Глюкозаоксидаза (GOD) Тестовый ящик микрометод

Испытательная коробка для оксидазы глюкозы (GOD)
Микрометод
Номер груза:БЦ0695
спецификация100T/96S

Содержание продукции:
Экстракт:Жидкость 100ml×1 флакон, хранение при 4°C;
Реактор 1:Жидкость 15 мл х 1 бутылка, хранение при 4°С;
Реактор 2:Жидкость 3ml×1 флакон, хранение 4°C;
Реактор 3:Жидкость 1ml×1 шт., сохранена при температуре 20°C, может быть упакована и сохранена после таяния.

Описание продукции:
GOD (EC 1.1.3.4) широко распространен среди животных и растений, катализируя окисление глюкозы, чтобы генерировать глюкозу и производить H 2O 2, что является одним из метаболических путей жизненного кислорода в организме.
GOD катализирует образование глюкозы H2 O2, а пероксидаза катализирует разложение H2 O2 при аэробном присутствии, чтобы получить кислород, который, в свою очередь, окисляет анисовый амин, чтобы получить цветное вещество, а глубина цвета линейно зависит от активности оксидазы глюкозы.

Требуется собственное оборудование и приборы.
Видимый спектрофотометр / энзимометр, водяная ванна, настольная центрифуга, регулируемый переносчик жидкости, микроколориметрическая плита / 96 отверстий, ступа, лед и дистиллированная вода

Шаг действия
I. Подготовка проб
1. Обработка тканей: взять около 0,1 г ткани, добавить 1 мл экстракта для равномерного раствора в ледяной ванне; 8000 г 4°C центрифуга 10 мин, чтобы очистить, поставить лед для измерения.
2, сыворотка (плазма): непосредственно обнаруживается.
II. Этапы измерения
1. спектрофотометр или энзимометр подогревают более 30 мин, регулируют длину волны 500 нм, дистиллированная вода регулирует ноль.
Приготовление рабочей жидкости GOD: взять 15 мл реагента один плюс 3 мл реагента два усреднения, настроить PH 5.1 (в настоящее время используется).
3. Дополнительная таблица:
Название реагента (мюл) измерительная трубка
Рабочая жидкость 174
Реактор 3 6
Смешанная, 37 ° C (млекопитающие) или 25 ° C (другие виды) водная ванна 5 мин
Выборка 20
Перед выбором поместите рабочую жидкость GOD и реагент III в водяную ванну с температурой 37°C для изоляции, а затем добавьте эти реагенты в порядке
В цветной чашке / 96 пластине отверстий начинается отсчет времени при добавлении образца; Зарегистрируйте начальную абсорбцию A1 за 20 секунд и A2 за 1 минуту 20 секунд при длине волны 500 нм. Рассчитывайте Дельта A = A2 - A1.
III. Расчет GOD - единиц жизненной силы
a. Формула расчета, измеренная с помощью микрокварцевой чашки Петри, выглядит следующим образом:
Расчет жизнеспособности зоологической ткани GOD
(1) Рассчитано по концентрации белка
Определение единицы: каждый мг тканевого белка катализирует в реакционной системе 1 мкмоль окисляемого анисового амина, определяемого как единица активности фермента.
GOD (U / mg prot) = дельта A (Эпсилон x d) x V - обратный общий (Cpr x V - образный); T = 1333 × Дельта A � Cpr
(2) Рассчитано по свежему весу выборки
Определение единицы: каждая g ткань катализирует в реакционной системе 1 мкмоль оксидированного анисового амина в минуту, определяемого как энзимная единица активности.
GOD (U / g свежий вес) = дельта A / (Эпсилон x d) x V - антиагрегация (W �V - экстракция x V - образная) �T = 1333×Дельта A � W
2. Расчет жизнеспособности сыворотки (плазмы) ГОД
Определение единицы: каждый миллил сыворотки (плазмы) катализирует в реакционной системе 1 мкмоль оксидированного анисового амина в минуту, определяемого как единица активности фермента.
GOD (U / mL) = дельта A �d ������A
V - обратная сумма: общий объем реакции, 0,2 мл; V - образец: Добавить объем образца, 0,02 мл; V - экстракция, добавить объем экстракта,
1 мл; cpr: концентрация белка в выборке, mg/mL； W: образец свежего веса, g; d: диаметр света, 1cm; Эпсилон: коэффициент экстинкции оксидантного фталинового амина, 7.5×10 - 3 мл / мкмоль / см; Т: Время реакции, 1 мин.
b. Вычислительная формула, измеренная с помощью 96 - пористой пластины, является следующей:
Расчет жизнеспособности зоологической ткани GOD
(1) Рассчитано по концентрации белка
Определение единицы: каждый мг тканевого белка катализирует в реакционной системе 1 мкмоль окисляемого анисового амина, определяемого как единица активности фермента.
GOD (U / mg prot) = дельта A (Эпсилон x d) x V - обратный общий (Cpr x V - образный) � T = 2222 × дельта A � Cpr
(2) Рассчитано по свежему весу выборки
Определение единицы: каждая g ткань катализирует в реакционной системе 1 мкмоль оксидированного анисового амина в минуту, определяемого как энзимная единица активности.
GOD (U / g свежий вес) = дельта A / (Эпсилон x d) x V - антиагрегация (W �V - экстракция x V - образная) � T = 2222 × Дельта A � W
2. Расчет жизнеспособности сыворотки (плазмы) ГОД
Определение единицы: каждый миллил сыворотки (плазмы) катализирует в реакционной системе 1 мкмоль оксидированного анисового амина в минуту, определяемого как единица активности фермента.
GOD (U / mL) = дельта A � d ���������������6553
V - обратная сумма: общий объем реакции, 0,2 мл; V - образец: Добавление объема выборки, 0,02 мл; cpr: концентрация белка выборки, mg/mL；
W: Образцы свежего веса, g; d: диаметр света, 0,6 см; Эпсилон: коэффициент экстинкции оксидированного фталинового амина, 7,5 × 10 - 3 мл / мкл / см; Т: Время реакции, 1 мин.
1. Жизнеспособность GOD в разных симметричных тканях различна, перед официальным испытанием сделайте 1 - 2 предварительных испытания, если A2 - A1 > 1,
Это указывает на то, что тканевая жизнеспособность слишком высока и должна быть разбавлена экстрактом в соответствующую концентрацию раствора, чтобы A2 - A1 < 1,
Для повышения чувствительности обнаружения.
Если во время эксперимента появляется A1 > A2, разбавляйте образец экстрактом до соответствующей концентрации.
Хорошо, что два человека делают этот эксперимент одновременно, один сравнивает цвет, один отсчитывает время, чтобы гарантировать точность результатов эксперимента.
Этот набор предназначен только для тканей животных и сыворотки (плазмы) животных.

Глюкозаоксидаза (GOD) Тестовый ящик микрометод Глюкозаоксидаза (GOD) Тестовый ящик микрометод