Универсальный SYBR Green qPCR Mix

Условия хранения и транспортировки

Долгосрочное хранение должно храниться в светонепроницаемом состоянии при температуре 20°C, Mix после таяния может стабильно храниться в течение месяца в условиях светонепроницаемости при температуре 4°C, стараясь избежать повторного замерзания.

Компоненты продукции

Универсальный SYBR Green qPCR Mix

Описание продукта

Универсальный SYBR Green qPCR MixЭто SYBR. ® Реактор qPCR, специально предназначенный для метода встроенных красителей Green I, представляет собой смесь 2×, содержащую все компоненты qPCR, за исключением экстрактов и образцов ДНК, которые уменьшают ход операции, сокращают время добавления проб и снижают вероятность загрязнения. Основным компонентом является термоактивированная ДНК - полимераза Taq, модифицированная антителами, в сочетании с тщательно оптимизированной системой Buffer и катализатором реакции PCR, так что продукт обладает высокой специфичностью, высокой эффективностью амплификации, эффективно подавляет неспецифическое амплификацию, может быть определен шаблон широкого диапазона концентраций, получить стабильные и надежные результаты qPCR. Предварительная смесь содержит универсальный корректирующий краситель, совместимый с подавляющим большинством устройств qPCR, включая приборы, требующие ROX - коррекции, и, как правило, не требует дополнительного корректирующего красителя во время эксперимента.

способ применения

1. Внимание к использованию

Из - за предварительного смешивания красителей в Mix процесс их сохранения или подготовки реакционной системы должен избегать интенсивного освещения;

2) аккуратно перемешивать Mix с помощью переднего и нижнего опрокидывания, не смешивать вихревые колебания, чтобы избежать образования слишком большого количества пузырьков;

(3) В Mix содержится коррекционный краситель Universal, который подходит для всех моделей и не требует дополнительных красителей.

Рекомендуемая система реагирования qPCR

a. конечная концентрация экстракта, как правило, рекомендуется на уровне 0,2 мкм и может быть скорректирована в диапазоне 0,1 - 1 мкм в случае плохой реакции;

b. Рекомендуемое количество добавок к шаблону составляет от 1 до 2 мкл, если тип шаблона является неразбавленным прототипом cDNA, добавление шаблона не должно превышать 10% от общей системы реакции. Количество копий генов - мишеней, содержащихся в различных типах шаблонов ДНК, варьируется, и при необходимости может быть проведено градиентное разбавление для определения оптимального добавления шаблонов ДНК.

Процедура реакции qPCR (может быть скорректирована в соответствии с моделью)Универсальный SYBR Green qPCR Mix

Двухэтапный подход

Трехступенчатый метод

a. установка температуры отжига & удлинения (отжига) в соответствии с значением Tm экстракта; Если фрагмент расширения находится в пределах 200bp, время отжига & удлинения (удлинения) может быть установлено на 15 sec; Кроме того, настройка времени отжига & удлинения (удлинения) должна быть скорректирована самостоятельно в соответствии с минимальным временем сбора данных, необходимым для использования qPCR - прибора;

b. Процедуры сбора кривых плавления для различных приборов qPCR различны, и, как правило, можно использовать стандартные процедуры сбора кривых плавления для приборов.

4. Экспериментальная оптимизация

В случае неудовлетворительной реакции с использованием условий реакции по умолчанию требуется оптимизация условий реакции как с точки зрения концентрации экстракта, так и с точки зрения процедуры амплификации:

Корректировка концентрации экстракта

Когда конечная концентрация экстракта изменяется в диапазоне 0,1 - 1,0 мкм, чем ниже концентрация экстракта, тем выше специфичность усиления, но эффективность усиления снижается.

Оптимизация расширенной программы.

Необходимо повысить амплификационную специфичность, можно использовать двухэтапную процедуру или повысить температуру отжига; Необходимо повысить эффективность усиления, используя трехэтапную процедуру или увеличивая продолжительность.

5. Принципы проектирования экстрактов

Длина продукта усиления рекомендуется контролировать на уровне 80 - 200 bp;

Длина экстракта составляет 18 - 25 bp;

Разница в значениях Tm между положительными и обратными экстрактами не превышает 1°C, а значение Tm лучше контролировать при 58 ~ 62°C;

Содержание GC в экстракте контролируется от 40% до 60%;

(5) Общее распределение экстрактов A, G, C и T должно быть как можно более равномерным, избегая непрерывных структур T / C или A / G (особенно 3 'конца);

Последнее основание на конце экстракта 3 'предпочтительно G или C;

Избегайте комплементарных последовательностей внутри экстракта или между двумя экстрактами;

• Использование функции поиска NCBI BLAST для подтверждения специфичности экстракта.

Американская компания Azaood, основанная в 2004 году, разрабатывает и производит высококачественные очищающие ферменты, белки, наборы для нуклеиновых кислот и клеточного разделения, сыворотки для коров - потомков для исследований в области наук о жизни, диагностики и биотехнологии.ЛиндаоЧеловек; Компания Azood является ведущим производителем, сертифицированным по стандарту ISO9001 и отвечающим требованиям, предъявляемым к приложениям и требованиям от исследований до крупномасштабной биообработки и OEM.