Клетка глиомы человека U373

Клетки глиомы человекаU373

Введение:Проблемная клеточная линия: неправильно идентифицирована/загрязнена. Это производное U-251MG. Эта клеточная линия не является первоначальной клеточной линией астроцитомы, созданной в 1973 году в Уппсальском университете. См. U-373MG Uppsala (Cellosaurus=CVCL_2818) для оригинальной клеточной линии U-373MG.

артикулА.ВС-С1465

спецификацияА.1 × 10 ⁶Клетки / T25 Культурные бутылки

Основная информация о клетках

- Клеточный источник: мозг

- Клеточная морфология: эпителиальный клеточный образец, рост стенок

- Содержание клеток: > 1×10⁶Клетки / бутылки

- Технические характеристики упаковки: T25 Культурные бутылки / 1 мл замороженных труб

- Применение продукции: только для научных целей,Его нельзя использовать в качестве лечебного средства для лечения болезней животных или людей.

II. Правила обращения с клетками при комнатной температуре в день получения

Шаг: Получение и проверка

· Этапы 1, 2 постановляющей части (общий процесс).

Шаг 2: Замена питательной среды и сбор клеток

· За стерилизационной бутылкой открывается крышка бутылки на сверхчистом рабочем столе.

• Замена питательных сред, подаренных вместе с товаром.

· Особое внимание: если под микроскопом обнаружено больше клеточной суспензии, все питательные среды в бутылке должны быть перенесены в стерильную центрифужную трубку, центрифуга (например, 1200 rpm, 5 мин) собирает клетки и выбрасывает старые питательные среды.

· После завершения замены или сбора поместите питательную бутылку в инкубатор и оставьте в покое в течение 2 - 3 часов.

Шаг 3: постстатическая обработка (в зависимости от плотности клеток)

III. Функциональные шаги клеточной передачи

А. Стенная клеточная передача

1. Готовность: высасывание старых питательных сред.

2. Промывание: Медленно добавляйте смывной раствор, такой как PBS, вдоль боковой стенки культивирующей бутылки, мягко встряхивая и выбрасывая, удаляя остаточную сыворотку.

3. Пищеварение: Добавьте предварительно разогретый Yi - фермент (например, T25 плюс 1 мл), слегка встряхните, чтобы Yi - фермент покрывал все клетки.

4. Инкубация: переваривание при комнатной температуре около 2 минут (время варьируется в зависимости от клетки).

5. Наблюдение: наблюдение под микроскопом до тех пор, пока 90% клеток не округлится и не выпадет. Если он не достигнут, его можно проверять каждые 30 секунд.

Конец: Когда клетка полностью диссоциируется, сразу же после добавления в нее в два раза больше объема Yi - фермента предварительно нагреваемой питательной среды прекращается пищеварение.

7. Дыхание: мягко надувайте стенку бутылки с помощью переносчика, так что клетка выпадает и рассеивается в одноклеточную суспензию.

8. Центрифугирование: перенос клеточной суспензии в центрифужную трубку, 200 × g центрифуга 3 - 5 минут, отбрасывание вверх очищение.

9. Тяжелая суспензия и вакцинация: тяжелые суспензионные клетки осаждаются небольшим количеством свежих питательных сред и после разбавления в соответствующих пропорциях вводятся в новую бутылку с культурой.

10. Культивирование: помещается в инкубатор для культивирования. Если вы используете обычную крышку бутылки, убедитесь, что крышка бутылки свернута, чтобы облегчить обмен газом.

В. Переменная суспензия

1. Сбор и центрифуга: Перенос всей клеточной суспензии в центробежную трубку, 1000 rpm центрифуга в течение 5 минут, отбросить очищение.

2. Перевисание: Добавьте 1 - 2 мл свежей питательной среды, легкие и тяжелые висячие клетки.

3. Вакцинация: клеточная суспензия передается в новый флакон T25 в пропорции 1: 2 и дополняется общим количеством питательной среды до 5 - 8 мл.

4. Культивирование: помещается в инкубатор для культивирования для продолжения культивирования.

IV. Обработка особых проблем: удаление стенных клеток при транспортировке

Частично плохо прикрепленные к стенке клетки выпадают при транспортировке, что является нормальным явлением и обрабатывается следующим образом:

1. Сбор: Все питательные среды в бутылке переводятся в стерильную центрифужную трубку, центрифуга (1200 rpm, 3 - 5 мин) сбрасывается для очистки.

2. Очистка: повторное подвешивание клеток с помощью PBS, повторное центрифугирование (1200 rpm, 3 - 5 мин) для удаления PBS.

3. Пищеварение: Добавьте около 1 мл 0,25% Yi - фермента, мягко перемешайте (без сильного вдувания), поместите в инкубатор для переваривания в течение 1 - 2 минут.

4. Конец и дисперсия: после извлечения мягкий вдув рассеивает клеточные скопления, быстро добавляя 3 - 5 мл питательной среды, чтобы прекратить пищеварение, центрифуг (1200 rpm, 3 - 5 мин) отбросить очищение.

5. Тяжелая суспензия и вакцинация: добавьте 5 мл питательной среды для тяжелой суспензии и введите пропорционально в новую бутылку / чашку Петри.

6. Наблюдения: Подзеркальное наблюдение. Если клетка представляет собой небольшую группу из одной или только 3 - 5 клеток, она может нормально культивироваться, пока она не вырастет на стенке. - Да.

V. Краткое изложение политики послепродажного обслуживания

Важные советы: Любая аномальная проблема,Время фотографировать.Связь с нами является ключом к послепродажной поддержке.