Эмбриональные фибробласты зебры pac2

Название продукта: Эмбриональные фибробласты зебры Pac2

Категория продукта: Другие клеточные линии

Характеристики роста: рост на стенках

Система культивирования: L15 + 10% FBS культура без углекислого газа, культура при 28° или 21°

Клеточная форма: фибробласт

Условия замораживания: замораживание клеток без сыворотки крови

Технические характеристики: 1 × 10 ^ 6cells / T25 Культурные бутылки

Номер груза: CS - C2907

Способы замораживания клеток:
Метод замораживания и хранения 1: охлаждающая трубка помещается при температуре 4°C 30 ~ 60 минут (- 20°C 30 мин *) - 80°C 16 ~ 18 часов (или на ночь) в резервуар жидкого азота vaporphase для длительного хранения.
Второй способ замораживания и хранения: охлаждающая трубка помещается в программируемый охладитель с установленной процедурой ниже 1 - 3 °C в минуту до - 80 °C, а затем помещается в резервуар для жидкого азота vapor phase для долгосрочного хранения. * - 20°C не может превышать 1 час, чтобы предотвратить слишком большие кристаллы льда, вызывая массовую гибель клеток, или пропустить этот шаг непосредственно в холодильник - 80°C, но выживаемость немного ниже.

Эпидермальная ткань формируется из эмбрионального зародышевого слоя и имеет антифрикционный и антитравматический эффект. Компания Technology предлагает высококачественную общую РНК из тканей эпидермиса плода у свежих или замороженных крыс, полоски cDNA, подготовленные PCR, белки и их субкомпоненты. Все продукты проходят строгий процесс QA / QC перед отправкой, чтобы обеспечить их качество. Эти продукты могут быть использованы непосредственно для клонирования генов, экспрессионного анализа и исследований в различных молекулярных биологических экспериментах.
Общая подготовка РНК:Реактор Trizol Qiagen Rneasy Kit используется для разделения РНК, а затем очищается с помощью Qiagen RNA Clean Kit. Общий образец РНК, предоставленный компанией, сопровождается общей концентрацией, общим содержанием образцов РНК, электрофоретическими фотографиями, результатами измерения OD и т.д.

Подготовка cDNA:Очищенная общая РНК синтезирует цепочку cDNA и ретроспективно транскрибирует систему общей реакции 50ul, которая включает в себя антитранскриптазу MMLV и случайный экстракт, а также 10 мг общей РНК. Реакция 68°C заканчивается через 10 минут после реакции RT. Используя 1x RT Buffer для транспортировки cDNA, 1 ul cDNA достаточно для одной реакции PCR. Все продукты cDNA проходят тщательный анализ QA / QC перед отправкой заказа, гарантируя качество продукта.

Подготовка белков:Использование модифицированных RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin) Приготовьте раствор для расщепления поверхностной ткани плода крысы, центробежное удаление фрагментов ткани, измерьте концентрацию белка в наборе для обнаружения белка Bio - Rad, разбавляйте тканевый белок без восстановления Buffer (50 мМ Tris - HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0002% Bromphenol Blue) с добавлением 5% бета - меркаптоэтанола и PMSF с сохранением до 80 градусов.

Потенциальные приложения: < 1 > клонирование PCR известных генов; < 2 > селективный срез мРНК; < 3 > Генетическое клонирование и целевое секвенирование; <4>Western and Northern Blot； < 5 > Тестирование белков и протеомика; < 6 > Карта исследований и экспрессии микросхем.

Клеточная обработка:

1) Реанимационные клетки: замороженные трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро помещаются в водяную ванну при температуре 37°C (поверхность воды ниже крышки криогенной трубки), размораживаются и размораживаются, перемещаются в заранее подготовленную 15 - миллиметровую центробежную трубку, содержащую 4 мл питательной среды, и смешиваются равномерно. Центрифугирование в течение 4 минут в условиях 1000RPM, удаление очищающей жидкости, добавление 1 мл питательной среды и выдувание. Затем все клеточные суспензии помещаются в бутылку с 5 мл питательной среды для культивирования на ночь. На следующий день поменяйте жидкость и проверьте плотность клеток.
2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.
Для суспензионных клеток передача может ссылаться на следующие методы:
Метод 1: Сбор клеток, 1000RPM, центрифугирование в течение 5 минут при комнатной температуре, удаление очищающей жидкости, добавление 1 - 2мл питательной жидкости после выдувания, клеточная суспензия в пропорции от 1: 2 до 1: 5 в новую чашку или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды.
Способ 2: Можно выбрать половину способа обмена жидкости, после удаления половины питательной среды остаточные клетки подвешиваются, клеточная суспензия делится на новую чашку Петри или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды в пропорции от 1: 2 до 1: 3.
3) Замораживание клеток: Когда клетки растут в хорошем состоянии, может проводиться замораживание клеток. При замораживании суспензионных клеток клетки должны быть собраны, 1000RPM, центробежные в течение 5 минут при комнатной температуре, небольшое количество сохраняемой очищающей жидкости (чтобы предотвратить всасывание клеток), добавить часть свежей среды, после того, как дуть равномерно, добавить в трубку замораживания, добавить 10% DMSO в трубку замораживания после выравнивания. Замороженная среда
При замораживании клеток необходимо использовать рекомендуемые замороженные питательные среды. В замороженных средах должны содержаться хладагенты, такие как DMSO или глицерин. Можно также использовать специально подготовленные * замороженные питательные среды.
1) Клеточная среда замораживания - это среда замораживания типа *, используемая в клетках млекопитающих, которая содержит оптимальное соотношение сыворотки коровы и сыворотки коровы, что улучшает жизнеспособность клеток и эффект восстановления клеток после размораживания.
2) Замороженная питательная среда - это химически определенная, безбелковая, стерильная замороженная среда, содержащая 10% DMSO, подходит для замораживания нескольких стволовых клеток и протоклеток (за исключением меланоцитов).
Операционный процесс:
1.1 Основные реактивы и приборы: инвертированный дифференциальный микроскоп (японский olympus imt - 413), инкубатор co2 (японский yamato it - 61).
1.2 Реабилитационная культурная передача и замораживание клеток hek - 293:
1.2.1 Реанимационные культуры клеток извлекают из резервуаров с жидким азотом замороженные трубки и немедленно вводят их в водную ванну при температуре 37°C, постоянно качаясь, чтобы они быстро таяли. Вытащите растворенную клеточную замороженную трубку, откройте ее после дезинфекции спиртом, высасывайте растворимую клеточную замороженную жидкость, добавьте предварительно загруженную питательную жидкость (подогрев 37°C, объем 8 - 10 раз) в центробежную трубку, слегка выдувайте и перемешайте, затем 1000 rpm 5 мин, удалите верхнюю очистку, добавьте соответствующее количество питательной жидкости, вдувайте в клеточную суспензию, с плотностью 1×105 / мл, введите в культурную бутылку 25cm2, культивируйте при температуре 37°C, 5% co2 и насыщенной влажности.
1.2.2 Клеточная транскрипция протогенной культуры клетки hek - 293 клетки 48h обмен жидкости 1 раз, длина клетки до 60% - 70% слияния, с 0,25% переваривание 1 - 2 мин. Затем питательная бутылка мягко ударяет ладонью, чтобы удалить клетку из стенки, суспензии, дисперсии, для дальнейшей дисперсии клетки можно мягко дуть трубкой несколько раз, чтобы получить клеточную суспензию, а затем добавить удвоенное количество питательной среды, мягкое смешивание, соломинка для распределения смеси передачи расширенных клеток.
1.3 Наблюдение за морфологией клеток осуществляется под перевернутым микроскопом для наблюдения и регистрации роста и морфологических характеристик клеток.
1.4 Клетки подсчитывают обычные пищеварительные клетки, пока клетки не округляются, не снимают стенки и не всплывают, добавляют небольшое количество питательных сред центробежных, а затем используют PBS для повторного взвешивания и вдувания в клеточную суспензию. На одной стороне стекла клеточной счетной пластины добавляется микроклеточная суспензия, и количество клеток в четырехугольной ячейке счетной пластины измеряется с помощью объектива 10×, рассчитанного по формуле. Клеточное число / мл протожидкости = (сумма / 4) × 104.
1.5 Клетки с экспоненциальным коэффициентом стенки Индекс клеточной скорости роста клеток, переваренных в одноклеточную суспензию 0,25%, после подсчета были вакцинированы в 12 бутылках с культурой 25cm2, Каждые два часа случайным образом удалили 3 клетки, всасывали питательную среду и не прикрепленные к стенке клетки, добавляли пищеварительные ферменты поджелудочной железы, подсчитывали прикрепленные к стенке клетки, чтобы получить их среднее значение, в соответствии с формулой: скорость стенки (%) = (количество прикрепленных к стенке клеток / количество вакцинированных клеток) × 100%, рассчитывается скорость стенки.
1.6 Клетки с экспоненциальным периодом роста криволинейной экстракции производятся из пищеварения в одноклеточную суспензию, которая вводится в 24 - дырочную пластину с 1 мл питательной среды на отверстие. Делайте случайные 3 отверстия в день, подсчитывайте количество клеток в каждом отверстии и вычисляйте среднее значение. Непрерывный счет 10d, чтобы нарисовать кривую роста клеток.

