- Электронная почта
- Телефон
- Адрес
Категории продукта
Шанхайская биотехнологическая компания Ланцзянь
обнаружение гибридизации на месте
ДоговариваемыйОбновление на05/06
- Модель
- Природа производителя
- Производители
- Категория продукта
- Место происхождения
Обзор
Основной принцип обнаружения гибридизации на месте заключается в том, чтобы использовать дополнительные последовательности оснований между молекулами нуклеиновой кислоты, радиоактивные или нерадиоактивные экзогенные нуклеиновые кислоты (т.е. зонды) и ткани, клетки или хромосомы, которые должны быть измерены с помощью комплементарных пар ДНК или РНК, синтезировать специализированные гибриды нуклеиновой кислоты, которые с помощью определенных методов обнаружения показывают местоположение нуклеиновой кислоты на ткани, клетке или хромосоме.
Подробности о продукте
Методы и этапы эксперимента FISH
I. Дегенерация зонда
При температуре 5 мин зонд помещается в водяную ванну с постоянной температурой 75oC и сразу же помещается на 0oC, 5–10 мин, что делает двухцепочечный ДНК - зонд дегенеративным.
II. Трансформация образцов
(1) Готовые образцы 5 - 8um бобов должны быть испечены 2 - 3h в инкубаторе 50oC. (Образцы, окрашенные Giemsa, должны быть предварительно обесцвечены в фиксированной жидкости, а затем обжарены).
Извлечь образец стекла и погрузить его на 2 - 3 мин. в дегенеративный раствор с объемной долей от 70 до 75оC 70% аламид / 2×SSC.
(3) Немедленно обезвоживайте образцы по объемной доле 70%, объемной доле 90% и объемной доле 100% серии ледяного этанола по 5 мин каждый, затем воздух высыхает.
III. Гибридизация
Измененный или предварительно отжиженный детектор ДНК 10 мкл капает на дегенеративный и обезвоженный образец стекла, покрывает его 18 × 18 пакетами и помещает 37oC - скрещивание во влажную камеру на ночь (около 15 - 17 ч). Поскольку гибридов меньше, а температура скрещивания выше и длится долго, этот процесс проводится в мокрой коробке для поддержания влажного состояния образца.
IV. Смыть
Этот шаг помогает удалить неспецифические связывающие зонды, тем самым уменьшая фон.
(1) На следующий день после скрещивания образец извлекают из термостата 37oC и аккуратно снимают крышку лезвием.
(2) Поместите гибридные образцы стеклянных пластин в предварительно нагретые от 42 до 50oC в объемной доле 50% аламид / 2xSSC для промывки 3 раза по 5 мин.
(3) Промыть 3 раза в 1×SSC с подогревом от 42 до 50оC по 5 минут каждый.
(4) При комнатной температуре образец стекла легко промывают в 2×SSC.
(5) Удалите стекло, естественно сухое.
(6) Возьмите 200 мкл полихромированного раствора (красителя PI / antifade или DAPI / antifade) и добавьте капли к образцу стекла, прикрыв его каплями.
V. Результаты наблюдений с помощью флуоресцентного микроскопа
