По статистике, ближе80%Органические и неорганические вещества могут быть отделены высокоэффективной жидкостной хроматографией, в которой антифазная хроматографияС18Колонна является наиболее часто используемым типом хроматографии в высокоэффективной жидкой хроматографии. Ниже.С18Выбор, обслуживание и ремонт хроматографических колонн.

I. СОДЕРЖАНИЕС18Выбор столбцов

С18Основные соображения при выборе2Один вопрос, а именно влияние наполнителей колонн и спецификаций колонн на хроматографические колонны.

Физические свойства наполнителя колонны оказывают значительное влияние на хроматографическое поведение наполнителя. Основные физические свойства наполнителя включают в себя следующее: степень частицы, апертура, объем отверстия, химия связывания фаз, содержание углерода и алкилирование.

(1)Размер частицы - это размер диаметра частицы, заполняющей колонну. На самом деле, размер частицы, обозначенный на хроматографической колонке, является средним. Как размер зерна ".5μмНе все частицы в колонне имеют диаметр.5μмНа самом деле, есть степень распределения частиц. Это распределение играет важную роль в обратном давлении колонны и эффекте колонны. В общем, чем меньше средняя степень частиц, тем меньше распределение частиц, тем выше эффект хроматографической колонны, тем выше обратное давление. в настоящее времяС18Размер заполнителя колонны4...10μмМежду ними.

(2)Разрыв - это разрыв между частицами наполнителя. Обычно апертура определяется как средняя апертура наполнителя. Распределение средней апертуры после загрузки колонны шаровой набивки относительно узкое, структура станка колонны равномерна, эффект колонны высок, воспроизводимость хороша; Аморфные наполнители имеют более широкое распределение средней апертуры, структура столбчатого слоя неравномерна, линейная скорость фазы потока неравномерна, спектральная полоса расширяется. Средний размер апертуры оказывает значительное влияние на разделение крупных молекулярных соединений, и при разделении проб, содержащих более крупные молекулы, может возникать эффект молекулярного сопротивления или адсорбционного эффекта, который влияет на количественную скорость и точность извлечения. Таким образом, при разделении проб, таких как белки или полипептиды, с помощью антифазной хроматографии следует учитывать большую апертуру.(как30 нм)Заполнитель антифазного столба. Объем отверстия, как параметр пористости силикона, может использоваться в качестве ссылки при разделении и анализе более крупных молекулярных соединений, выбирая инверторный цилиндрический наполнитель с большим объемом отверстия.

(3)Химические связующие фазовые наполнители занимают важное место в эффективной жидкостной хроматографии. Он может связывать более полярные органические группы и использовать менее полярные растворители в качестве фазы потока. Может также связываться с менее полярными органическими группами, выбирая более полярные растворители в качестве фазы потока.С18Колонна хроматографии состоит из кремниевых алкилированных связей.(Си-О-Си-С)Существующие, такие реакции связи в настоящее время наиболее широко используются. Если восемнадцать алкилтрихлорсилан и полностью пористый силиконМ-Порасил-C18Реакция образует алкильную химическую связь фазы, товар называетсяМ-Бондапак-С18А.

(4)Содержание углерода в наполнителях. Традиционная методика измерения заключается в нагревании наполнителя до разрыва углеводородной связи, а затем в расчете содержания углерода путем измерения потерянного веса или образования углекислого газа. Содержание углерода может быть увеличено путем увеличения длины или плотности связи. Увеличивается содержание углерода, увеличивается удерживаемая стоимость колонны. хроматографическое поведение связанных фаз связано с плотностью связи, а также с плотностью силикона и поверхностной площадью наполнителя. Чем выше плотность наполнителя, тем больше силикона требуется для заполнения колонны, тем выше содержание углерода в колонне. Если использовать2Заполненные колонны с одинаковым содержанием углерода с разной плотностью наполнителей будут иметь совершенно иное поведение удержания. Поэтому недостаточно прогнозировать хроматографическое поведение только по содержанию углерода.

