Эксперименты по обнаружению желатиназы спектра MMP (2 / 9)

Эксперименты по обнаружению желатиназы спектра MMP (2 / 9)

Ферментная спектроскопия (Zymography) обнаруживает активность MMP - 2 и MMP - 9 на основе теста протеазы SDS - PAGE электрофореза и окрашивания антифазным гелем с чувствительностью до 10 pg, что выше, чем метод ELISA.

Основные принципы и процедуры: отделить образцы, содержащие протеазу, гелем SDS - PAGE с коллагеновой базой, удалить гель и ферментную реакцию после электрофореза, инкубация Буфера, окрашивание и обесцвечивание геля. Гель глубоко окрашен из - за содержания донного белка, образуя темный фон, но в месте, где есть полоса протеазы, протеаза разлагает основной белок в геле и, следовательно, не окрашивается, образуя прозрачную область, которая может одновременно указывать местоположение MMP - 2, MMP - 9 (ферментный спектр), может обнаружить, что образец имеет кровь, экссудат, клеточный экстракт и так далее.

Цикл обслуживания: 10 рабочих дней

Результаты предоставлены: отчет о результатах, репрезентативные изображения, рабочий процесс и информация о соответствующем приборе реагента.

Эксперименты по обнаружению желатиназы спектра MMP (2 / 9)При выборке необходимо знать:

1) Клиент информирует экспериментальную группировку, номер и фоновую проектную информацию, конкретную просьбу заранее указать;

2) Сбор, хранение и транспортировка образцов:

(1) Образцы тканей: свежие ткани помещаются в жидкий азот или хранятся при 70 градусах, ткани не менее 100 мг;

Культивирование клеток: взятие не менее 2x106 клеток в трубке EP путем подсчета клеток, добавление 0,5 мл физиологического соленого раствора, усредненное и сохраненное в холодильнике (- 70°C, чтобы избежать повторной заморозки);

3) Образцы клеток крови: после сохранения образцов крови в антикоагулянтных трубах или выделения клеток лимфоцитарным сепаратором добавляется 0,5 мл физиологического солевого раствора, который сохраняется (70 °C может сохраняться в течение длительного времени, избегая повторной заморозки и таяния)

(4) Образцы сыворотки или клеточной питательной жидкости: после центробежного удаления примесей взята очищенная EP трубка, сохранена (49C может храниться 15 - 20 дней, 70°C может сохраняться в течение длительного времени, избегая повторного замораживания и таяния)

4) Перевозка образцов:

Образцы тканей и клеток транспортируются сухим льдом;

2) образцы клеток также могут быть отправлены непосредственно в бутылку для культивирования (герметичность гарантирует, что она не загрязнена, питательная жидкость не течет);

Сыворотка или очищающая жидкость отправляются непосредственно в пакетах со льдом (расстояние до места доставки составляет почти 2 - 3 дня).

Клиент должен знать:

Тестовая система содержит положительную ссылку или эндометрий, цитату, содержащую белковую экстракцию

Внимание экспериментам:

При приготовлении полиакриламида следует обратить внимание на удаление пузырьков.

2.Активность спектра желатиназы зависит от таких факторов, как ионы кальция, ионы цинка и PH, поэтому приготовление буфера должно быть строго точным, насколько это возможно с использованием сверхчистой воды, температура инкубации также хорошо освоена.

3.С большой расчёской

PH инкубационного раствора составляет 7.5-7.6, а сложный TRITON имеет хлопчатобумажные образования в течение длительного времени, поэтому в эксперименте старайтесь использовать свежие конфигурации.

37 градусов инкубации не должны находиться в инкубаторе CO2, так как это изменяет PH инкубатора, достаточно в обычном инкубаторе.

Желатин нужно хранить при 4 градусах и использовать в течение недели после установки

Экспериментальные услуги: