NCI - H69 Малоклеточный рак легких человека

NCI - H69 Малоклеточный рак легких человека

Презентация клеток

Клеточная линия, основанная на легочной ткани 55 - летнего белого мужчины, является неинтифицированной и будет формировать скопления в мягком агаре, сохраняя форму и ультрамикроструктуру мелкоклеточного рака, а также клеточные характеристики APUD. Клетки собираются и растут, поэтому количество клеток неточно. Клеточная хроматина клетки положительна. Ген N - myc расширяется и имеет мРНК и экспрессию белка. С - myc мРНК имеет более низкий уровень экспрессии, чем белки.

Существует экспрессия c - myb, v - fes, v - fms, c - raf 1, Ha - ras, Ki - ras и N - ras mRNA. Клетки склонны к образованию опухолей с типичными гистологическими характеристиками мелкоклеточного рака у голых крыс. В мягком агаре образуются колонии.

Клеточные свойства

1) Источник: легкие белого мужчины 55 лет

2) Формы: многоклеточный поликластерный суспензионный рост

3) Содержание: > Количество клеток 1x106

4) Технические характеристики: T25 или 1 мл упаковка для замороженных труб

5) Применение: только для научного использования.

Перевозка и хранение

Сухой лед транспортирует и восстанавливает жизнеспособные клетки.

(1) 1 мл замороженной трубки упаковки сухого льда транспортировки, после получения 80 градусов холодильника после хранения на ночь в жидкий азот или прямое восстановление, если вы обнаружите, что сухой лед испаряется чистым, крышка замороженной трубки сброшена, повреждена и клетки загрязнены, пожалуйста, немедленно свяжитесь с нами.

(2) T25 Бутылка для восстановления выживших клеток при комнатной температуре отправлена, после получения, в соответствии с методом обработки после приема клетки.

Обработка клеток после приема

1) После получения клетки, 75% стенки бутылки для дезинфекции алкоголя помещает T25 бутылку в инкубатор 37°C примерно 2 - 3h, если вы обнаружите, что бутылка для культивирования повреждена, жидкостный разлив и клетки загрязнены, пожалуйста, свяжитесь с нами вовремя после фотографирования.

2) Подтвердите состояние клетки под микроскопом 4 или 5X, а также сохраните 2 - 3 фотографии только что полученных клеток (10×, 20×) и фотографию внешнего вида культивирующей бутылки в качестве основы для состояния клетки при получении после продажи.

3) Клетки, прикрепленные к стенке: клетки помещаются 2 - 3h в инкубатор с культурой 37°C, под микроскопом наблюдаются рост клеток и прикрепление к стенке, а некоторые из клеток, прикрепленных к стенке, образуются в результате вибрации и выпадения во время экспресс - доставки. Если плотность роста клеток, наблюдаемых под зеркалом, составляет менее 60%, можно удалить питательную среду, наполненную жидкостью в питательной бутылке (если есть не прикрепленные к стенке клетки, которые нуждаются в центробежной рекуперации, повторной суспензии в исходную бутылку), добавить новую полную питательную среду Quan 6 - 8 мл и поместить в клеточную культурную коробку для продолжения культивирования. Если плотность роста клеток составляет более 70% - 80%, клетки могут быть трансформированы. В процессе передачи клетки, которые выпадают из - за вибрации транспорта, нуждаются в центробежной переработке.

4) Примечание: Транспортные питательные среды (поливные питательные среды) больше не могут использоваться для культивирования клеток, пожалуйста, замените их полными питательными средами quan, недавно подготовленными в соответствии с условиями культивирования клеток в инструкции. После получения клетки рекомендуется T25 Культурная бутылка 1: 2 Передача.

NCI - H69 Малоклеточный рак легких человека

I. Подготовка питательных сред и условий замораживания культур

1) Подготовка питательной среды RPMI - 1640 (рекомендуемый iCell - 0002); Качественная сыворотка коровьего скота для плода, 10%; Двойное сопротивление, 1%.

2) условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; Углекислыйгаз, 5%. Температура: 37 градусов Цельсия, влажность инкубатора 70% - 80%.

3) Замороженная жидкость: 90% сыворотки, 10% DMSO, в настоящее время используется существующее распределение.

II. Клеточная обработка:

1) Реанимация замороженных клеток:

Замораживающие трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро размораживаются и размораживаются в водяной ванне при температуре 37°C, добавляются в центробежные трубки, содержащие 4 - 6 мл полной питательной среды. Центрифугирование 3 - 5 мин в условиях 1000RPM, отбрасывание очищающей жидкости, завершение Quan питательной среды тяжелых суспензионных клеток. Затем клеточную суспензию добавляют в культурную бутылку (или чашку Петри) с 6 - 8 мл полной среды quan для культивирования при 37°C на ночь. На следующий день под микроскопом наблюдался рост и плотность клеток.

2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.

Для суспензионных клеток передатчик может ссылаться на следующие методы

Клетки, растущие во взвешенном состоянии, могут поддерживать состояние роста клеток, добавляя полную питательную среду wan в бутылку с культурой, а плотность клеток, как правило, поддерживается на уровне 1×105 ~ 1×106 / мл (разные клетки имеют разные требования к плотности), чтобы поддерживать нормальный рост клеток. Если требуется флакон, клеточная суспензия может быть собрана в центробежной трубке 1000 rpm, центрифуга 5 мин, отброшена в верхнюю очистку, добавьте 1 - 2 мл питательной жидкости после повторной суспензии и перемешайте клеточную суспензию в новую бутылку T25 в соотношении 1: 2, добавьте 6 - 8 мл в соответствии с требованиями инструкции по конфигурации новой полной питательной среды wan для поддержания жизнеспособности роста клеток, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 ~ 1: 5.

3) Замораживание клеток: после получения клеток рекомендуется заморозить партию клеточных семян при культивировании первых трех поколений для последующего экспериментального использования.

В качестве примера можно привести следующие бутылки T25;

При замораживании клетки собирают переваренные клетки в центрифужную трубку в соответствии с процессом клеточной передачи, и плотность замораживания клетки может быть определена с помощью счетчиков клеток крови. Рекомендуемая плотность замерзания для обычных клеток составляет 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 живых клеток / мл.

2.1000rpm центрифуга 3–5 мин, удалить выше очистки. Используйте приготовленную клеточную рефрижераторную жидкость для повторной суспензии клеток, в соответствии с 1 мл замороженной жидкости, содержащей 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 живых клеток / мл, выделенных в одну криогенную трубку, чтобы распределить клетки в криогенную трубку, указав имя, алгебру, дату и другую информацию.

3. Поместить замороженные клетки в программные охлаждающие коробки и провести ночь в холодильнике с температурой 80 градусов, после чего перевести в емкость с жидким азотом для хранения. В то же время для последующего поиска и использования регистрируется местонахождение криогенных труб в контейнерах с жидким азотом.