Экспериментальная служба по метаболической маркировке SILAC

Экспериментальная служба по метаболической маркировке SILAC

Краткое описание экспериментальной технологии: SIL AC основан на замене соответствующих аминокислот в клеточной среде необходимыми аминокислотами, помеченными естественными изотопами (легкими) или стабильными изотопами (тяжелыми), соответственно. После 5 - 6 циклов умножения клетки, аминокислоты, помеченные стабильными изотопами *, смешиваются с белками, которые клетки недавно синтезировали, чтобы заменить оригинальные аминокислоты. Протеины крекинга в различных маркирующих клетках смешиваются в пропорции количества клеток или количества белков, после разделения и очистки проводится масс - спектрометрия, относительная количественная оценка основана на сравнении площади двух изотопных пептидных сегментов в масс - спектрометрии первого уровня. Метод метаболической маркировки в организме.

Экспериментальный рабочий процесс:

Извлечение белков и подготовка образцов

2.Тест эффективности маркировки

3.Смешанный стол для образцов

Классификация SDS - PAGE

5.Ферменты.

6 Масс - спектрометрия.

7.Анализ программного обеспечения

8 Качественные количественные результаты по белкам

Анализ и статистический анализ биоинформационных данных

Внимание экспериментам:

Клиенты предлагают:

1) Экстракт белка: Концентрация > 1 мкг / л, общее количество белка > 300 мкг.

Клетки: Взять не менее 2 x 106 клеток в трубке EP путем подсчета клеток, добавить 0 5 мл физиологического раствора или протеинового протектора, смешать и сохранить в холодильнике (- 80 °C, чтобы избежать повторной заморозки).

Критерии доставки:

Определение белка и количественный анализ SIL AC;

2 Клиент указываетПротеины соответствуют масс - спектральным пикам;

Полные этапы эксперимента SIL AC, использование инструмента, поиск параметров программного обеспечения и т.д.

Прочее:

SILAC - это технология внутренней маркировки, стабильные изотопные маркеры аминокислот в основном имеют те же химические свойства, что и естественные аминокислоты, маркированные клетки и немаркированные клетки практически не отличаются биологическим поведением, эффективность маркировки может достигать 100%.

2. Использование масс - спектрометрической количественной, количественные результаты точны, а вариация партии мала, повторяемость хорошая.

Метаболические маркеры в организме в сочетании с SDS - PAGE или хроматографической сепарацией совместимы с гидрофобными и метащелочными белками, которые не ограничены белковыми свойствами.

После смешивания нескольких образцов одновременно проводится разделение, ферментация и идентификация, и последующие эксперименты оказывают одинаковое влияние на образцы, уменьшая воздействие экспериментальных операций и приборного оборудования.

Поскольку технология относится к внутренней маркировке, эффект маркировки стабилен, эффективность маркировки не зависит от крекинга и подходит не только для анализа цельноклеточного белка, но и для идентификации и количественной оценки мембранного белка.

Потребность в белках метода SIL AC значительно снижается по сравнению с химическими маркерами, и обычно требуется всего несколько десятков микрограммов белка на образец.

7.Живой маркер, ближе к истинному состоянию образца.

Применяется только к клеткам, культивируемым живыми организмами, для образцов тканей, часто используемых в биомедицинских исследованиях, образцы жидкостей организма и т. Д. Не могут быть проанализированы, а затраты на маркировку для моделей животных слишком велики, чтобы быть реализованы. По сравнению с технологией внешней маркировки, SIL AC является внутренней маркировкой и имеет следующие технические преимущества

Высокий поток, который может одновременно идентифицировать и количественно измерять от сотен до тысяч белков;

2. Количественная точность * & точноУменьшение экспериментальных различий, вызванных различной подготовкой образцов;

Широкий линейный количественный диапазон;

Более высокая чувствительность, значительное снижение потребности в белках;

Маркировка использует технологию внутренней маркировки, которая ближе к истинному состоянию образца.

Содержание технических услуг SILAC

1) клеточные изотопные маркеры;

3) отделение SDS - PAGE;

4. разделение жидкой фазы и масс - спектрометрический анализ после резания инсулиназы;

Поиск баз данных и количественный анализ белков;

Биоинформатика дифференциального белка;

7.Представление отчета об эксперименте.

Содержание отчета об экспериментальных услугах

Определение белка и количественный анализ SIL AC;

2 Клиент указываетПротеины соответствуют масс - спектральным пикам;

Полные этапы эксперимента SIL AC, использование инструмента, поиск параметров программного обеспечения и т.д.

Преимущества технического обслуживания

1. Высокая чувствительность, низкий предел обнаружения, может обнаруживать белки с низкой плотностью обогащения;

Сильная способность к разделению, широкий спектр анализа, iITRAQ может быть идентифицирован для разделения любого типа белков, включая высокомолекулярные белки, кислые и щелочные белки, мембранные и нерастворимые белки;

Высокий поток: одновременный анализ восьми образцов увеличивает экспериментальный поток, что позволяет анализировать белки одновременно в нескольких точках времени или при различной обработке;

Надежные результаты: более надежные результаты качественного и количественного анализа;

5.Высокая степень автоматизации: соединение жидкой фазы и масс - спектрометрии, автоматизация операций, скорость анализа, эффект разделения хороший.

Экспериментальные услуги: