Тестирование коэффициента увядания Caspase - 389

Тестирование коэффициента увядания Caspase - 389

Каспазе3

КаспазеДа - семейство протеаза, которое играет важную роль в клеточном апоптозе. Caspase3, также известный как CPP32, является ключевым ферментом в процессе клеточного апоптоза, который может вырезать procaspase2.6.7 и 9 и может напрямую и специфично вырезать многие субстраты caspase, в том числе PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolin И Фодрин ждет. Эти белковые сдвиги, опосредованные caspase 3, являются важной частью молекулярного механизма цитопатии. Caspase 3 также играет ключевую роль в процессе отмирания ядра, включая хроматин.

Сжатие, * * фрагментация ДНК и т.д. Caspase 3 также играет ключевую роль в клеточном пузыре (Cell blebbing).

Принцип обнаружения, основанный на casepase 3, может катализировать субстрат AC - DEVD - pNA для получения желтой pNA (- itroaniline), что позволяет определить активность caspase 3 путем измерения поглощения света. PNA имеет сильное поглощение вблизи 405 нм. Стандартная кривая, сделанная со ссылкой на pNA желтого продукта, может использоваться в качестве стандартного продукта для количественной оценки активности ферментов Caspase 3.

Каспаза-8

Caspase 8, как правило, присутствует в виде ферментана и активируется во время передачи сигнала цитопатии, Caspase 8 считается каспасом вверх по течению во время передачи сигнала цитопатии, а caspase 8 активируется во время цитопатии при посредничестве Fas - receptor и TNFR - 1, образуя димер, состоящий из p18 и p10, который дополнительно активирует Caspase 4, caspase 6 ниже по течению. Скачать Caspase 9 и Caspase 10. Этот метод основан на Caspase 8, катализирующем субстрат AC - IETD - pNA для получения желтого pNA (- nitraniline), что позволяет определить активность Caspase 8 путем измерения поглощения света. PNA имеет сильное поглощение вблизи 405 нм. Значение OD в 405 нм для проб может быть рассчитано на основе стандартной кривой, созданной pNA, чтобы вычислить активность фермента Caspase 8 в образце.

Каспаз-9

Caspase 9, также известный как ICE - LAP6 или Mch6, является клеткой.УмиратьПередача сигнала вверх по течению от Caspase. После того, как митохондрии высвобождают цитохром c, caspase 9 может образовывать комплекс с цитохромом C и Apaf1, которые активируются одновременно. Активированный caspase 9 активирует Caspase 3, ключевой фермент цитопатии, что способствует последующему сигналу цитопатии. Активация Caspase 9 может регулироваться фосфорилированием.

Этот метод основан на Caspase 9, катализирующей субстрате AC - LEHD - pNA, которая производит « сырую желтую pNA (p - nitroaniline»), которая может быть обнаружена путем измерения поглощения света.

Активность Caspase 9. PNA имеет сильное поглощение вблизи 405 нм. Значение OD в 405 нм для проб может быть рассчитано на основе стандартной кривой, созданной pNA, чтобы вычислить активность фермента Caspase 9 в образце.

Каспаз1

Каспазе2

Каспазе4

Каспазе6

Коэффициент смерти Caspase3 / 8 / 9 Тестовые образцы готовы:

1) Образцы клеток: взять 1x107 клеток (около 1 T25 клеточной массы в питательной бутылке), 600 г 4°C центрифуг 5 минут для сбора клеток, тщательно отсасывать верхнюю очистку, PBS промыть один раз. После высасывания верхняя очистка, каждая трубка образца клеток добавляется в 100 u / крекинг жидкости для повторного взвешивания осаждения, трещина в ледяной ванне в течение 15 минут. 4°C 16000 г центрифуги в течение 10 - 15 минут, чтобы переместить верхнюю очистку в предварительно охлажденную центробежную трубку ледяной ванны. Немедленно измерьте ферментную активность Caspase 3 или сохраните образец при 70°C. В то же время можно взять небольшое количество образцов для определения концентрации белка методом Брэдфорда, чтобы максимизировать концентрацию белка до 1 - 3 мг / мл.

2) Образцы тканей: около 100ul на 10 мг ткани добавляется в раствор для крекинга, который равномерно растворяется на ледяной ванне стеклянным симулятором. Затем равномерный раствор переносится в центробежную трубку объемом 1,5 мл), и ледяная ванна трескается в течение 5 минут. 4°C 16000 г центрифуги в течение 10 - 15 минут, чтобы переместить верхнюю очистку в предварительно охлажденную центробежную трубку ледяной ванны. Немедленное определение активности фермента Caspase 3 или сохранение до - 70°C

Образец. В то же время можно взять небольшое количество образцов для определения концентрации белка методом Брэдфорда, чтобы максимизировать концентрацию белка до 1 - 3 мг / мл.

Стандартная кривая обнаружения активности Caspase - 3

Экспериментальный цикл: 7 - 10 рабочих дней для завершения, повторное тестирование льгот.

Внимание клиентов

1.Антитела: Предварительная консультацияШанхайский научно - исследовательскийБиологические, чтобы определить род антитела и наличие этого антитела для использования. Если это не может быть согласовано обеими сторонами, клиент сам покупает и предлагает или наша компания покупает;

2. Сбор и хранение образцов:

(1) Образцы тканей: свежие ткани помещаются в жидкий азот или хранятся при 70 градусах, ткани не менее 100 мг (примерно размер зеленой фасоли);

Культивирование клеток: путем подсчета клеток взять не менее 00000 клеток в трубке EP, добавить 0,5 мл физиологического солевого раствора или протеинового протектора, смешать и сохранить в холодильнике (- 70°C, чтобы избежать повторной заморозки);

3) Образцы клеток крови: после сохранения образцов крови в антикоагулянтных трубах или выделения клеток лимфоцитарным сепаратором добавляется 0,5 мл физиологического солевого раствора или протеинового протектора для сохранения (70 °C может сохраняться в течение длительного времени, избегая повторной заморозки)

(4) Образец сыворотки или клеточной питательной жидкости: после центробежного удаления примесей взят и очищен в трубку EP, сохранен (выше 4 °C может храниться 15 - 20 дней, 70 °C может сохраняться в течение длительного времени, избегая повторного замораживания и таяния)

Перевозка образцов: Отправить образцы можно любым из следующих способов

Образцы тканей, клеток транспортируются сухим льдом или в пакетах со льдом после добавления протеинов;

2) образцы клеток также могут быть отправлены непосредственно в бутылку для культивирования экспресс - почтой (уплотнение гарантирует, что не загрязняет, питательная жидкость не течет, клетки не должны расти слишком полными, около 50%, заполнены питательной жидкостью);

(3) Сыворотка или верхняя очищающая жидкость доставляется непосредственно в мешках со льдом (уплотнение гарантирует, что жидкость не просачивается, в зависимости от расстояния, близкого к 2 - 3 дням).

Экспериментальные услуги: