Экспериментальная служба двустороннего электрофореза белков

I. СОДЕРЖАНИЕЭкспериментальная служба двустороннего электрофореза белковЭкспериментальные технические характеристики

2D - WB - это технология двустороннего электрофореза в сочетании с традиционным western blot. Общий экспериментальный процесс состоит в том, что смесь антигенных белков сначала отделяется двухсторонним электрофорезом, а затем гель - белок перепечатывается на поддерживающую мембрану, а затем окрашивается путем скрещивания антител. Технология 2D - WB может обнаруживать небольшие изменения в электрических точках или молекулярной массе, таких как антигены, и имеет хорошее применение в исследованиях модификации белков после перевода; В сочетании с масс - спектрометрией 2D - WB может найти более иммуногенные антигены из белковых смесей.

II.Экспериментальная служба двустороннего электрофореза белковОбзор

2D - WB - это технология двустороннего электрофореза в сочетании с традиционным western blot. Общий экспериментальный процесс состоит в том, что смесь антигенных белков сначала отделяется двухсторонним электрофорезом, а затем гель - белок перепечатывается на поддерживающую мембрану, а затем окрашивается путем скрещивания антител. Технология 2D - WB может обнаруживать небольшие изменения в электрических точках или молекулярной массе, таких как антигены, и имеет хорошее применение в исследованиях модификации белков после перевода; В сочетании с масс - спектрометрией 2D - WB может найти более иммуногенные антигены из белковых смесей.

III. Содержание услуг

1) Выдача и количественное определение белка;

2) Двусторонний электрофорез;

3, Трансформация, закрытая, инкубация, показать изображение.

IV. Экспериментальный рабочий процесс

1, часть - Электрический форез (IEF), резиновый баланс, второй электрофорез SDS - APGE.

После окончания второго электрофореза извлекается гель для трансформаторной мембраны, метод трансформаторной мембраны может выбрать мокрый перенос и полусухой перенос. Обычно используются мембраны NC и PVDF.

3 Закрытое, 5% обезжиренное сухое молоко или 5% BSA Закрыто на 1 час (комнатная температура) или на ночь (4 градуса).

4, антиинкубационный, в соответствии с инструкцией по антителам, чтобы выбрать время инкубации, обычные условия инкубации - комнатная температура 1 час или 4 градуса на ночь, антиинкубационный после извлечения мембраны

ТБСТ стирается 3 раза по 5 минут.

5. Двойное противоинкубационное размножение: в соответствии с одним сопротивлением, чтобы выбрать подходящий двойной анти (анти - крысиный, анти - человеческий, анти - кролик и т. Д.), через 1 час после инкубации при комнатной температуре, чтобы удалить мембрану TBST три раза, каждые 5 минут.

6, проявление: субстрат A и B в пропорциональном разбавлении смеси равномерно капает на мембрану, темная камера помещает пленку на мембрану, накрывает нажимной зажим, после экспозиции в течение определенного времени помещает пленку в проявительный раствор для проявления, пока не появится четкая белковая полоса, очищенная вода после дрейфа в фиксационном растворе, время экспозиции должно быть интегрировано, чтобы рассмотреть верхний образец белка, концентрацию разбавленных антител, время инкубации антител и другие факторы.

7. После фиксации очищайте пленку, высушивайте, откалибруйте маркер, сканируйте изображение и 2D Western blot анализ изображения.

Для обеспечения бесперебойной работы технической службы 2D Western Blot отправка образцов должна соответствовать следующим требованиям:

1. Клиенты предлагают: ткани, клетки, белковые растворы и т.д.; i) Сопротивление (может быть приобретено компанией & quot; Research Corporation & quot;).

Требования к перевозке: отправка упаковки с сухим льдом или жидким азотом.

Примечание: Образцы должны избегать всех видов загрязнения и повторного замораживания.

V. СОДЕРЖАНИЕ ДОКЛАДА О ТЕХНИЧЕСКИХ УСЛУГАХ

1) количественные результаты по белкам и образцам электрофореза;

Результаты анализа оригинальной пленки, электронных изображений и изображений;

Полный отчет об эксперименте 2D Western Blot, включая этапы эксперимента, использование инструментов и реагентов.

Приложение: Экспериментальные шаги 2D Western Blot

Основным принципом подготовки образцов белка 2D Western blot является максимально возможное растворение всего белка, нарушение взаимодействия между белком и белком, предотвращение различных типов мешающих веществ, подготовка образцов совместима с IEF и т.д.

2 Основные этапы двустороннего электрофореза, Электрический элемент (IEF), Резиновый баланс, Электрический форез SDS - APGE.

После окончания второго электрофореза извлеките гель для вращающейся мембраны, метод вращающейся мембраны может выбрать мокрый и полусухой перенос. Обычно используются мембраны NC и PVDF.

4 Закрытое, 5% обезжиренное сухое молоко или 5% BSA Закрыто на 1 час (комнатная температура) или на ночь (4 градуса).

5, - Антиинкубационный, выбирает время инкубации в соответствии с инструкцией по антителам, обычными условиями инкубации являются комнатная температура 1 час или 4 градуса на ночь, антиинкубационный после извлечения мембраны TBST три раза, каждые 5 минут.

6. Двойное противоинкубационное размножение: в соответствии с - анти - отбор подходящего двойного сопротивления (против крыс, против людей против кроликов и т. Д.), через 1 час после инкубации при комнатной температуре, чтобы извлечь мембрану TBST для промывки 3 раза, каждый 5 минут.

7, проявление: субстрат A и B разбавляется пропорционально и равномерно капает на мембрану, темная камера помещает пленку на мембрану, накрывает зажим для прессования, после экспозиции в течение определенного времени помещает пленку в проявительный раствор для проявления, пока не появится четкая белковая полоса, вода дрейфует после фиксации в фиксационном растворе, время экспозиции должно быть всесторонне рассмотрено белка. Предыдущая проба, концентрация разбавленных антител, время инкубации антител и другие факторы.

8 После фиксации, промыть пленку, высушить, откалибровать маркер, сканировать изображение и 2D Western blot анализ изображения.

отНачиная с 2011 годамыСтремлениеВ области наук о жизни、Аутсорсинг биомедицинских экспериментов и услуги по смазке диссертаций, помощь клиентам в различных экспериментальных услугах и смазке диссертацийБолее десяти летВаш надежный научный партнер.Эй!

Если из - за ограничений времени, условий испытаний и т. Д. вы не можете завершить свое исследование, пожалуйста, свяжитесь с нами.

Экспериментальные услуги: