Толедо - человек, живущий с большими B - клетками лимфомы.

Толедо - человек, живущий с большими B - клетками лимфомы.

Презентация клеток

Толедо - это B - лимфоцитарная линия, отделенная от периферической крови взрослых белых женщин с диффузной макроклеточной лимфомой (не клетками Ходжкина B) в 1990 году. После большой дозы количественной лиао и трансплантации костного мозга у пациента впоследствии развилась лимфома мозга. Хотя форма клетки похожа на форму лимфомы Беркета, клеткам не хватает типичной хромосомной транслокации лимфомы Беркета. Ядерная форма действительно демонстрирует множество хромосомных искажений. Клетки не экспрессируют поверхностные или цитоплазматические иммуноглобулины. Эти клетки были отрицательными на вирус Epstein - Barr.

Клеточные свойства

1) Источник: B - лимфоциты, выделенные из периферической крови взрослых белых женщин

2) Формы: лимфобластный суспензионный рост

3) Содержание: > Количество клеток 1x106

4) Технические характеристики: T25 или 1 мл упаковка для замороженных труб

5) Применение: только для научного использования.

Перевозка и хранение

Сухой лед транспортирует и восстанавливает жизнеспособные клетки.

(1) 1 мл замороженной трубки упаковки сухого льда транспортировки, после получения 80 градусов холодильника после хранения на ночь в жидкий азот или прямое восстановление, если вы обнаружите, что сухой лед испаряется чистым, крышка замороженной трубки сброшена, повреждена и клетки загрязнены, пожалуйста, немедленно свяжитесь с нами.

(2) T25 Бутылка для восстановления выживших клеток при комнатной температуре отправлена, после получения, в соответствии с методом обработки после приема клетки.

Обработка клеток после приема

1) После получения клетки, 75% стенки бутылки для дезинфекции алкоголя помещает T25 бутылку в инкубатор 37°C примерно 2 - 3h, если вы обнаружите, что бутылка для культивирования повреждена, жидкостный разлив и клетки загрязнены, пожалуйста, свяжитесь с нами вовремя после фотографирования.

2) Подтвердите состояние клетки под микроскопом 4 или 5X, а также сохраните 2 - 3 фотографии только что полученных клеток (10×, 20×) и фотографию внешнего вида культивирующей бутылки в качестве основы для состояния клетки при получении после продажи.

3) Клетки, прикрепленные к стенке: клетки помещаются 2 - 3h в инкубатор с культурой 37°C, под микроскопом наблюдаются рост клеток и прикрепление к стенке, а некоторые из клеток, прикрепленных к стенке, образуются в результате вибрации и выпадения во время экспресс - доставки. Если плотность роста клеток, наблюдаемых под зеркалом, составляет менее 60%, можно удалить питательную среду, наполненную жидкостью в питательной бутылке (если есть не прикрепленные к стенке клетки, которые нуждаются в центробежной рекуперации, повторной суспензии в исходную бутылку), добавить новую полную питательную среду Quan 6 - 8 мл и поместить в клеточную культурную коробку для продолжения культивирования. Если плотность роста клеток составляет более 70% - 80%, клетки могут быть трансформированы. В процессе передачи клетки, которые выпадают из - за вибрации транспорта, нуждаются в центробежной переработке.

4) Примечание: Транспортные питательные среды (поливные питательные среды) больше не могут использоваться для культивирования клеток, пожалуйста, замените их полными питательными средами quan, недавно подготовленными в соответствии с условиями культивирования клеток в инструкции. После получения клетки рекомендуется T25 Культурная бутылка 1: 2 Передача.

Толедо - человек, живущий с большими B - клетками лимфомы.

I. Подготовка питательных сред и условий замораживания культур

1) Подготовка питательной среды RPMI - 1640 (рекомендуемый iCell - 0002); Качественная сыворотка коровьего скота для плода, 10%; Двойное сопротивление, 1%.

Примечание: тяжёлые суспензионные клетки осаждаются с рекомендованной полной питательной средой wan и назначаются в бутылку T25. Важно избегать чрезмерной щелочности питательной среды во время восстановления клеток. Рекомендуется помещать емкость для культивирования, содержащую питательную среду полного роста wan, в инкубатор не менее 15 минут до добавления содержимого флакона, чтобы питательная среда достигла нормального уровня pH (от 7,0 до 7,6).

2) условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; Углекислыйгаз, 5%. Температура: 37 градусов Цельсия, влажность инкубатора 70% - 80%.

3) Замороженная жидкость: 90% сыворотки, 10% DMSO, в настоящее время используется существующее распределение.

II. Клеточная обработка:

1) Реанимация замороженных клеток:

Замораживающие трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро размораживаются и размораживаются в водяной ванне при температуре 37°C, добавляются в центробежные трубки, содержащие 4 - 6 мл полной питательной среды. Центрифугирование 3 - 5 мин в условиях 1000RPM, отбрасывание очищающей жидкости, завершение Quan питательной среды тяжелых суспензионных клеток. Затем клеточную суспензию добавляют в культурную бутылку (или чашку Петри) с 6 - 8 мл полной среды quan для культивирования при 37°C на ночь. На следующий день под микроскопом наблюдался рост и плотность клеток.

2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.

Для клеточной передачи можно использовать следующие методы.

1. Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

2. Добавьте 0,25% (w / v) поджелудочного белка mei - 0.53 мМ EDTA в культурную бутылку (T25 флакон 1 - 2 мл, T75 флакон 2 - 3 мл) и поместите его в инкубатор 37°C для переваривания до дисперсии клеточного слоя (обычно в течение 5 - 15 минут), чтобы питательная среда достигла нормального pH (от 7.0 до 7.6), а затем наблюдайте пищеварение клеток под микроскопом, чтобы избежать сгустков, не стучите или не тряси колбу, чтобы перемешать клетки в ожидании разделения клеток. Клетки, которые трудно отделить, могут быть помещены на 37°C для облегчения дисперсии. Если большая часть клетки округляется и выпадает, быстро возвращайте консоль, постучите несколько раз в бутылку и добавьте 3 - 4 мл питательной среды, содержащей 10% FBS, чтобы прекратить пищеварение.

3. Аккуратно выровнять и высосать, центрифугировать 3 - 5 мин в условиях 1000 RPM, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья равномерно. Клеточная суспензия делится на новую бутылку T25 в соотношении 1: 2, добавляя 6 - 8 мл новой полной питательной среды wan, настроенной в соответствии с требованиями инструкции, чтобы поддерживать жизнеспособность роста клеток, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 ~ 1: 5.

3) Замораживание клеток: после получения клетки рекомендуется заморозить партию клеточных семян при культивировании первых трех поколений для последующего экспериментального использования.

В качестве примера можно привести следующие бутылки T25;

При замораживании клетки собирают переваренные клетки в центрифужную трубку в соответствии с процессом клеточной передачи, и плотность замораживания клетки может быть определена с помощью счетчиков клеток крови. Рекомендуемая плотность замерзания для обычных клеток составляет 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 живых клеток / мл.

2.1000rpm центрифуга 3–5 мин, удалить выше очистки. Используйте приготовленную клеточную рефрижераторную жидкость для повторной суспензии клеток, в соответствии с 1 мл замороженной жидкости, содержащей 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 107 живых клеток / мл, выделенных в одну криогенную трубку, чтобы распределить клетки в криогенную трубку, указав имя, алгебру, дату и другую информацию.

3. Поместить замороженные клетки в программные охлаждающие коробки и провести ночь в холодильнике с температурой 80 градусов, после чего перевести в емкость с жидким азотом для хранения. В то же время для последующего поиска и использования регистрируется местонахождение криогенных труб в контейнерах с жидким азотом.