Комплект высокоэффективных рецепторных клеток

Комплект высокоэффективных рецепторных клеток

Номер каталога:30018

Состав комплекта, хранение, стабильность:

Краткосрочное использование 4°C, чтобы избежать загрязнения. Долгосрочное хранение - 20°C действительно в течение года.

Презентация продукции:

1. Комплект высокоэффективных рецепторных клетокЭто основано на традиционных высокоэффективных методах подготовки сенсорных клеток для соответствующих улучшений, удобных в эксплуатации, высокой эффективности преобразования.

2. Используя этот комплект, можно достичь сенсорной эффективности 10.⁸CFU / мкг плазмиды. Для мелких частиц эффективность несколько выше, а для крупных - несколько ниже. Высокоэффективные сенсорные клетки, подготовленные в этом наборе, не только преобразуют плазмиды, но и идеально подходят для преобразования обычных соединительных продуктов, особенно для преобразования плоских соединений и других ситуаций, требующих высокой эффективности преобразования.

3. Работа с этим набором проста, и после культивирования бактерий требуется всего около 60 минут, чтобы завершить подготовку высокоэффективных сенсорных клеток.

4. Этот набор предназначен для большинства распространенных видов кишечной палочки, включая Top 10, DH5α, BL21 (DE3), JM109, TG1, HB101 и XL - 1. Но эффективность преобразования различных видов может сильно различаться.

5. Этот набор может быть использован несколько раз, в общей сложности 100 сенсорных клеток 100 мкл.

v Внимание:

1. Все реагенты, расходные материалы, приборы, оборудование должны быть стерилизованы.

2. ЛБ, не содержащий антибиотиков, также должен использоваться при культивировании при температуре 37°C после теплового шока при использовании сенсорных бактерий, даже если плазмиды устойчивы.

3. После того, как сенсорные клетки готовы, быстро перейдите на - 70°C.

Шаги действия: (Прежде чем приступать к эксперименту, прочитайте внимательно)

1. Нанесите планшет:

Для достижения оптимальной сенсорной эффективности глицериновые бактерии или другие формы сохраненных штаммов должны быть сначала покрыты пластинами LB и культивированы на ночь.

2. Вакцинация:

Возьмите LB - планшет со свежими культурами, и последующие операции будут проводиться в ультрачистом столе. Верхнюю часть пинцета окуните в 70% алкоголя и немного сожгите на алкогольной лампе, оставив верхнюю часть пинцета стерильной. Возьмите стерильную пластиковую головку пистолета или зубочистку пинцетом, выберите моноклон с планшета и положите пластиковую головку пистолета или зубочистку, окунутую в гриб, в пробирку для выращивания бактерий, содержащую 3 мл SOB или LB (подходящую питательную среду клиент должен выбрать в зависимости от вида). Упомянутые выше операции также могут выполняться с помощью прививочных колец и т.д.

3. Воспитание:

При 37°C около 250rpm культивируется на ночь, как правило, время культивирования контролируется около 16 часов. Не должно превышать 18 часов.

4. Воспитание для повторной вакцинации:

В зависимости от количества высокоэффективных сенсорных клеток, которые необходимо подготовить, прививают свежевыращенными ночевыми бактериями в пропорции 1: 500. Например, возьмите 100 микролитров свежей ночлежной бактерии в 50 мл SOB или LB, при 37°C около 250 rpm культуры.

5. Подготовительные приемные клетки:

в Примечание: скорость вращения центрифуги и время центрифугирования очень важны для производства сенсорных клеток, отличные скорости вращения и время центрифугирования различных видов бактерий различны и должны быть оптимизированы в соответствии с конкретными обстоятельствами. Хорошее состояние - правильная скорость вращения и время центрифугирования, так что бактерии просто центробежные осадки, но не могут быть слишком близки, иначе тяжелая подвеска затруднена, может быть только сильно взорвана, чтобы повторно подвесить, это нанесет ущерб клетке, повлияет на эффективность преобразования.

1) Когда культивируемая бактерия OD600 достигает около 0,5, культивируемую бактериальную жидкость помещают в ледяную ванну и охлаждают в течение 15 минут. Примечание: Все последующие операции должны проводиться в 4 - градусной или ледяной ванне.

2) 4°C (центрифуга должна быть предварительно охлаждена) 3000 - 3500g центрифуга в течение 5 минут собирает бактерии и выбрасывает их в очищение (насколько это возможно, чтобы удалить чистую очистку, чем меньше остатков, тем лучше).

3) Если количество бактерий до центробежного осаждения составляет 50 мл, последующая операция выполняется в соответствии с последующим действием, а если речь идет о других объемах, то последующая операция проводится в пропорциональном пересчете.

4) Приготовьте раствор А в 10 мл предварительно охлажденного высокоэффективного сенсорного состояния, чтобы слегка взвесить бактериальное осаждение (для удобства повторной подвески, сначала добавьте небольшое количество раствора А, затем добавьте оставшийся раствор А), дуйте тяжелую подвеску, когда она должна быть мягкой, иначе это повлияет на эффект.

5) Холодная ванна 15 минут.

6) 4°C (центрифуга должна быть предварительно охлаждена) 3000 - 3500g центрифуг 5 - 7 минут для сбора бактерий, отбросить очищение.

7) Приготовьте раствор B в 2 мл предварительно охлажденного высокоэффективного сенсорного состояния для мягкого повторного осаждения бактерий. Тяжелая подвеска всегда должна быть мягкой, иначе это повлияет на эффект.

8) Холодная ванна 15 минут.

9) На ледяной бане производится разделка, которая может быть надлежащим образом упакована в 50 - 200 мкл / трубы по мере необходимости.

10) Немедленно используйте или используйте сухие ледяные ванны с жидким азотом или этанолом для быстрого замораживания после 70°C.