Моноядерная лейкемия человека THP - 1

Моноядерная лейкемия человека THP - 1

THP1; O-THP-1; Педиатрия больницы Тохоку-1

L клеточная идентификация

Проверка STR прошла.

L Источник клеток

Национальный банк ресурсов

L Клеточный фон

Построен из периферической крови 1 - летнего мальчика с рецидивом острого мононуклеарного лейкемии (АМЛ) в 1978 году. Клетка может поглощать молочные шарики и активировать эритроциты без поверхностей и цитоплазматических иммуноглобулинов. Одноядерные клетки могут дифференцироваться с помощью фобосола TPA.

Примечание: мутация NRAS была ошибочно указана как p.Gly12Ser в PubMed = 9379676.

L - клеточные свойства

1) Источник: острая мононуклеарная лейкемия, мононуклеарная клетка

2) Формы: мононуклеарные клетки, суспензия

3) Содержание: > Количество клеток 1x106

4) Технические характеристики: T25 или 1 мл упаковка для замороженных труб

5) Применение: только для научного использования

l Условия культивирования

1) Подготовка питательной среды RPMI - 1640 (рекомендуемый awcell - 002); Качественная сыворотка коровьего скота для плода, 10%; 0,05 мМ бета - циуриэтанол (клеточный уровень рекомендован: Awcell - 8211); Двойное сопротивление, 1%.

2) Отношение референтной передачи: при передаче контролируется плотность клеток 2 - 4 × 105cell / ml и передается, когда клетки растут до 8 - 10 × 105cell / ml.

3) Ссылка на частоту обмена жидкости: обмен жидкости при передаче.

4) условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; Углекислыйгаз, 5%. Температура: 37 градусов Цельсия, влажность инкубатора 70% - 80%.

5) Замороженная жидкость: * Культивирующая жидкость 95%, DMSO 5% (после использования этой замороженной жидкости, согласно опыту нашей библиотеки восстановления выживаемости около 50%, после восстановления требуется дополнительная культура 7 - 10 дней для восстановления роста)

l Внимание

[Внимание]:

Клетка представляет собой суспензионную клетку, основанную на опыте культивирования и отзывах клиентов, использование « полуобменного метода » при передаче более выгодно для клеточного состояния, поэтому наша библиотека рекомендует вам использовать « полуобменный метод » для передачи.

После того, как вы получите наши 15 - миллиметровые центробежные трубки, пожалуйста, не собирайте клетки центробежным способом, сначала подготовьте две новые бутылки T25, а затем переместите клетки равномерно и переместите их в две новые бутылки T25, добавьте питательную среду до 10 миллиметров. положите ее в инкубатор 37°C.

После того, как вы получите клетку, отправленную в бутылке для культивирования T25, сначала соберите ее центробежным способом, а затем добавьте к ней 12 мл * питательной среды, настроенной в соответствии с инструкцией, и переместите ее в две новые бутылки для культивирования T25.

3.Взвешенные клетки thp - 1. Клетка предпочитает умеренную обработку при культивировании и как можно меньше центробежной обработки клеток при культивировании, что приводит к повреждению клеток. При обмене жидкости не заменяйте всю питательную среду, рекомендуется использовать « метод полуобмена жидкости» для передачи, добавить клеточную питательную среду для разбавления клеток до поддержания плотности.

Клетки более чувствительны к качеству сыворотки, и наша библиотека рекомендует вам культивировать с использованием высококачественной сыворотки импортных брендов. FBS не инактивируется, если клетки растут медленно, попробуйте использовать другие FBS или временно увеличить концентрацию FBS до 20%

5. В питательную жидкость клетки необходимо добавлять бета - цинюэтанол (уровень клеточной культуры), который, если его не добавлять, может повлиять на состояние клетки.

Стабильность бета - цинюэтанола ограничена, и бета - цинюэтанол не может быть добавлен в среду * для среднесрочного и долгосрочного хранения, а бета - тиогликол добавляется при каждой передаче или добавлении жидкости.

Бета - циюэтанол (2 - циюэтанол) добавляется в лимфоциты или другие клеточные культуры из - за нехватки аминокислот цистеина в FBS, используемых в питательных средах, и большого количества цистеина. Некоторые клетки (например, Т - клетки) не могут транспортировать цистеин в цитоплазму и должны превращать его в цистеин. Бета - циуриэтанол восстанавливает цистеин в форме, которая может быть транспортирована клетками, а затем преобразуется в цистеин, необходимый для роста клеток. Бета - циюэтанол также является восстановителем, который разрушает многие токсичные метаболиты, производимые клетками в культуре, тем самым улучшая окружающую среду клеток.

