Подклеточная протеомика Полная стратегия рабочего процесса (включая масс - спектрометрию и

Подклеточная протеомика Полная стратегия рабочего процесса (включая масс - спектрометрию иТехнология SILAC) Подробная информация о технических услугах тестирования

В постгеномную эпоху субклеточная дибенбоизия (subcellular proteomics) постепенно становится ключевым направлением исследований, раскрывающим функции клеток, сигнальные пути и механизмы заболевания. По сравнению с полноклеточной группой dánbáizhí, исследования на субклеточном уровне фокусируются на экспрессии, позиционировании и динамических изменениях белков в конкретных клеточных органах, таких как митохондрии, эндоплазматические сети, ядра и т. Д. Это обеспечивает поддержку данных с более высоким пространственным разрешением.

Почему выбирают субклеточную группу dànbáizhí?

Несмотря на то, что традиционная дибенбаизия дает обширные результаты в скрининге биомаркеров заболеваний и исследованиях сигнальных путей, ее пространственное разрешение часто ограничено. Например, в опухолевых клетках изменения экспрессии на уровне цельного белка не отражают непосредственно феномен протеиновой перегруппировки на клеточном уровне.

Субклеточная d ànbáizhí гистология посредством разделения и количественного анализа клеточного аппарата jnenenebk ngzhwn может:

• Обнаружение динамического переноса белков между различными клеточными органами.

• Выявление локальных аномалий экспрессии белков, связанных с болезнью.

• Реконструкция структуры белковой сети в пространственно - временном измерении.

В этом направлении исследования особенно важно совместное применение масс - спектрометрических платформ с высоким разрешением и стратегий количественной маркировки.

II. Основные рабочие процессы в области субклеточной группы dànbaizhí

Подготовка образцов и отделение субклеточных компонентов

Высококачественное разделение субклеток является основой всего процесса. В настоящее время основные подходы включают:

• Дифференциальная центрифуга: подходит для грубого разделения большинства клеточных сосудов (таких как митохондрии, ядра, пузырьки и т.д.).

• Центрифуга с градиентом плотности (например, Sucrose или Percoll градиент): используется для дальнейшей очистки целевого клеточного аппарата.

• Иммунодесорбция: обогащение специфических клеточных механизмов антителами, подходящих для клеточных структур, которые трудно отделить центрифугой.

• Субклеточная d ànbáizhí - спектрометрия (Subcellular Localization Mapping): улучшение пространственного анализа в сочетании с такими технологиями, как SILAC.

2. Извлечение белка и энзимоз

Различия в типах и изобилии белков в разных клеточных органах значительны, поэтому необходимо оптимизировать систему буферной жидкости при извлечении белка, например:

• Для проб, обогащенных Módànbai, рекомендуется использовать дезактиваторы с высоким содержанием соли + неионы.

• Ядерные компоненты, содержащие нуклеиновые кислоты, должны быть добавлены к нуклеазам, чтобы уменьшить вязкость образца.

Ферментная резка обычно использует yídànbáiméi (trypsin) в сочетании с коэнзимами, такими как Lys - C, когда это необходимо, для повышения эффективности резки сложных белков.

Количественные стратегии: преимущества SILAC в субклеточной d ànbáizhí

1 Что такое SILAC?

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture） Это стратегия метаболической маркировки, которая обеспечивает относительную количественную оценку уровня dànbáizhí путем введения аминокислот, содержащих изотопы азота, в процесс культивирования клеток. К их преимуществам относятся:

• Нет необходимости в химической модификации, чтобы избежать введения нефизиологических изменений.

• Применяется в исследованиях динамической перевозки.

• Естественная совместимость с масс - спектрометрией, высокая количественная точность.

В субклеточной группе d ànbáizhí SILAC особенно подходит для:

• Построение профиля позиционирования белка: различные группы маркеров SILAC имитируют различные клеточные устройства и делают вывод о позиционировании по прочности метки и режиму распределения.

• Динамическое транспортное исследование: изменение интенсивности меток SILAC до и после обработки, чтобы выявить тенденции миграции белков.

• Групповое сравнение в условиях высокопроизводительного скрининга.

SILAC vs Другие количественные технологии (TMT, Label - free)

Масс - спектрометрический анализ и интерпретация данных

Выбор прибора: Высокое разрешение vs Высокий поток

Субклеточная денбаизия обычно рекомендует использование масс - спектрометров с высоким разрешением (например, серии Orbitrap Exploris, timsTOF) для улучшения обнаружения белков с низким содержанием и изотопных меток.

