть разными, в основном геномными.ДНКплазмидыДНКГеном носителя вируса.ДНКАПЦРПродукты,cДНКПодождите, но не дляРНК. Для различных типов шаблонов основные различия заключаются в сроках преденатурации и количестве шаблонов. Обычно для больших геномов.ДНКВремя преденатурации10 минутДостаточно, плазмидаДНАминГеном носителя вируса.ДНКПреддегенерация2 минутыАПЦРПредварительная дегенерация продуктов2 минутыДостаточно.

ВниманиеcДНКДля одной цепиДНКНо сделать это все же можноПЦРШаблоны, просто в первом цикле только один экстракт соединяется, синтезируя другую цепь. Начиная со второго раунда, оба экстракта соединяются с экзотическими точками, тем самым достигая обычногоПЦРИнтеграция. То же самое касается одной цепи.РНКНо не может.ПЦРРасширение, причина в реализацииПЦРРеакцией былоДНКПолимеразу можно распознать только специально.ДНКЦепочка.

2.Для количества шаблонов, обычно25улСистемаДНККачество является50100ng. Для генома.ДНКИз - за его сложной структуры концентрация экстракции также часто выше, чтобы предотвратить чрезмерную концентрацию парыПЦРВлияние, которое необходимо для извлеченияДНКПроводить градиентное разбавление. В противном случае чрезмерная концентрация может привести к неспецифическому усилению. Для плазмиды иПЦРПродукт не нуждается в разбавлении из - за его простой структуры и, как правило, низкой концентрации извлечения.

ПЦРНа какие вопросы следует обратить внимание в экспериментеА?

нетКТзначение

Обнаружены ли результаты?КТЗначение,Проверьте, есть ли следующие вопросыА.

1Недостаточное количество циклов(Обычно не более45цикл,Повышение не только фонового значения,Количественно тоже.);

2АПЦРОшибка настройки программы,Ошибка в обнаружении флуоресцентных сигналов. обычныйSGПрименение метода72℃Сбор при расширении,ТакманПравила обычно собирают сигналы в конце или после отжига.,Кроме того, флуоресцентный сбор выбран*

3Деградация экстракта или зонда. Можно пройтиСтраницаЭлектрофорез определяет, разлагаются ли экстракты и зонды*

4Количество шаблонов может разлагаться или быть недостаточным(не более500нг,В соответствии с инструкцией по комплекту.),Образцы с неизвестными концентрациями должны начинаться с максимальной концентрации в серии разбавленных проб.*Если происходит разложение шаблона,Следует учитывать введение примесей при подготовке образца и повторное замораживание.,Рекомендуется хранить образцы шаблонов в небольших количествах,Избегайте повторного замораживания.*

5Подходит ли зонд для извлечения(Особенно, если экстракт пересекает внутреннюю оболочку.,Обеспечить расширение геномаДНК;Вверх - вниз по течениюТМПревышение значения4℃Это также влияет на увеличение)А.

КТСлишком поздно.

В относительной количественной, КтЗначения обычно контролируются1525Между ними лучше.,Если в абсолютном выражении,Образец с низким числом копий, КТЗначение увеличивается.,Как правило, не следует превышать40цикл,В противном случае количественная неточность.

поэтому,СуждениеКТЯвляется ли поздний срок ненормальным,Это должно быть сделано в соответствии с конкретными экспериментальными конструкциями и целями.

1Низкая эффективность расширения. Неправильное соотношение между экстрактом и зондом.,Требуется оптимизация*Неправильная конструкция экстракта или зонда,Требуется перестройка*

2АПЦРПроцедура неуместна.,Переход на трехэтапный подход,Или оптимизировать отжиг./Температура удлинения,Можно правильно снизить температуру отжига.*Отжиг/Короткое продление(Можно продлить на рекомендованных условиях.10s);

3АMgCl2Концентрация не подходит,Повышение концентрации ионов магния и т.д.ПЦРДеградация различных реакционных компонентов или недостаточное количество проб*

4АПЦРПродукт слишком длинный.ПЦРДизайн продукции превышает500bp;

5В шаблонах присутствуют ингибиторы. Использовать шаблоны высокой чистотыПЦРОбнаружить или разбавить шаблон.

Продукция, которую компания продает: