DH5 a λ pir Чувствительные клетки *

DH5 a λ pir Чувствительные клетки *

Производитель: DH5 α - λ pir Chemically Competent Cell
Товарные номера: G6018 - 10 (10 штук 100ul), G6018 - 100 (100 штук 100ul)
Технические характеристики / описание: G6018 - 10 (10 штук 100ul), G6018 - 100 (100 штук 100ul)

Генотип

F-φ80 лак ZАМ15А(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk-, mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

Краткое описание.

Штамм CLBio DH5a, входящий в pir, происходит от DH5a и вводит LAMpir, или DH5a, в геном кишечной палочки DH5a, который может экспрессировать PIR - белок, позволяя плазмидам, содержащим репликаторы R6Kg ori, нормально реплицироваться в нем. DH5a вводит штамм пир с отсутствующей нуклеотидной энцефалазой (enda), что повышает урожайность и качество плазмидной ДНК; Рекомбинантный тип ферментативного дефекта (reCA) уменьшает вероятность гомологичной рекомбинации вставленного фрагмента и обеспечивает стабильность вставленной ДНК; Наличие lacZOM15 позволяет использовать DH5a для синего и белого скрининга; Тем не менее, штамм DH5a, входящий в pir, растет медленнее и должен увеличивать время роста при выращивании плоских культур или жидких колеблющихся бактерий. Чувствительные клетки CLBio DH5a λ pir были изготовлены с помощью специального процесса для определения эффективности преобразования плазмиды pUC19 > 1X109 cfu / мкг ДНК.

Описание операции:

DH5a λ pir Чувствительные клетки вынимаются от - 80°C, быстро вставляются во лед, через 5 минут после того, как бактериальный блок растает, добавляется целевая ДНК (плазмида или соединительный продукт) и рука наносит EP трубку на дно, чтобы перемешаться, лед остается в состоянии покоя в течение 25 минут.

2.42 * C водяная ванна нагревается в течение 45 секунд и быстро отпускает лед обратно. Поднимаясь и стоя в течение 2 минут, тряска снижает эффективность преобразования.

Добавление 700 мк1 стерильной питательной среды LB без антибиотиков в центрифужную трубку, после смешивания при 37°C 200 rpm восстановление в течение 70 минут.

5 000 rpm центрифуга в течение 1 минуты для сбора бактерий, оставляя около 100 мкл на очистку, мягко вдувая тяжелые микобактерии и нанося на питательную среду LB, содержащую соответствующие антибиотики.

Поместите планшет в инкубатор 37°C в течение не менее 18 часов.

Меры предосторожностиА.

1. Чувствительные клеткипредложениеМедленное таяние во льду. Добавление целевой ДНК в течение 8 минут во лед не должно быть слишком длительным, а длительное хранение снижает эффективность преобразования.

2.Штамм DH5a λ pir растет медленно и должен увеличивать время роста бактерии (37 °C, более 18 часов), когда она культивируется на планшете или при жидком встряхивании.

Преобразование высококонцентрированных плазмид или высокоэффективных соединений может привести к соответствующему сокращению количества бактерий, которые в конечном итоге используются для нанесения покрытий.

DH5 a λ pir Чувствительные клетки *