Ниже приведены соответствующие продукты:

EstradiolBenzoate Тест на антитела к ящуру крупного рогатого скота

Acifloorfene Тест на антитела к ящуру у овец

D - Ribose D - рибоза 1,2,3 - III [(шун, шун) - 9,12 - восемнадцать диенильных радикалов] глицериды

Oleanolic acid Цидун 17 β - гидроксил - 4 - андролен - 3 - 17 - эфиры
Эмбриональные фибробласты зебры pac2Человеческий липаза A2 elisa Испытательная коробка ≥ 4190% as determined by SDS - PAGE 2,5 - дифенилдифенил

Глюкоза - мутантный энзим человека - 4, 91% as determined by SDS - PAGE 4 - хлор - 6 - радикал - 5 - фторпиримидин

Человеческий кортизол 3 киназа elisa Тестовый ящик ≥ 4192% as determined by SDS - PAGE L (+) - миндалевидный эфир

Антропогенный аденозин активированный протеинкиназа elisa Тестовый ящик ≥ 4194% as determined by SDS - PAGE N, N '(4,4' - субдифенил) бималемид

Экзоклеточная регуляторная киназа elisa - коробка 4195% as determined by SDS - PAGE

Антропогенный ядерный фактор Каппа B ингибитор альфа - элиза Тест 4196% as determined by SDS - PAGE Амин цинк второго поколения

Тестовый ящик C - elisa для антропогенного протеинкиназы ≥ 4197% as determined by SDS - PAGE 2,4,5 - тритиазол

Фруктокиназа человека elisa Испытательная коробка 4198% as determined by SDS - PAGE 6 - гидроксил - 2 - нафталин сульфонат натрия

Глицерин - трансформер человека 2 elisa Испытательная коробка 4199% as determined by SDS - PAGE 4 - фтор - 3 - бензоальдегид

Лимфоцитокины человека elisa тест - бокс ≥4200% as determined by SDS - PAGE 2,3 - дипиридин

Лимфоцитокинетический фактор человека elisa тест - бокс ≥ 4201% as determined by SDS - PAGE

Антиген человеческих лимфоцитов 6 - й комплекс A elisa Тестовый ящик 4202% as determined by SDS - PAGE L - валериановая третичная соль

Антиген, связанный с функцией лимфоцитов человека 3 elisa Тестовый ящик ≥ 4203% as determined by SDS - PAGE 3,4,5 - трифторфенилнитрил

Антигены, связанные с функцией лимфоцитов человека 2 elisa Тесты ≥ 4204% as determined by SDS - PAGE 4 - бензобор

Экспериментальный отчет:
I. Разделение и культивирование:
В стерильных условиях удалите ткань предсердия у крыс с СД возрастом 1 - 3D, затем очистите этот блок ткани 2 раза с помощью PBS, после чего он составит около 1 мм3;
2. Добавить в тканевый блок пищеварительную жидкость фермента 4 мл (0,1% 0,1% коллагеназы типа I), перемешать 10s, переварить 10 мин при температуре 37°C, а затем продуть капельницей в одноклеточную суспензию, естественным осаждением и собрать очищение, с 10% питательной средой FBS, чтобы прекратить пищеварение после размещения 4°C;
3. Оставшаяся ткань добавляется 3 - 4 мл ферментативного пищеварительного раствора, смешивается 10s, после переваривания 37°C 10 мин, в соответствии с вышеуказанным методом сбора очищения и прекращения пищеварения после размещения 4°C, повторяйте этот шаг 2 - 3 раза, пока ткань * не переваривается;
4. фильтровать клеточный пищеварительный раствор с помощью сита из нержавеющей стали 200 подкласса, 1200 р / мин центрифуги 10 мин, отбросить верхнюю очистку, осадочные клетки с 10% FBS DMEM / F12 питательной среды, смешанной подвеской, вакцинированной в 25cm2 питательной бутылке, помещенной в 37 ° C, 5% CO2 культивируемой коробки;
5. После дифференциального наклеивания стенки на 1h высасывается питательная среда, которая вводится в соответствии с экспериментальными потребностями в 6 - луночной пластине для продолжения культивирования;
ii. иммунофлуоресцентная идентификация:
Когда клетки предсердной мышцы вырастают до 80% слияния, выбрасывайте питательную среду, промывайте клетки теплой PBS 2 раза по 10 мин каждый, а затем закрепляйте клетки 15 мин 4% полиформальдегидом при комнатной температуре;
2. PBS промывает клетки 2 раза по 10 мин каждый, а затем при 4°C с 0,1% проницаемой мембраны Triton X - 100 15 мин;
PBS промывает клетки 2 раза по 10 мин каждый, а затем закрывает клетки на 30 мин 4% BSA при комнатной температуре;
Разбавить альфа - актин - антиген в масштабе 1: 100 и поместить его на ночь в инкубационные клетки в холодильнике при температуре 4°C;
5. PBS промывает клетки 3 раза, по 10 мин каждый, разбавляет анти - альфа - actin дианти в масштабе 1: 150, помещает 1 ч при 37°C;
Промыть 3 раза по 10 минут с помощью PBS, а затем посмотреть изображение и сфотографировать его под перевернутым флуоресцентным микроскопом.