Флуоресцентная дозировка PCR

Вирус свиного кольцафлуоресцентный дозированный реактив PCR типа 1
Свиний цирковирус 1 (PCV-1)

Продукты и характеристики:
Флуоресцентная дозировка PCRОбладает следующими характеристиками:

1. Для использования сразу же после открытия пользователю необходимо предоставить только образец вируса.

2. Специализированные экстракты, разработанные в соответствии с консервативной последовательностью красителей типа 1 свиного циркулярного вируса, не имеют перекрестных реакций с соответствующими вирусами.

Чувствительность может достигать нескольких сотен копий / реакций.

4. Одна трубка флуоресцентного количественного теста PCR, чтобы избежать последующего загрязнения.

5. В этом наборе достаточно флуоресцентной дозы PCR для 50 реакционных систем мощностью 20 мкл.

6.Данный продукт предназначен только для научных исследований и не может быть использован для клинической диагностики.

Транспорт и хранениеА. Криогенный транспорт,20°C Сохранение, срок действия один годА.

Собственный реактивА. Шаблоны ДНК, 10×ROX (в зависимости от модели, см. метод использования).

способ применения I. СОДЕРЖАНИЕРазбавлениеПоложительный тест PCR(В10E2 - 10E7 Копии / мкл Эти 6 10 - кратное разбавление в качестве примера)

1. Примечание: Поскольку концентрация стандартного продукта очень высока, следующие операции разбавления должны проводиться в отдельной области и не должны загрязнять образец или другие компоненты настоящего комплекта). Чтобы повысить стабильность продукта и избежать распространения инфекционных патогенов, этот продукт не предоставляет живых образцов для положительного контроля, а только фрагменты ДНК, которые могут быть использованы непосредственно в качестве положительного контроля.

2. Маркировать 6 центрифуг, соответственно 7, 6, 5, 4, 3, 2.

3. Добавьте раствор для разбавления 45 мкл флуоресцентного PCR специального шаблона с головкой с сердечником (предпочтительно с головкой с сердечником, то же самое ниже).

Добавьте 5 мкл 1 × 10E8 копий / мкл положительного контраста в трубку 7, получите полное сотрясение в течение 1 минуты и получите 1 × 10E7 копий / мкл положительного контраста. Поставьте лед для использования.

5. Смените головку пистолета, добавьте 5 мкл 1 × 10 E7 копий / мкл положительного контраста в трубку № 6 (полученного в результате предыдущего разбавления), получите полное сотрясение в течение 1 минуты и получите 1 × 10 E6 копий / мкл положительного контраста. Поставьте лед для использования.

Смените головку, добавьте 5 мкл 1 × 10E6 копий / мкл положительного контраста в 5 - ю трубку, получите полное сотрясение в течение 1 минуты и получите 1 × 10E5 копий / мкл положительного контраста. Поставьте лед для использования.

Повторите вышеприведенные действия до получения положительного контраста с 6 степенями разбавления. Поставьте лед для использования.

II. ОбразецПодготовка ДНКА.

8. Если имеется N образцов, необходимо настроить N + 2 экстракции, и один из них является ПК (образец готов к положительному контролю),

Один из них -NC (образец подготовлен для отрицательного контроля). Номер 4 (с концентрацией 1 × 10 E4 / мкл, 10 мкл = 10 000 копий) или № 5 (с концентрацией 1 × 10 E5 / мкл, 10 мкл = 100 000 копий), которые могут быть получены с использованием 10 мкл плюс определенное количество воды, чтобы общий объем был таким же, как и объем, требуемый для каждой подготовки, и использовался в качестве ПК.

9. Очистить образцы методом отбораDNA， Этот набор совместим с большинством наборов для взятия вирусной ДНК на рынке. Вы также можете приобрести DNAout, однотрубчатый вирус компании или его обновленную версию DNAout. Этот комплект бесплатно подарен 15 раз DNAOutА.

III. УСТАНОВЛЕНИЕРеакция qPCR (система 20 мкл, выполняется в камере подготовки проб):

10. Если толькоПри 1 повторе отметьте N + 9 труб PCR, из которых N + 2 используются для N + 2, полученных на предыдущем этапе

Образец,Один используется для отрицательного теста PCR, а шесть - для положительного теста PCR. Если вы делаете 2 - 3 повтора, количество настроек реакции увеличивается соответственно в 2 или 3 раза.

11. Добавить ингредиенты в маркировочную трубку, нажав следующую таблицу (эта таблица содержит только одно повторение. Положительный контраст устанавливается только после того, как трубка образца и отрицательный контроль установлены, а положительный контрольный образец добавляется после того, как все трубки закрываются крышкой для хранения):

примечание:: Только приборы ABI7500, 7700 и 7900 требуют ROX в качестве сравнения, другие флуоресцентные приборы PCR (например, iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 И LightCycler480) Не требуется ROX, вместо него используется вода.

Закройте крышкой и садитесь на борт, выполните PCR по следующим параметрам (конкретные параметры PCR могут быть оптимизированы самостоятельно в зависимости от прибора).

13. Сбор данных

Операции выполняются в соответствии с процедурами, рекомендованными используемым прибором. Флуоресцентные красители, содержащиеся в этом продукте, не соединяютсяПри ДНК максимальный спектр поглощения составляет 471 нм, при связывании с ДНК максимальный спектр поглощения - 500 нм, а максимальный спектр излучения - 530 нм. Сбор сигналов может быть установлен на стадии композитности или удлинения.

IV. Обработка данных:

14. Если этот комплект используется для количественного тестирования, то для построения стандартной кривой используется значение log положительной контрольной концентрации в качестве горизонтальной оси, а значение Ct - вертикальной оси. Значение log концентрации ДНК в образце выводится из стандартной кривой на основе значения Ct в тестируемом образце.

15. Если настоящий комплект используется для качественного тестирования, в ходе которого определяется только положительный или отрицательный результат, то отрицательный контрольный Ct должен быть не менее 40. Положительный контраст должен иметь флуоресцентный логарифмический рост, типичную кривую усиления, значение Ct должно быть меньше или равно 30. Обращение с обследованными образцами является отрицательным, если Ct превышает или равен 40, и положительным, если он меньше или равен 35. Если между 35 и 40, повторите это один раз. Значение Ct в повторных экспериментах было отрицательным, если оно было больше или равно 40, и положительным, если оно было меньше 40.

Только для научного использования, не может использоваться для клинических испытаний и лечения.