2. Процесс обработки данных

Типичный аналитический процесс включает:

• Предварительная обработка исходных данных (Raw to mzML).

• Идентификация и количественная оценка изотопных маркеров (MaxQuant, Proteome Discoverer и т.д.).

• Программное обеспечение для прогнозирования субклеточного позиционирования (например, MetaMass, SubCons и т.д.).

• Анализ обогащения и функциональные примечания (GO, KEGG, Reactome).

Контроль качества данных особенно важен в реальных проектах. Например:

• Равновесие белкового покрытия.

• Адекватны ли пиковые разрешения изотопов.

• Существуют ли помехи в результате воздействия партий.

Субклеточная денбаизия является важным мостом между экспрессией белков и функцией клеток. С повышением чувствительности масс - спектра и диверсификацией количественных методов, субклеточная гистология стала средством понимания сложных жизненных явлений búkêhuóquê. В будущем новые направления, такие как пространственная мультимикология, прогнозирование местоположения с помощью ИИ и одноклеточная субклеточная гистология, еще больше расширят границы исследований. Biotech будет продолжать оптимизировать единый сервисный процесс от обработки образцов - масс - спектрометрического анализа - биоинформатики, чтобы помочь исследователям исследовать тайны жизни с более высоким разрешением.

~ ~

Биотехнологический проект BatterPack

I. Секвенирование белков

BatterPaik Biotechnology использует новый масс - спектрометр Obitrap Fusion Lumos компании Thermo и систему секвенирования разложения Edman компании Isman для анализа последовательности dànbaizhí, предоставляя услуги по секвенированию белков на основе масс - спектрометрии, включая анализ состава аминокислот dànbaizhí, анализ Nduáncè xú, Cduáncè xú и полных последовательностей, а также анализ последовательностей n - enbáizhí на основе разложения Эдмана. Для dánbáizhí неизвестных теоретических последовательностей предлагается секвенирование dánbáizhí с нуля на основе метода нулевого секвенирования для анализа белковых последовательностей.

Преимущества сервиса:

Использование современного в мире масс - спектрометрического прибора Obitrap Fusion Lumos.

Обеспечивает 100 - процентное покрытие измеренной последовательности белков - мишеней;

Можно определить до 70 аминокислотных последовательностей на N - конце белка;

4. Могут быть измерены образцы в различных формах: белковые растворы, полосы белка PVDF;

5.Низкий объем использования образца: образец белка требует всего 5 - 10 мкг, чтобы завершить тестирование;

Секвенирование не зависит от модификаций n - конца, таких как закрытие n - конца, ПЭК и гликолизация.

II. ГЛОГИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДАНБАЙШИ

BatterPaik Biotech использует платформу Orbitrap Fusion Lumos от Thermo Fisher в сочетании с Nano - LC для предоставления количественной d à nbáizhí, целевой d à nbáizhí, полипептидной гистологии, транскрипционной модифицированной белковой гистологии и других услуг по групповому анализу d à nbáizhí. Кроме того, BatterPack Biotechnology запустила новую услугу 4Ddànbáizhí на основе timsTOF Pro, которая помогает в исследованиях, таких как протеомика микрообразцов, медицина больших групп образцов и высокопроизводительная модификация.

Преимущества сервиса:

1. Высокопроизводительный количественный анализ белков: крупномасштабный экспериментальный анализ в многоконтрольной группе, в ходе которого были обнаружены новые биомаркеры;

2. Многочисленные методы маркировки d ànbáizhí in vitro и вне организма, применяемые для анализа различных образцов тканей, клеток, крови и т.д.

Высокая чувствительность масс - спектрометрического анализа и высокая повторяемость результатов экспериментов;

4. Может обнаруживать белки с низким содержанием, с широким линейным диапазоном;

5.zhuanyè Биоинформатика анализ, более систематический и точный.

Одноклеточный масс - спектрометрический анализ

Batterpack Biotechnology использует систему масс - спектрометрии Fluidigm для анализа одноклеточных масс - спектрометрических потоков, используя маркеры металлических элементов (обычно специфические антитела, помеченные металлическими элементами) для маркировки молекул на поверхности и внутри клетки, затем отделяя отдельные клетки от проточных клеток, а затем анализируя спектр атомной массы отдельных клеток с помощью масс - спектрометрии плазмы с индуктивной связью (ICP - MS), zu преобразует данные спектра атомной массы в молекулярное выражение сигнала на поверхности и внутри клетки.