(5) C18Силанизирующий реактив - это больше, чем2 нмКрупные молекулы, которые, таким образом, связаны с соседними силиконовыми радикаламиС18Силанизирующий реагент создает серьезное стереопозиционное сопротивление. В результате на поверхности силикона имеется большое количество остаточных силиконовых радикалов, которые не реагируют с силиконовыми реагентами, и эти полярные радикалы могут взаимодействовать с щелочными соединениями при определенных хроматографических условиях, вызывая пиковое перетаскивание хвоста, что может повлиять на количественные результаты анализа. Эти проблемы в определенной степени могут быть преодолены путем алкилирования. алкилирование - это независимая реакция, выполняемая на фазе связи для уменьшения силиконовой базы на поверхности силикона. алкилирование с использованием малых молекул(Как триметилсилан.)Реактор, пространственное сопротивление которого намного меньшеС18Базовая группа. Большинство стационарных только30%Поддерживаемое расположение клавиш. Сообщается, что максимальное покрытие может быть достигнуто с помощью некоторых чрезвычайно активных химических реагентов и специальных условий реакции.50%Хорошее понимание физических свойств силиконовых связей поможет выбрать подходящую хроматографическую колонку в реакции на высокоэффективную жидкостную хроматографию. На первый взглядС18Столбы, хотя химические группы одинаковы, на самом деле разные маркиС18Характеристики колонн могут сильно различаться, что приводит к различным результатам разделения.

Выбор заполнения колонны связан с возможностью разделения хроматографии, а выбор спецификации колонны напрямую влияет на скорость анализа, способность разделения, способность обнаружения и потребление растворителя для каждого анализа. Спецификация колонны состоит из двух аспектов: внутреннего диаметра колонны и длины колонны. Внутренний диаметр колонны, аналитический тип обычно2...6 мм,Подготовительный тип20 ммБольшие могут80 мм; Длина колонны, аналитический тип5...30 смПодготовительный тип15...50 см. Как правило, внутренний диаметр колонны не влияет на связь между степенью разделения и временем анализа. Сегодня технология колонн была разработана для того, чтобы колонны с различными внутренними диаметрами колонн могли обладать одинаковыми характеристиками. Столбы различного внутреннего диаметра имеют свои особенности, и колонны с большим внутренним диаметром потребляют больше растворителей для одинакового времени анализа и степени разделения, чем колонны с меньшим внутренним диаметром. С другой стороны, колонны с меньшим внутренним диаметром также требуют меньшего количества образцов для того же сигнала обнаружения. Таким образом, в количестве образца есть *, можно использовать колонны малого внутреннего диаметра. Хотя увеличение длины колонны может улучшить эффект разделения, сопротивление также увеличивается, и давление на входе должно быть увеличено. Столбчатое давление является основным препятствием, влияющим как на увеличение степени разделения, так и на сокращение времени анализа. Степень разделения, время анализа и давление колонны взаимно ограничивают друг друга, выбирая два из них, тогда первый3Один фактор тоже выбран. Длинная колонна может дать высокую степень разделения, короткая колонна может обеспечить быстрое разделение, и мы можем выбрать подходящую хроматографическую колонну в зависимости от образца.

С18Основные принципы выбора столбцовА.

(1)Выбор наполнителей, обработанных алкилированием, предотвращает перетаскивание щелочных соединений.

(2)Выберите колонну с высоким содержанием углерода и добавьте зарезервированное значение.

(3)Выберите короткую колонну.(как15 смА,7,5 см)А.

(4)Выберите наполнитель с малыми частицами.

(5)Для компонентов с большой молекулярной массой выбираются колонны с большим отверстием.

II.С18Ежедневное использование и обслуживание колонн

В повседневной работе по анализу разделения правильное использование хроматографических колонн напрямую влияет на продолжительность жизни хроматографических колонн. Ниже представленыС18Вопросы, на которые следует обратить внимание в ходе повседневного использования.

(1)Столбы при погрузке и разгрузке, замене, действие должно быть легким, соединение должно быть скручено умеренно. Необходимо предотвратить более сильные механические колебания, чтобы избежать образования пустот в столбовом слое.

(2)Если прибор используется для обычного анализа с ограниченным типом образцов, но большим количеством анализов, то можно было бы настроить его для каждого типа обычного анализа.1Корневая специальная колонна, которая помогает продлить срок службы колонны.

(3)При использовании устройства контроля температуры столбика следует обратить внимание на то, что нагревание происходит после входа в фазу потока.

(4)Перед использованием фазы потока необходимо провести дегазацию, чтобы избежать снижения эффективности колонны и обнаружения воздействия. Образцовые растворы должны быть надлежащим образом обработаны и отфильтрованы, чтобы уменьшить загрязнение и засорение колонн.

(5)При замене проточных фазовых классов следует обратить внимание на взаиморастворимость растворителей, чтобы предотвратить появление соляного анализа.

(6)Фактическое рабочее давление колонны должно быть ниже максимального давления при наполнении, желательно менее половины максимального давления. Обычно не более20 593.965...29 419,95 кПа.При низком давлении(14 709,975 кПа)Диапазон использования позволяет колонне поддерживать высокий эффект колонны в течение длительного периода времени.

