AU565 Раковые клетки молочной железы / идентификация STR

AU565 Раковые клетки молочной железы / идентификация STR

Презентация клеток

Клеточная линия AU565 была получена из плевральной жидкости у пациентов с раком молочной железы в Оклендской военной биологической лаборатории в Калифорнии. Клеточная линия была создана у тех же пациентов, что и SK - BR - 3 (ATCC HTB - 30). Пациентом была белая женщина, 43 года, с кровью типа А +, которая лечилась лучевой, стероидной, циклиноамидом и 5 - фторумидином. AU565 Клеточная линия расширяется и гиперэкспрессирует ген рака HER - 2 / neu; Он экспрессирует гены рака HER - 3, HER - 4 и p53. Обработка клеток с помощью плесеноловой кислоты (MPA), флюорола 12 - мускатного эфира 13 - ацетата (PMA), зрительно - гуанговой кислоты (RA) или моноклонального антитела TA - 1 для внеклеточного домена белка HER - 2 / neu может вызвать дифференциацию клеток. Обработка клеток AU565 с дифференцирующим фактором Neu (NDF) также вызывает зрелый фенотип, который характеризуется морфологическим внешним видом клеток. Необработанные клетки AU565 имеют плотное ядро и тонкую цитоплазму, в то время как обработанные клетки демонстрируют формы, связанные с дифференцированными фенотипами, такими как плоское крупное ядро, окруженное значительной цитоплазмой.

Клеточные свойства

1) Источник: Белая женщина, 43 - летняя плевральная жидкость

2) Формы: эпителиальный рост стенок

3) Содержание: > Количество клеток 1x106

4) Технические характеристики: T25 или 1 мл упаковка для замороженных труб

5) Применение: только для научного использования.

Перевозка и хранение

Сухой лед транспортирует и восстанавливает жизнеспособные клетки.

(1) 1 мл замороженной трубки упаковки сухого льда транспортировки, после получения 80 градусов холодильника после хранения на ночь в жидкий азот или прямое восстановление, если вы обнаружите, что сухой лед испаряется чистым, крышка замороженной трубки сброшена, повреждена и клетки загрязнены, пожалуйста, немедленно свяжитесь с нами.

(2) T25 Бутылка для восстановления выживших клеток при комнатной температуре отправлена, после получения, в соответствии с методом обработки после приема клетки.

Обработка клеток после приема

1) После получения клетки, 75% стенки бутылки для дезинфекции алкоголя помещает T25 бутылку в инкубатор 37°C примерно 2 - 3h, если вы обнаружите, что бутылка для культивирования повреждена, жидкостный разлив и клетки загрязнены, пожалуйста, свяжитесь с нами вовремя после фотографирования.

2) Подтвердите состояние клетки под микроскопом 4 или 5X, а также сохраните 2 - 3 фотографии только что полученных клеток (10×, 20×) и фотографию внешнего вида культивирующей бутылки в качестве основы для состояния клетки при получении после продажи.

3) Клетки, прикрепленные к стенке: клетки помещаются 2 - 3h в инкубатор с культурой 37°C, под микроскопом наблюдаются рост клеток и прикрепление к стенке, а некоторые из клеток, прикрепленных к стенке, образуются в результате вибрации и выпадения во время экспресс - доставки. Если плотность роста клеток, наблюдаемых под зеркалом, составляет менее 60%, можно удалить питательную среду, наполненную жидкостью в питательной бутылке (если есть не прикрепленные к стенке клетки, которые нуждаются в центробежной рекуперации, повторной суспензии в исходную бутылку), добавить новую полную питательную среду Quan 6 - 8 мл и поместить в клеточную культурную коробку для продолжения культивирования. Если плотность роста клеток составляет более 70% - 80%, клетки могут быть трансформированы. В процессе передачи клетки, которые выпадают из - за вибрации транспорта, нуждаются в центробежной переработке.

4) Примечание: Транспортные питательные среды (поливные питательные среды) больше не могут использоваться для культивирования клеток, пожалуйста, замените их полными питательными средами quan, недавно подготовленными в соответствии с условиями культивирования клеток в инструкции. После получения клетки рекомендуется T25 Культурная бутылка 1: 2 Передача.

AU565 Раковые клетки молочной железы / идентификация STR

I. Подготовка питательных сред и условий замораживания культур

1) Подготовка питательной среды RPMI - 1640 (рекомендуемый iCell - 0002); Качественная сыворотка коровьего скота для плода, 10%; Двойное сопротивление, 1%.

2) условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; Углекислыйгаз, 5%. Температура: 37 градусов Цельсия, влажность инкубатора 70% - 80%.

3) Замороженная жидкость: 90% сыворотки, 10% DMSO, в настоящее время используется существующее распределение.

II. Клеточная обработка:

1) Реанимация замороженных клеток:

Замораживающие трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро размораживаются и размораживаются в водяной ванне при температуре 37°C, добавляются в центробежные трубки, содержащие 4 - 6 мл полной питательной среды. Центрифугирование 3 - 5 мин в условиях 1000RPM, отбрасывание очищающей жидкости, завершение Quan питательной среды тяжелых суспензионных клеток. Затем клеточную суспензию добавляют в культурную бутылку (или чашку Петри) с 6 - 8 мл полной среды quan для культивирования при 37°C на ночь. На следующий день под микроскопом наблюдался рост и плотность клеток.

2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.

Для клеточной передачи можно использовать следующие методы.

1. Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

2. Добавьте 0,25% (w / v) поджелудочного белка mei - 0.53 мМ EDTA в культурную бутылку (T25 флакон 1 - 2 мл, T75 флакон 2 - 3 мл) и поместите его в инкубатор 37°C для переваривания до дисперсии клеточного слоя (обычно в течение 5 - 15 минут), чтобы питательная среда достигла нормального pH (от 7.0 до 7.6), а затем наблюдайте пищеварение клеток под микроскопом, чтобы избежать сгустков, не стучите или не тряси колбу, чтобы перемешать клетки в ожидании разделения клеток. Клетки, которые трудно отделить, могут быть помещены на 37°C для облегчения дисперсии. Если большая часть клетки округляется и выпадает, быстро возвращайте консоль, постучите несколько раз в бутылку и добавьте 3 - 4 мл питательной среды, содержащей 10% FBS, чтобы прекратить пищеварение.

3. Аккуратно выровнять и высосать, центрифугировать 3 - 5 мин в условиях 1000 RPM, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья равномерно. Клеточная суспензия делится на новую бутылку T25 в соотношении 1: 2, добавляя 6 - 8 мл новой полной питательной среды wan, настроенной в соответствии с требованиями инструкции, чтобы поддерживать жизнеспособность роста клеток, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 ~ 1: 5.

3) Замораживание клеток: после получения клетки рекомендуется заморозить партию клеточных семян при культивировании первых трех поколений для последующего экспериментального использования.

В качестве примера можно привести следующие бутылки T25;

При замораживании клетки собирают переваренные клетки в центрифужную трубку в соответствии с процессом клеточной передачи, и плотность замораживания клетки может быть определена с помощью счетчиков клеток крови. Рекомендуемая плотность замерзания для обычных клеток составляет 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 живых клеток / мл.

2.1000rpm центрифуга 3–5 мин, удалить выше очистки. Используйте приготовленную клеточную рефрижераторную жидкость для повторной суспензии клеток, в соответствии с 1 мл замороженной жидкости, содержащей 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 живых клеток / мл, выделенных в одну криогенную трубку, чтобы распределить клетки в криогенную трубку, указав имя, алгебру, дату и другую информацию.

3. Поместить замороженные клетки в программные охлаждающие коробки и провести ночь в холодильнике с температурой 80 градусов, после чего перевести в емкость с жидким азотом для хранения. В то же время для последующего поиска и использования регистрируется местонахождение криогенных труб в контейнерах с жидким азотом.