Преимущества сервиса:

1. Передовые технологии, заполнение технических пробелов

Использование металлических маркирующих антител позволяет избежать проблем, связанных с небольшим количеством и подверженностью взаимодействию традиционных потоковых люминесцентных каналов. Многочисленные индикаторы могут быть представлены одновременно на одноклеточном уровне, а Batterpack Biotech может обнаружить 51 целевой белок одновременно.

2. Большой объем анализа и более низкая стоимость

Одноклеточный RNAseq ограничен такими факторами, как стоимость, и общее количество анализов всех образцов клеток составляет около 2x10 ^ 4, в то время как проточная масс - спектрометрия может анализировать не менее 10 ^ 5 клеток за один раз (один образец), достигая количественного улучшения и не более дорогостоящего, чем одноклеточный RNAseq.

3. Большие перспективы применения

Результаты проточной масс - спектрометрии могут дать изменения в подгруппе клеток, в клинической диагностике, исследованиях механизмов заболевания и других аспектах имеют большие перспективы исследований;

Сочетание технологии металлической маркировки с другими технологиями будет иметь новые направления применения. В дополнение к обычным белкам, масс - спектрометрическая проточная клеточная технология также может использоваться для постпротеиновой модификации;

Может обнаруживать выживаемость клеток, размер клеток, экспрессию транскрипторов мРНК, скорость синтеза ДНК и активность протеазы.

IV. иммунополипептидный анализ на основе высокоточного масс - спектрометрии и открытие новых антигенов

Универсальные решения для иммунополипептидного анализа и обнаружения новых антигенов на основе высокоточного масс - спектрометрии BatterPack Biotech включают в себя наши собственные высокочувствительные решения по обогащению и идентификации иммунопептидов. Мы можем помочь вам идентифицировать и идентифицировать более 10 000 полипептидов типа I и более 10 000 полипептидов типа II. Благодаря нашей оптимизированной высокопроизводительной платформе иммунопептидного анализа иммунопептидный анализ может быть повторно идентифицирован и количественно определен из небольших образцовых материалов. Сервис может быть применен к крупномасштабным исследованиям, направленным на то, чтобы помочь исследователям найти решения для рака, иммунных и инфекционных заболеваний и глубоко исследовать неизвестные цели.

V. Биомедицинские признаки

На основе технологии масс - спектрометрии с высоким разрешением, MALDI TOF， Высокоэффективная хроматографическая сепарация обеспечивает широкий спектр биологических фармацевтических аналитических программ wánshán, начиная от анализа состава аминокислот и структуры первого уровня биологических продуктов, таких как dánbáizhí, полипептиды, антитела, вакцины и т. д., и заканчивая анализом изменчивости и чистоты продукта. Он предназначен для предоставления качественных услуг по анализу биомедицинских препаратов, чтобы помочь производителям биомедицинских препаратов улучшить качество биомедицинских препаратов.

Биотехнологическая платформа BatterPack

Biotechnology - Biotechnology - Biotechnology - Биопродукты, Биометрические мультикластеры

Beijing Baitai Paike Biotechnology Co., Ltd. занимается предоставлением услуг по контролю качества и проверке проектов для биологической / фармацевтической и медицинской промышленности. Лаборатории компании следуют правилам и руководящим принципам NMPA, ICH, FDA и EMA, прошли сертификацию двойной системы качества CNAS / ISO9001, создали полную систему качества, холод и тепло данных / резервное копирование в разных местах, регулярное измерение / периодическую проверку оборудования, отслеживание аудита программного обеспечения, предоставляют клиентам интегрированные решения и технические услуги, поддерживают исследования и разработки новых лекарств, регистрацию деклараций о лекарствах и выпуск продукции.

Компания использует систему контроля качества ISO9001, которая предоставляет услуги по обнаружению и анализу CRO на основе масс - спектрометрии.

2) аккредитована Национальной лабораторией CNAS для предоставления клиентам услуг по исследованию качества лекарственных средств в соответствии с глобальным законодательством в области фармацевтики;

3. Сфера деятельности охватывает такие области, как денбаизия, полипептидная, метаболическая, биомедицинская экспрессия, одноклеточный анализ, одноклеточный масс - спектрометрический поток, анализ биоинформационных облаков и мультигистологический биомасс - спектрометрический комплексный анализ;

Семь основных платформ контроля качества для удовлетворения ваших потребностей в обслуживании в режиме одного окна;

5. Обслуживание 3000 + предприятий, 10000 + выбор клиентов;

Мы стремимся предоставить вам высококачественные услуги биомасс - спектрометрии!

Подклеточная протеомика Полная стратегия рабочего процесса (включая масс - спектрометрию иТехнология SILAC) Подробная информация о технических услугах тестирования