(7)С18хроматографическая колонка - неполярная связанная хроматографическая колонкаpHЗначения должны строго контролироваться2...7Между, чтобы не повредить колонны.

(8)После завершения анализа разделения, не следует немедленно останавливаться, необходимо своевременно промыть систему хроматографического анализа, как правило0,5 часаВыше, чтобы удалить примеси в хроматографической колонне.

(9)Если в текучей фазе есть соль, сначала ее полностью промывают водой. Если это амины(Например, триметамиды или тетрабинамиды)Добавить в фазу потока, чтобы использовать50%Метанол и0,05%Раствор фосфатной кислоты смешивается с растворителем для промывки, а не только водой.

(10)С18Метанол обычно используется в качестве растворителя для консервации, чтобы предотвратить повреждение колонны от высыхания. Запрещается длительное хранение воды или буферного раствора в хроматографическом потоке.

(11)Выберите подходящийС18Защитная колонна для защиты аналитической колонны от частиц примесей и необратимых адсорбционных возмущений. Степень частиц наполнителя защитной колонны должна быть как можно более такой же, как и у наполнителя аналитической колонны.

(12)Срок хранения колонны не должен быть слишком продолжительным. В краткосрочной перспективе не понадобится.С18Столб, промыть метанолом30...60 минутЗатем запечатать оба конца колонны. Столбы, которые не используются в течение длительного времени, во - первых, принять метод регулярной промывки, повторного уплотнения; Во - вторых, после промывки на обоих концах колонны1Только контейнеры, наполненные метанолом.(Только один конец.)В дополнение к испарению растворителя в колонне в течение более длительного периода хранения.

III.С18Ремонт колонн

хроматографические колонны в процессе повседневного использования, несмотря на строгую защиту, образцы и фазы потока, несмотря на предварительную обработку, но после длительного использования, по - прежнему трудно * избежать загрязнения колонны, потери фиксированной фазы, сплетения, оседания ложа колонны и снижения эффективности колонны и так далее. Некоторые из них могут быть восстановлены с помощью ремонта, чтобы частично восстановить эффект колонны.

1,Технология регенерации загрязнения столбов

После загрязнения хроматографической колонны ее можно промыть подходящим растворителем, чтобы восстановить эффект колонны.С18Обычные методы регенеративной промывки колонн: метанол и трихлорджан, соответственно.Метанол/ Водные60 млПо хроматографической колонке, затем метанол.60 млСбалансированная хроматографическая колонна после инкапсуляции, эффект колонны вернется в норму. При необходимости, в зависимости от характера загрязнения столбов(Например, органическое загрязнение, загрязнение солями и т.д.)ПРИМЕНЕНИЕ, ПРИМЕНЕНИЕ0,05 моль/л H2SO4А0,5 моль/л H3PO4или0,1 моль/л ЭДТАНатриевая соль промывается, затем промывается водой и, наконец, запечатывается после равновесной хроматографической колонны метанола. Для сильно загрязненныхС18Столбы, можно использовать воду, метанол, хлороформ, этан последовательно после промывки, последовательно перевернуть и промыть1Снова, растворитель для каждого используемого вещества60 млНе берите детектор и, наконец, запечатайте его метаноловой равновесной хроматографической колонкой.

2,Восстановление загрязнения столбов

Если регенерация загрязнения колонны неэффективна или известно, что загрязнение колонны является серьезным, его можно решить методом восстановления колонны, но глубина загрязнения колонны не должна превышать5 мм. Метод состоит в том, чтобы выкопать загрязненную часть специальной лопатой, а затем смешать ее с потоком той же фиксированной фазы, что и цилиндрический наполнитель, и тщательно заполнить выкопанную часть плазменной фазой(Постепенно приблизить уровень прочности после заполнения к первоначальному.)Достаточно починить торец. Если диаметр отверстия решетки на обоих концах колонны одинаков, колонна может быть перевернута с ног на голову, чтобы использовать обычное время, чтобы восстановить плотность кровати колонны с помощью струйной фазовой промывки.

3,Восстановление падения колонны

Причин падения колонны много. Для менее серьезного оседания, если диаметр отверстия сита на обоих концах колонны одинаков, колонна может быть перевернута в течение обычного времени, чтобы восстановить производительность. Когда обвал серьезный(5 мм)左右)Когда это возможно, можно использовать метод восстановления загрязнения колонны.