Набор для обнаружения флуоресцентной ферменты NLuc

Флуоресцентная фермента NLuc - это генетически модифицированный микромолекулярный фермент (19.1kDa), который является биолюминесцентным белком, обладающим большей производительностью, чем zhuo. Он примерно в 150 раз ярче, чем у светлячка (Photinus pyralis) или флуоресцентной фермента морской почки, и использует новый тип энтероида (Furimazine) для получения высокоинтенсивных, тлеющих световых сигналов. Эта световая реакция не зависит от АТФ и в то же время обеспечивает максимальную чувствительность к обнаружению, подавляя фоновые световые сигналы.
NLuc Reporter Gene Assay Kit предлагает простой, однократно добавляемый реактив с высокой чувствительностью, который генерирует более сильные сигналы в присутствии флуоресцентной ферменты NLuc.
Компоненты продукции:

1 Собственные материалы:
PBS； Многорядное оружие; Белая светонепроницаемая / черная клеточная доска; Химический люминесцентный прибор или энзимометр.
2) Подготовка перед тестированием:
(1) Предварительно поместить NLuc - детекторный субстрат (50×) и NLuc - детекторный буфер субстрата при комнатной температуре.
(2) В зависимости от фактического использования соответствующее количество NLuc - контрольной субстраты (50×) смешивается с NLuc - контрольной субстратой буферной жидкостью в соотношении 1: 50, чтобы избежать света при комнатной температуре. Например, если требуется 10 мл реактивной жидкости, необходимо добавить 0,2 мл испытательного основания.
Примечание: Рекомендуется использовать в настоящее время, а остаточные реактивные жидкости, содержащие новый тип субстрата, не рекомендуется оставлять после окончания эксперимента.
3. Методы работы:
(1) Извлечь клеточную культурную пластину из клеточного инкубатора, поместить 5 - 15 мин и восстановить до комнатной температуры.
Примечание: Используйте белую светонепроницаемую или черную клеточную культурную пластину, чтобы уменьшить помехи сигнала между отверстиями.
(2) Добавить тестовый раствор
В каждую клеточную скважину с помощью многоканального ружья добавляется реактивная жидкость, содержащая субстрат, сбалансированная до комнатной температуры, при этом объем образца равен объему и смешивается с объемом клеточной питательной жидкости. Например, 96 - пористые пластины обычно добавляют 80 - 100 мкл питательной жидкости, соответственно, 80 мкл L - 100 мкл детекторного раствора; 384 - пористые пластины обычно добавляют 20 - 30 мкл питательной жидкости, соответственно, 20 - 30 мкл детекторного раствора.
(3) Обнаружение люминесценции
После смешивания в химическом люминесцентном приборе или ферментометре обнаруживается флуоресцентная фермента NLuc, которая сообщает о генной активности.
Примечание: Для получения наилучших результатов теста, пожалуйста, заполните тест в течение 1 часа после добавления тестового реагента.
4 Аналитические данные:
(1) Экспериментальное проектирование: в зависимости от различных экспериментальных целей в каждой питательной пластине должна быть установлена контрольная группа, экспериментальная группа и пустая контрольная группа. Чтобы гарантировать точность эксперимента, теоретически каждая экспериментальная группа (включая контрольную группу) должна вычитать световые измерения флуоресцентных ферментов светлячка из пустой контрольной группы.
Пустая контрольная группа:
Фон F: Нетранскрипционные клетки + реактивные жидкости.
Примечание: Количество образцов в пустой контрольной группе должно быть таким же, как и в экспериментальной пробе, и содержать те же комбинации питательных сред / сывороток, что и в экспериментальной пробе, плюс все те же тестовые реагенты.
Экспериментальная группа: транскрипционные клетки обрабатываются экспериментальными соединениями (то есть, экспериментальная группа F).
(3) Контрольная группа: транскрипционные клетки не обрабатываются для стандартизации результатов (т. е. контрольная группа F).
(2) Результаты расчетов:
Экспериментальная группа = Экспериментальная группа F - фон F.
Контрольная группа = контрольная группа F - фон F.
Выражение кратное = экспериментальная / контрольная группа.

- 20°C Сохранить, срок действия один год. NLuc Контрольное основание (50×) рекомендуется для раздельного хранения - 80°C.

1. Ферментная реакция более чувствительна к температуре, перед выборочным тестированием необходимо сбалансировать все реагенты до комнатной температуры (20 - 25°C) для повторного использования;
При тестировании необходимо использовать 96 - отверстий белого или черного цвета. При использовании обычной прозрачной 96 - дырочной пластины между соседними отверстиями возникают взаимные помехи;
3. Контрольно - измерительные приборы: приборы, способные обнаруживать химическую люминесценцию, применимы, но из - за различных настроек и чувствительности приборов измеренные значения световых сигналов также будут разными;
Однотрубный флуоресцентный измеритель определяет, что каждый образец смешивается с измеренным реагентом и время до измерения должно быть одинаковым;
Для вашей собственной безопасности перед экспериментом сделайте эффективную защиту;