Рак эндометрия человека EFE184

Раковые клетки эндометрия человекаЭФЭ184

Введение:Клеточная линия EFE184 была создана из брюшной воды 69 - летней женщины с рецидивом эндометриального рака. Клетки имеют форму однослойных эпителиальных клеток, которые растут очень медленно. Клеточная линия EFE184 может быть использована в 3D - культуре клеток и исследованиях рака.

артикулА.ВС-С1480

спецификацияА.1 × 10 ⁶Клетки / T25 Культурные бутылки

Основная информация о клетках

- Клеточный источник: на месте: матка; Место переноса: асцит

- Клеточная морфология: эпителиальный клеточный образец, рост стенок

- Содержание клеток: > 1×10⁶Клетки / бутылки

- Спецификации упаковки:: T25 Культурные бутылки / 1 мл охлаждающей трубки

- Применение продукции: только для научных целей,Его нельзя использовать в качестве лечебного средства для лечения болезней животных или людей.

II. Среда и условия культивирования

1. Культурные среды

Среда RPMI 1640; 10% коровьей сыворотки; 1% Двойное сопротивление

Рекомендуемая сыворотка:WinSera FBS500-WP-002

2. Условия культивирования

- Газовая фаза: температура 95% воздуха + 5% CO2C: 37°C; Влажность инкубатора: 70 - 80%

3. Замораживание и хранение

- Замороженная жидкость: 90% сыворотка коровьего скота + 10% DMSO (в настоящее время используется)

- Условия хранения: долгосрочное хранение жидкого азота

III. ФОРМА ПЕРЕВОЗКИ И ПРИНИМАЕМАЯ ПОДХОД

Доставка при комнатной температуре (T25 бутылок живых клеток)

Получив клетку, сначала да. T25 Дезинфекция поверхностей корпуса бутылки; Поместите питательную бутылку в инкубатор на 2 - 3 часа; Наблюдайте за плотностью клеток и состоянием их роста и получайте 2 - 3 четких снимка для обратной связи с продажами; Достижение стандарта плотности клеток может быть передано, соотношение ранней передачи рекомендуется 1: 2; После того, как клетки снова вырастут, одна целая бутылка клеток будет заморожена до 1 мл замороженной трубки, а другая продолжит передачу; Рекомендуется после многократного замораживания 2 - 3 семенных клеток проводить эксперименты по амплификации, чтобы избежать разрушения клеток из - за чрезвычайной ситуации.

Примечание: Транспортные питательные среды (поливные питательные среды) больше не могут использоваться для культивирования клеток, замените их новыми питательными средами, подготовленными в соответствии с условиями культивирования клеток в инструкции. Рекомендации по последующей передаче клеток. T25 Культурные бутылки передаются по 1: 2.

2. Отправка сухого льда (замороженные клетки трубки)

Обычная отгрузка для 2 замороженные трубки, рекомендуется восстановить 1, сохранить 1 резерв; Если поддержка восстановления не удалась, строго в соответствии со стандартным процессом восстановления производителя, чтобы управлять второй; Если оба не удается восстановить, немедленно сохраните фотографии всего процесса восстановления и время, чтобы сообщить об обработке продаж.

IV. Этапы клеточной культуры

1. Реанимация замороженных клеток

- Поместите 1 мл клеточной суспензионной замороженной трубки в водяную ванну при температуре 37°C, которая быстро раскачивается до оттаивания;

- Добавление мягкого смешивания в центробежные трубки с питательной средой 4 - 6 мл;

- 1000RPM центрифуга 3 - 5 минут, сбрасывание очищающей жидкости;

- повторное подвешивание клеток питательной средой путем введения в сосуды / чашки Петри, содержащие 6 - 8 мл питательной среды;

- Культивирование при температуре 37°C на ночь, наблюдение за состоянием и плотностью роста клеток под микроскопом на следующий день.

2. Для клеточной транскрипции стенок можно сослаться на следующие методы: (плотность клеток 80 - 90% может передаваться)

- Отказ от культивирования верхней очистки и промывание клеток PBS без ионов кальция и магния 1 - 2 раза.

- Добавьте 0,25% (w / v) yi протеаза - 0,53 мм EDTA в культурную бутылку (T25 флакон 1 - 2 мл, T75 флакон 2 - 3 мл), поместите в инкубатор 37°C, чтобы переварить 1 - 2 минуты (трудно перевариваемые клетки могут надлежащим образом продлить время переваривания), затем наблюдайте пищеварение клеток под микроскопом, если большая часть клеток округлится и выпадает, быстро верните операционный стол, после нескольких ударов по бутылке добавьте 3 - 4 мл питательной среды, содержащей 10% FBS, чтобы прекратить пищеварение.

- Аккуратно выровнять и высосать, центрифугировать 3 - 5 мин в условиях 1000RPM, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья. Клеточная суспензия делится в новой бутылке T25 в соотношении 1: 2, добавляя 6 - 8 мл новой среды, настроенной в соответствии с требованиями инструкции для поддержания жизнеспособности роста клеток, а последующая передача осуществляется в соотношении 1: 2 - 1: 5 в зависимости от фактической ситуации.

3. Для суспензионных клеток передача может ссылаться на следующие методы:

- ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуемая передача второго поколения составляет 1: 2, а доля последующих поколений может быть определена по собственному усмотрению в соответствии с потребностями клиента.

- Способ 1: Сбор клеток, центрифугирование в течение 4 минут в условиях 1000 RPM, удаление очищающей жидкости, добавление 1 - 2 мл питательной жидкости после выдувания, клеточная суспензия в пропорции от 1: 2 до 1: 5 в новую чашку или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды.

- Способ 2: Можно выбрать половину способа обмена жидкости, после удаления половины питательной среды остаточные клетки подвешиваются, а клеточная суспензия распределяется в новую чашку или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды, в пропорциях от 1: 2 до 1: 3.

Замораживание клеток: После получения клетки рекомендуется заморозить партию клеточных семян для последующего экспериментального использования при культивировании первых трех поколений.

V. Меры предосторожности в области биобезопасности

Все клетки животных считаются потенциально биологически опасными и должны работать в шкафах биологической безопасности класса R для индивидуальной защиты; Все отходы и сосуды, подвергшиеся воздействию клеток, должны быть стерилизованы, прежде чем они могут быть выброшены.

При восстановлении замороженных клеток обязательно носите защитные перчатки, защитный фут и анти - hu маску; Замораживание трубки в жидком азоте может привести к утечке и вливанию жидкого азота, размораживание жидкого азота может легко привести к разрыву контейнера, краху крышки бутылки, вызванному царапинами и другими травмами, работа должна быть осторожной.