Клетка более чувствительна к плотности клеток, и при культивировании и передаче обратите внимание на поддержание плотности клеток в нужном диапазоне (см., в частности, инструкции по клеткам).

7. Клетка имеет более низкую скорость восстановления после замораживания, при замораживании, при необходимости, увеличивайте количество клеток

Как правило, рост клеток можно поддерживать путем добавления * питательных сред в растущие клетки, которые могут быть центрифугированы и повторно подвешены к недавно назначенным средам каждые семь дней, чтобы завершить полный обмен жидкости в клетках.

Инструкции ATCC о клетках thp - 1 для поддержания клеточной активности

устройство=модальное

(Частый подсчет клеток является лучшим способом мониторинга THP - 1.) Эти клетки должны культивироваться каждые 2 - 3 дня путем простого добавления небольшого количества свежих питательных сред в колбу (чтобы они имели условную питательную среду). Вам не нужно каждый раз центрифугировать клетки и повторно передавать их. Когда мы культивируем в нашей лаборатории, на второй день клетки обычно могут расширяться в более крупные колбы с большим количеством питательных сред. Когда плотность клеток достигает 8 × 10 5 живых клеток / мл, требуется передача. Плотность клеток не должна превышать 1×10 (6) живых клеток / мл.

1. Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

2. Добавьте 0,25% (w / v) поджелудочной протеазы - 0,53 мм EDTA в культурную бутылку (T25 бутылок 1 - 2 мл, T75 бутылок 2 - 3 мл), поместите в инкубатор 37°C для переваривания в течение 1 - 2 минут (трудно перевариваемые клетки могут надлежащим образом продлить время переваривания), затем наблюдайте пищеварение клеток под микроскопом, если большая часть клетки округлится и выпадает, быстро возьмите операционный стол, после нескольких ударов по питательной бутылке добавьте 3 - 4 мл питательной среды, содержащей 10 мс, чтобы прекратить пищеварение.

3. Аккуратно выровнять и высосать, центрифугировать 3 - 5 мин в условиях 1000 RPM, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья равномерно. Клеточная суспензия делится на новую бутылку T25 в соотношении 1: 2, добавляя 6 - 8 мл новой * питательной среды, настроенной в соответствии с требованиями инструкции для поддержания жизнеспособности роста клеток, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 ~ 1: 5.

3) Замораживание клеток: после получения клетки рекомендуется заморозить партию клеточных семян при культивировании первых трех поколений для последующего экспериментального использования.

4) Транспортные питательные среды (поливные питательные среды) больше не могут использоваться для выращивания клеток, замените их на новые * питательные среды, подготовленные в соответствии с условиями культивирования клеток в инструкции. После получения клетки рекомендуется первая передача T25 Культурная бутылка 1: 2.

l Формы перевозки

Низкая температура: (1) 1 мл замороженной трубки упаковка сухого льда транспортировка, после получения 80 градусов холодильника после хранения на ночь в жидкий азот или прямое восстановление, если вы обнаружите, что сухой лед испаряется чистым, крышка замороженной трубки сброшена, повреждена и клетки загрязнены, пожалуйста, немедленно свяжитесь с нами.

При комнатной температуре: (2) T25 бутылок для восстановления выживших клеток при комнатной температуре, отправленных после получения в соответствии с методом обработки после приема клеток.

● Биологическая безопасность

Все клетки животных считаются потенциально биологически опасными и должны работать в рамках вторичной станции биобезопасности, и обратите внимание на защиту, и все отходы и сосуды, подвергшиеся воздействию этой клетки, должны быть стерилизованы, прежде чем они могут быть выброшены.

Рекомендуется всегда использовать защитные перчатки, одежду и защитные маски при восстановлении замороженных клеток. Примечание: Замораживающая трубка, погруженная в жидкий азот, просачивается и медленно заполняется жидким азотом. При размораживании жидкий азот превращается в газовую фазу, что может привести к взрыву контейнера или сдуванию его крышки опасной силой, что приведет к образованию летающих обломков, наносящих ущерб людям.