Аутофагия как перспективная мишень для медикаментозного лечения

Аутофагия и ее расстройства были обнаружены в нейродегенеративных заболеваниях и ракеИгратьЭто играет важную роль, поэтому открытие новых терапевтических целей в этом процессе стало перспективным подходом к лекарственному лечению. Аутофагия - это регулируемый процесс деградации и восстановления поврежденных белков и клеточных механизмов под клеточным стрессом.1，2А.БЭто называется аутофагия.ПропуститьВокруг клеточных компонентов, отмеченных как поврежденные, образуются двойные мембраны.проводитьсборка1Автофагоидные капсулы затем сливаются с лизосомами и передают их содержимое для разложения лизосомными гидролазами.

Аутофагия имеет множество сложных физиологических и патофизиологических эффектов, таких как адаптация к питательному голоду, удаление поврежденных внутриклеточных белков и клеточных механизмов, клеточное развитие, анти - старение, уничтожение микроорганизмов, клеточная смерть, подавление опухолей и представление антигенов2митохондриальное деление - это аутофагическое селективное разложение митохондрий.3Этот процесс обычно можетпоУстранение дефектных митохондрий после повреждения клеток или стресса.

Материалы

• ПК12Клеточная система нейробластомы человека (АТКК)

• 384 Диск (Грейнер)

• Клеточный ID ®Испытательный комплект (ENZO наук о жизни)

• Оранжевый митохондриальный краситель

• Хёхт 33342

• ImageXpress® ПикоАвтоматизированная система визуализации (Молекулярные устройства)

• CellReporterXpress Программное обеспечение для сбора и анализа данных(Молекулярные устройства)

преимущество

Влияние количественных соединений на процесс аутофагии

Использование ядерных маркеров для разделения клеток, обнаружения и представления малыхОбъект

Использование автоматических изображений для обеспечения достоверности статистических данных

Обнаружение и количественное определение аутофагических частиц с помощью автоматической клеточной визуализации

Оценка воздействия на аутофагию

В этом примечанииМы оценилиImageXpressПикоЭффективность автоматизированных систем визуализации клеток для обнаружения и количественной оценки аутофагических частиц.ПК12Клеточная линия нейробластомы человека используется в качестве модели для обнаружения и разработки. Используйте клетки 6，000 штукаКлетки/Проникновение в отверстие384Конг Панчжун, инкубация48ч 00 м. Чтобы оценить влияние аутофагии,АОбработка клеток в различных концентрациях хлорохина или вирапами48ч 00 м. ВиллапамиможноВызывает аутофагию, а хлорохинможноИнгибирование аутофагического разложения, которое приводит к накоплению частиц.СоединенияПосле обработки, использованиеКлеточный ID ®Проверка аутофагииРеактор против живого.Клетки окрашиваются, чтобыАБАвтофаг. Кроме того, мы используем флуоресцентные митохондриальные красители для обнаружения митохондрий и используемХёхтИдентификация ядра (концентрацияДля каждого 0.2 μМи 1 μМВ)). использоватьсочетание20Xили40XОбъект的ImageXpressПикоСистема и три контрольных канала.(ФИТКАТРИТКиСиняя флуоресценция)Для клеток.Проведение изображений. в20XОбъектКаждое отверстие получает изображение,40XПод объективомКаждое отверстиеСбор2-4Изображения для обеспечения надежных статистических результатов. использоватьCellReporterXpressАвтофагоцитоз или митохондриальный анализ изображений в программном обеспечении для сбора и анализа изображений.

рисунок 1А.Тестирование аутофагии.На приведенной выше диаграмме показаноБАвтофагический индуктор хлорохин (30 пМ) Обработка иАиспользоватьКлеточный IDКрасильныйПК12Клетки репрезентативные аутофагические клеточные изображения и анализ маски. вCellReporterXpressВ программном обеспечении для идентификации аутофагических частиц используется точечное разделение. Ядро клеткиПоказать какСиний, митохондрииПоказать какОранжевый, аутофагияПоказать какЗелёный. внизрисунокпоказатьАОкрашивание необработанных клеток оранжевым митохондриальным красителемА.Изображения и аналитические маски для обнаружения митохондрий.

Эти алгоритмы могутпоОбнаружение и представление малыхОбъектНапример, аутофаги или митохондрии в цитоплазме, в то время как ядерные маркеры используются для разделения клеток. Количественное определение аутофагииобнаружениеВключает общее или среднее количество частиц, общую или среднюю площадь частиц (субклеточных объектов) и интенсивность. Хлорохин (30 μМ) ОбработкапослеРепрезентативные изображения клеток и анализ маски1Показано. БизмерятьХлорохин и ВиллапамиКлетки после обработкиКонцентрация реакции, и оценкаЕК50Значения. Общее число аутофаговДанные показывают,хлорохин и вирапамиКлеткиУровень аутофагии увеличивается отдельно4.6Двойная сумма3.3раз(ЕК50Значение отдельно4.0и3.6 μМВ)).

заключение

Этот метод иКлеточный IDКрасителиСочетаниеМожет использоваться для обнаружения аутофагических частиц и может использоваться для обнаружения воздействия разработанных и количественных соединений на процесс аутофагии.

ссылкалитература

1. 1. Мизушима, Н.; Комацу, М. (2011). Автофагия: восстановление клеток и тканей. Клетка. 147: 728–41

2. 2. Мизушима, Н.; (2007). Автофагия: процесс и функция, Genes & Dev. 21: 2861-2873