АКР (раковые клетки пищевода мышей)

АКР (раковые клетки пищевода мышей)

II. Обработка после приема клеток

1) После получения клетки, 75% стенки бутылки для дезинфекции алкоголя помещает бутылку T25 при комнатной температуре около 1 ч. Если вы обнаружите, что бутылка для культивирования повреждена, есть разлив жидкости и клетки загрязнены, пожалуйста, свяжитесь с нами вовремя после фотографирования.

2) Подтвердите состояние клетки под микроскопом 4 или 5X, сохранив 2 - 3 фотографии только что полученных клеток (10 ×, 20 ×) и 2 - 3 фотографии внешнего вида культивируемой бутылки в качестве основы для состояния клетки при получении после продажи.

3) Клетки стенки:Клетки помещаются на 1 ч при комнатной температуре, и под микроскопом наблюдаются рост клеток и их стенки, а некоторые из них сгруппированы в результате вибрации во время экспресс - доставки.Если плотность роста клеток, наблюдаемых под зеркалом, составляет менее 60%, можно удалить питательную среду для орошения в бутылке для культивирования (если есть клетки, которые не прикреплены к стенке, нуждаются в центробежной рекуперации, повторной суспензии в оригинальную бутылку для культивирования), добавить новую игровую полную питательную среду 6 - 8 мл и поместить ее в клетку для культивирования, чтобы продолжить культивирование. Если плотность роста клеток составляет более 70% - 80%, клетки могут быть трансформированы. В процессе передачи клетки, которые выпадают из - за вибрации транспорта, нуждаются в центробежной переработке.

4) Метод удаления клеток во время транспортировки: Сбор сброшенных клеток после центрифугирования и удаления, очистка с помощью PBS, центрифугирование и удаление, добавление 1 мл ээнзима в центрифужную трубку для рассеивания пищеварения около 20 секунд, плюс полная питательная среда для прекращения пищеварения после центробежной прокладки, оставшиеся клеточные клетки, прикрепленные к стенке, работают в соответствии с нормальным методом передачи клеток, прикрепленных к стенке.

5) Примечание: Транспортные питательные среды (поливные питательные среды) больше не могут использоваться для культивирования клеток, пожалуйста, замените их игровыми цельными питательными средами, недавно подготовленными в соответствии с условиями культивирования клеток инструкции. После получения клетки рекомендуется первая передача T25 Культурная бутылка 1: 2.

III. Функционирование клеточной культуры

1) Реанимационные клетки: следующие клетки культивируют замораживание обработки только для справки, конкретные шаги работы в основном с описанием продукта

Замораживающие трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро размораживаются и размораживаются в водяной ванне при температуре 37°C, а 4 мл питательной среды смешиваются равномерно. Центрифугирование в течение 3 мин при 1000 рpm, сбрасывание очищающей жидкости, добавление 1 - 2 мл питательной среды после дутья равномерно. Затем все клеточные суспензии добавляются в бутылку с умеренным количеством питательной среды для культивирования на ночь (или добавляют клеточную суспензию в чашку 6 см, добавляя около 4 мл, чтобы играть в полную питательную среду, культивируя ночь). На третий день менять жидкость и проверять плотность клеток.

2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.

a) Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

b) Добавить 1 мл пищеварительного раствора (0,25% Trypsin - 0.02 - TA) в питательную бутылку, чтобы пищеварительная жидкость проникла во все клетки, поместить питательную бутылку в инкубатор 37°C для переваривания 1 - 3 мин (в зависимости от пищеварения клетки), затем наблюдать пищеварение клетки под микроскопом, если большая часть клетки округлена и выпадает, быстро вернуть консоль, несколько ударов по питательной бутылке после добавления 2 - 3 мл играть в полную питательную среду, чтобы прекратить пищеварение.

c) После мягкого выравнивания в стерильную центрифужную трубку, 1000 rpm центрифуга 5 мин, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья равномерно.

d) Разделите клеточную суспензию в новую чашку или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды, в пропорции 1: 2 и поместите в инкубатор для культивирования.

Сосредоточьтесь на стенных клетках:

Обязательно нужно помыть PBS.

Клетки наблюдают несколько раз больше, чтобы овладеть временем, не прекращая переваривание и не дуя, пока клетки не выпадают в основном, так что клетки легче дифференцируются и умирают.

Не пытайтесь постоянно бить клетки.

3) Замораживание клеток: Когда клетки растут в хорошем состоянии, может проводиться замораживание клеток. В качестве примера можно привести следующие бутылки T25;

a) Сбор клеточной и клеточной питательной жидкости, в стерильную центрифужную трубку, в условиях 1000 rpm центрифуга 4 мин., отбросить очищающую жидкость, очистить ее PBS снова, отказаться от PBS, провести подсчет клеток.

b) В соответствии с количеством клеток добавить бесссывороточный клеточный замораживающий раствор, так что плотность клеток 1×10 ^ 6~ 1×10 ^ 7 / мл, мягко перемешивается, каждая замороженная трубка замораживает 1 мл клеточной суспензии, обратите внимание, что замороженная трубка хорошо идентифицирована.

c) Поместите трубку замораживания в холодильник с температурой 80°C и переведите ее на хранение жидким азотом через 24 часа. Запишите расположение замороженной трубки, чтобы получить ее в следующий раз.

IV. Повышение внимания

1) Возникновение проблем с клетками, повторное повторение ситуации

a) различные проблемы, возникающие на пути транспортировки клеток, потеря клеток, повреждение корпуса бутылки, серьезная утечка питательной жидкости и т. Д. Повторные вспышки;

b) проблема клеточного загрязнения, пожалуйста, в течение 3 дней после получения продукта, чтобы представить нам реальные экспериментальные результаты, проверить и повторно отправить;

c) через 2 часа после статического состояния клеток, отправленных при комнатной температуре, через 2 дня после восстановления клеток, отправленных с замораживанием сухого льда, подавляющее большинство клеток не выжило (необходимо предоставить реальные и четкие фотографии клеточного состояния), повторная отправка;

d) сухой лед замораживает отправленные клетки через 2 дня после восстановления или при комнатной температуре отправленные клетки остаются в состоянии покоя в течение 2 часов и не вскрыты, загрязнение, повторные вспышки;

e) проблема клеточной активности, пожалуйста, представьте нам реальные экспериментальные результаты в течение 7 дней после получения продукта, используйте метод синего крашения, чтобы определить жизнеспособность клеток, и ежедневные фотографии клеток, которые будут проверены и повторно отправлены;

f) В день получения клетки, а также на 2 - 3 - й день, пожалуйста, сфотографируйте, 3 - й день без уведомления, считается, что продукт соответствует. Возникновение проблем в течение 4 - 7 дней требует предоставления фотографий первых 3 дней получения клетки и фотографий проблем, возникающих в клетке, а также подробных шагов, связанных с операциями, связанными с клеткой, и общения с техническим персоналом, который определяет нашу ответственность за повторную отправку.

2) Случаи, когда возникают проблемы с клетками, которые не воспроизводятся

a) Клиентская операция вызывает клеточное загрязнение, не повторяется;

b) Клиент совершает серьезные ошибки в работе, приводящие к плохому состоянию клетки, без повторной отправки;

c) плохое состояние клеток, вызванное не рекомендованной нами системой клеточной культуры, не повторяется;

d) Клеточное состояние плохое, не дает реалистичных и четких фотографий клеточного состояния за 3 дня до культивирования, не пересылает;

e) клеточная культура при другой обработке приводит к возникновению проблем в клетках, не повторяется;

f) получает клетки и обнаруживает проблемы в общении с обслуживающим персоналом в течение периода, превышающего 7 дней, без повторной отправки;

g) В зависимости от конкретных обстоятельств.

V. ПРИМЕЧАНИЯ

Все клетки животных считаются потенциально биологически опасными и должны работать в рамках вторичной станции биобезопасности, и обратите внимание на защиту, и все отходы и сосуды, подвергшиеся воздействию этой клетки, должны быть стерилизованы, прежде чем они могут быть выброшены.

Рекомендуется всегда использовать защитные перчатки, одежду и защитные маски при восстановлении замороженных клеток. Примечание: Замораживающая трубка, погруженная в жидкий азот, просачивается и медленно заполняется жидким азотом. При размораживании жидкий азот превращается в газовую фазу, что может привести к взрыву контейнера или сдуванию его крышки опасной силой, что приведет к образованию летающих обломков, наносящих ущерб людям.

Клетка предназначена только для научного использования! Инструкция только для справки на основе фактического описания прибытия!