Ниже приводится подробное описание методов сохранения жидкой хроматографии:

Основные понятия и значение хроматографической колонны

В качестве основного компонента системы разделения жидкостная хроматографическая колонна имеет характеристики, которые напрямую влияют на точность и повторяемость результатов анализа. Колонна хроматографии отделяет компоненты образца за счет взаимодействия фиксированной и текучей фаз, в то время как правильное техническое обслуживание значительно продлевает срок службы (обычный срок службы колонны C18 составляет около 500 - 2000 проб), снижает фоновый шум и поддерживает стабильность числа теоретических башен. Особенно в сложных матричных анализах, таких как биологические образцы, обнаружение пищевых добавок и других областях, эффективная сепарационная способность хроматографической колонны напрямую определяет надежность данных.

Правила ежедневного использования хроматографических колонн

1. Выбор фазы потока и предварительная обработка

Требования к чистоте: необходимо использовать растворитель класса HPLC, чтобы избежать засорения головки колонны осадками примесей. Например, система метанола / воды должна быть фильтрована 0,45 мкм, а ацетонитрил рекомендуется использовать 0,22 мкм.

Управление pH: Антифазные колонны (например, C18) применяются в диапазоне pH 2 - 8, превышение может привести к растворению силиконового каркаса. Для особых pH - условий следует использовать гибридные колонны частиц (например, Waters XBridge Shield).

Концентрация буферных солей: обычно используемая концентрация фосфатных буферов не превышает 50 ммоль / л, высокая ионная прочность может легко выделять кристаллические повреждающие наполнители. По окончании эксперимента требуется переход чистой воды не менее 30 минут.

2. Сбалансированность системы до введения образца

Градиентная стирка предварительного равновесия: новая колонна или длительно неиспользованная хроматографическая колонна, которая должна быть смыта в начальной пропорциональной фазе потока с низкой скоростью потока (0,2 мл / мин) более 2 часов, чтобы фиксированная фаза была заполнена и увлажнена.

Мониторинг давления: Нормальные колебания давления должны быть в пределах ±5%, если внезапный подъем превышает 30%, что указывает на блокировку сита или оседание наполнителя, необходимо немедленно остановить проверку.

Стратегия глубокой очистки хроматографических колонн

1. Прямая промывка

Стандартный процесс: Отключите детекторное соединение и переключитесь на изопропиловый спирт: вода = 1: 1 смесь, обратная промывка со скоростью потока 1 мл / мин в течение 30 минут, затем переключитесь на чистую органическую фазу (метанол / ацетонитрил) работает в течение 1 часа. Этот метод позволяет удалить более 90% полярных загрязнителей.

Специальная обработка загрязнения: белковые остатки рекомендуется промывать раствором 6М мочевины, содержащим 0,1% ТФА; Для липидов используется положительный гексан: изопропанол = 1: 1 система ультразвуковой обработки в течение 15 минут.

2. Технологии регенерации на месте

Кислотно - щелочное чередование: для стойких адсорбентов последовательно вводится 0,1 моль / л NaOH → 0,1 моль / л HCl → вода промывается по 20 мл, обратите внимание, что после каждого переключения требуется переход фазы нейтрального потока. Подходит для полимерных матричных колонн (например, серии PRP).

Сверхкритическая очистка жидкости: жидкость CO2B может эффективно удалять неполярные примеси при 40°C и 300bar, особенно для полуподготовленных колонн с большой апертурой (≥100).

Управление хранением и транспортировкой хроматографических колонн

1. Краткосрочное хранение (1 месяц)

Защита от инертных газов: зарядка азотом для замены внутреннего кислорода, подавляет размножение микроорганизмов. Колонна хроматографии может быть помещена в герметичный контейнер, содержащий осушитель.

Контроль температуры: оптимальная температура хранения 15 - 25°C, чтобы избежать прямых солнечных лучей. При низких температурах (4°C) необходимо заранее восстановить до комнатной температуры, прежде чем включать.

V. РЕЗЮМЕ

Научное сохранение хроматографической колонны должно установить концепцию « профилактического, лечебного сочетания», разработать подробный журнал обслуживания для записи количества использования, изменения давления и истории ремонта. Рекомендуется ежеквартально проводить испытания на полноту (например, бензоат натрия для определения эффективности колонны), которые завершают срок службы, когда число теоретических башен падает до 70% от первоначального значения. Благодаря стандартизированным рабочим процессам и интеллектуальным средствам управления хроматографическая колонна всегда остается в лучшем рабочем состоянии, чтобы гарантировать точность и надежность аналитических данных.