Устойчивый штамм HO - 8910 / DDP

Название клетки:Рак яичников человека ХО-8910/ДДП　

Номер груза:WS154 (HO - 8910) Идентификация STR)

спецификацияКультурные бутылки 1×10 ⁶cells / T25

Применение: только для научных целей

I. Введение клеток

Клетка являетсяКлетки HO - 8910 создают устойчивые к DDP лекарственные штаммы.

II. Особенности клеток

1) Источник: рак яичников

2) Формы: эпителиальные клеточные образцы, рост биби

3) Содержание: > Количество клеток 1x106

4) Технические характеристики: T25 или 1 мл упаковка для замороженных труб

5) Применение: только для научного использования.

III. Подготовка питательных сред и условий замораживания культур

1)Подробности см. в инструкции.

Сыворотку рекомендуем. FBS500-WP-002

2) условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; Углекислыйгаз, 5%. Температура: 37 градусов Цельсия, влажность инкубатора 70% - 80%.

3) Замороженная жидкость: 90% сыворотки, 10% DMSO, в настоящее время используется существующее распределение.

IV.Клеточная обработка

1) Реанимация замороженных клеток

Будет содержатьЗамораживающая трубка с 1 мл клеточной суспензией быстро размораживается и размораживается в водяной ванне при температуре 37°C, добавляя ее в центробежную трубку, содержащую 4 - 6 мл питательной среды. Центрифугирование 3 - 5 мин в условиях 1000RPM, сбрасывание верхней жидкости, питательная среда тяжелых суспензий клеток. Затем клеточную суспензию добавляют в культурную бутылку (или чашку Петри) с 6 - 8 мл питательной среды с культурой 37°C на ночь. На следующий день под микроскопом наблюдался рост и плотность клеток.

2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.

Для клеточной передачи можно использовать следующие методы.

1. Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

2. Добавьте 0,25% (w / v) панкреатин dan - 0,53 мм EDTA в культурную бутылку (T25 флакон 1 - 2 мл, T75 флакон 2 - 3 мл), поместите в инкубатор 37°C для переваривания в течение 1 - 2 минут (трудно перевариваемые клетки могут надлежащим образом продлить время переваривания), затем наблюдайте пищеварение клеток под микроскопом, если большая часть клетки округлится и выпадает, быстро возьмите операционный стол, после нескольких ударов по питательной бутылке добавьте 3 - 4 мл питательной среды, содержащей 10% FBS, чтобы прекратить пищеварение.

3. Аккуратно выровнять и высосать, центрифугировать 3 - 5 мин в условиях 1000 RPM, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья равномерно. Клеточная суспензия делится на новую бутылку T25 в соотношении 1: 2, добавляя 6 - 8 мл новой среды, настроенной в соответствии с требованиями инструкции для поддержания жизнеспособности роста клеток, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 ~ 1: 5.

Внимание: Клеточная передачаПосле 1 - 2 раз все еще может поддерживать размножение, вы можете увеличить концентрацию препарата до 0,5 мкг / мл для продолжения культивирования; Если во время этого процесса клетки перестают размножаться и находятся в плохом состоянии, необходимо снизить концентрацию препарата (снизить вдвое концентрацию препарата) или использовать культуры среды, не содержащие лекарства, до плотности клеток около 8×105 / мл, а затем заменить их на требуемую концентрацию препарата, когда состояние роста лучше.

3) Замораживание клеток: после получения клетки рекомендуется заморозить партию клеточных семян при культивировании первых трех поколений для последующего экспериментального использования.

нижеT25 Бутылка Пример

При замораживании клетки собирают переваренные клетки в центрифужную трубку в соответствии с процессом клеточной передачи, и плотность замораживания клетки может быть определена с помощью счетчиков клеток крови. Рекомендуемая плотность замерзания для обычных клеток составляет 1 × 106 ~ 1 × 107 живых клеток / мл.

1000rpm центрифуга 3 - 5 мин, удалите верхнюю очистку. Используйте приготовленную клеточную рефрижераторную жидкость для повторной суспензии клеток, в соответствии с 1 мл замороженной жидкости содержит 1 × 106 ~ 1 × 107 живых клеток / мл, выделенных в замороженную трубку, чтобы распределить клетки в замороженную трубку, отметить имя, алгебру, дату и другую информацию.

Примечание: В процессе замораживания клеток препарат добавлять нельзя.

2. Поместить замороженные клетки в программные охлаждающие коробки и провести ночь в холодильнике с температурой 80 градусов, после чего перевести в емкость с жидким азотом для хранения. В то же время для последующего поиска и использования регистрируется местонахождение криогенных труб в контейнерах с жидким азотом.

Рак яичников человека ХО-8910/ДДП