Набор для мышей с интерлейкином - 2ELISA

Интерлейкин - 2 у мышейНабор ELISA

Справочная информация:

Интерлейкоин 2 (IL - 2) является многофункциональным цитокином, который играет важную роль в иммунном ответе организма. Он был обнаружен Морганом в 1976 году в культуре селезенки мышей, и, поскольку он хорошо стимулирует и поддерживает долгосрочную культуру Т - клеток, он был назван фактором роста Т - клеток, унифицированным под названием IL - 2 в 1979 году. Мыши IL - 2 содержали 133 аминокислотных остатка с молекулярной массой 15,5 кDa. Важной функцией IL - 2 является индукция размножения и дифференциации Т - лимфоцитов, кроме того, IL - 2 регулирует иммунный ответ нескольких клеток. В организме IL - 2 обладает противоопухолевыми, противомикробными инфекциями, вызывает отторжение трансплантации и аутоиммунную и иммуномодуляцию.

Принцип обнаруженияА.

Соларбио (Соларбио ®)В комплекте ELISA используется метод иммуноадсорбции ферментов, основанный на двойных антителах. Поместите пакет моноклональных антител против IL - 2 мыши на энзимную планку; Добавьте стандартные продукты с градиентным разбавлением и предварительно разбавленные образцы соответственно, и мыши IL - 2 в стандартных продуктах и образцах будут полностью интегрированы с антителами в пакеты на ферментных маркерах; После стирки пластины добавляется биохимическое антитело против IL - 2 у мышей, которое специфически связывается с IL - 2 у мышей в стандартных продуктах и образцах, захваченных антителами на пластине; После стирки пластины добавьте стрептопенициллин, маркированный пероксидазой хрена (HRP), и биотин и стрептопенициллин будут иметь высокоинтенсивное нековалентное соединение; После стирки пластины добавляется тонирующий TMB, и если в образце реакционного отверстия присутствует разная концентрация мыши IL - 2, HRP превращает бесцветный TMB в голубое вещество различной глубины (положительной корреляции), а отверстие реакции после добавления концентрирующей жидкости становится желтым; После этого, в max = 450 Концентрация IL - 2 в пробах с реакционными отверстиями измерялась на нм (OD = 450 нм), концентрация IL - 2 у мышей в пробах была прямо пропорциональна концентрации OD, и концентрация IL - 2 у мышей в пробах могла быть рассчитана путем построения стандартной кривой и программного обеспечения для согласования четырех параметров.

Принципиальная схема:

Внимание:※

• Набор должен использоваться в течение срока годности, не используйте просроченный реагент.
• При неиспользовании комплект должен храниться в холодильнике при температуре 2–8°C, а стандартные изделия, которые были растворены, но не израсходованы, выбрасывайте.
• Пожалуйста, восстановите 30 при комнатной температуре. min， И полностью смешивает различные компоненты в коробке с реагентами и подготовленные образцы.
• В ходе испытаний стандартные изделия и образцы рекомендуются для проверки проб, и последовательность добавления реагентов должна поддерживаться *.
• Чтобы избежать перекрестного загрязнения, используйте 1 - ю пробирку, головку пистолета, уплотнительную пленку (※) и чистые пластиковые контейнеры. А.
• Концентрированные биохимические антитела и концентрированные ферменты имеют меньший объем, и во время перевозки небольшие количества жидкости попадают в стенки труб и бутылки.

Крышка, перед использованием центробежная обработка (5 - 10 S достаточно), так что жидкость на стенке трубы концентрируется на дне трубы, при извлечении, осторожно дуйте с помощью детектора несколько раз.

• Пожалуйста, не используйте тест, содержащийся в комплекте из других источников, за исключением концентрата и концентрата в наборе, который может быть использован

Агент заменяет один компонент в этом наборе.

• Для обеспечения точности результатов каждый тест должен быть стандартным кривым.

Советы по безопасности:Конец жидкости в комплекте - кислотный раствор, при использовании операторы должны носить перчатки и следить за защитой; Во время работы также избегайте контакта реагентов с кожей и глазами, если вы случайно соприкасаетесь, используйте большое количество чистой воды для очистки; При тестировании образцов крови и других жидкостей организма, пожалуйста, следуйте соответствующим правилам безопасности Национальной биологической лаборатории.

Состав и хранение комплектовА.

Собственное лабораторное оборудование (не предоставляется, может быть приобретено по заказу)

• Ферментометр (основная длина волны 450 нм, референтная длина волны 630 нм)
• Высокоточные пипетки и одноразовые всасывающие головки: 0,5 - 10,2 - 20,20 - 2002 - 1000 мкл
• Стиральная машина или бутылка
• 37℃инкубатор
• Двойной пар, деионизированная вода, метроны и т.д.
• Полипропиленовая пробирка для разбавления

Сбор и хранение образцов:

• Клеточная культура очищается:

Клеточная среда перемещает стерильные центробежные трубки, 1000 × g центробежные 10 мин при 4 ° C, затем равное количество верхней очистки упаковывается в небольшие EP - трубки и сохраняется при 20 ° C (обнаружение может быть помещено в хранилище 2 - 8 ° C в течение 24 часов), чтобы избежать повторного замерзания.

• Образцы сыворотки:

После естественного затвердевания крови при комнатной температуре в течение 20 мин, 1000 × g центрифуга 10 мин при 4 ° C, затем эквивалентное количество верхней очистки упаковывается в небольшие EP - трубки и сохраняется при 20 ° C (обнаружение может быть помещено в хранилище 2 - 8 ° C в течение 24 часов), в случае осаждения в процессе хранения, пожалуйста, снова центрифугируйте, чтобы избежать повторного замерзания и оттаивания.

• Образец плазмы:

Вся кровь собирается в трубку, содержащую антикоагулянт, в соответствии с фактическими требованиями образца выбирается EDTA, лимонат натрия или гепарин в качестве антикоагулянта, смешивается 20 мин, при 4°C 1000 ×g центрифуг 10 мин, затем равное количество верхней очистки упаковывается в небольшую трубку EP и сохраняется при 20°C (тест в течение 24 часов может быть помещен в хранение 2–8 °C), избегая повторного замерзания и таяния.

※Внимание:Образцы сывороточной плазмы избегают использования гемолитических и гиперлипидных образцов крови, чтобы не повлиять на результаты тестирования; Если концентрация мишени в образце выше, чем у стандартного продукта, сделайте образец соответствующим кратным после разбавления, и рекомендуется провести предварительный эксперимент перед официальным экспериментом, чтобы определить кратность разбавления.

Приготовьтесь.А.

• Рециркуляция реагента: сначала за 30 минут до эксперимента коробка реагента, образец, подлежащий измерению, помещается при комнатной температуре, концентрированный моющий раствор, если кристаллизация, помещайте в ванну с температурой 37°C до полного растворения кристаллов.
• Приготовление скруббера: предварительно рассчитать объем разбавленного скруббера, затем разбавить 20 - кратное концентрированное скрубберное средство в 1 - кратное применение с помощью двойного пара или деионизированной воды, а неиспользованный концентрированный скрубберный раствор поместить в холодильник 4°C для хранения.

3. Стандартное градиентное разбавление: Добавьте стандартный продукт / образец разбавленного раствора (SR1) 1 мл замороженного сухого стандартного продукта, статическое 15 минут, пока он * не растворится, мягко перемешивается (концентрация 1000 пг / мл), а затем разбавление осуществляется в соответствии со следующей концентрацией: 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 15,625, 0 пг / мл. Неоконченный исходный раствор (1000пг / мл) из повторно растворенного стандартного продукта должен быть утилизирован или упакован по мере необходимости в соответствии с однократным использованием и храниться в холодильнике от - 20 до - 80°С, как показано на рисунке ниже.

Биотизированный рабочий раствор антитела: предварительно рассчитайте количество, необходимое для испытания, и разбавите 100 - кратный концентрат антитела в 1 - кратное применение с помощью контрольного разбавленного раствора (SR2) (полностью перемешайте перед разбавлением), добавьте его в отверстие реакции в течение 30 минут.

Рабочие жидкости биогенных антителМетод разбавленияНиже приводится информация:

Рабочий раствор ферментативного соединения: в количестве, требуемом для каждого испытания, 100 - кратный концентрат ферментативного соединения разбавляется в 1 - кратное применение рабочей жидкости (центрифуга перед разбавлением) разбавленным раствором ферментативного соединения (SR3), используйте в течение 30 минут.

Рабочие жидкости ферментативных соединенийМетод разбавленияНиже приводится информация:

6. Способы стирки:

• Автоматизированная стиральная пластина: сбрасывание жидкости из отверстия ферментативной пластины, высыхание на толстой насосной бумаге, впрыскивание стирающей жидкости 300ul / отверстие, интервал между наполнением и всасыванием 30 секунд, промывка пластины 5 раз.
• Ручная стирка пластины: сбрасывать жидкость из отверстия ферментативной пластины, высушивать ее на толстой насосной бумаге, добавлять промывочную жидкость 300ul / отверстие в бутылку, после 30 секунд покоя сбрасывать жидкость из отверстия ферментативной пластины, высушивать на толстой насосной бумаге, промывать пластину 5 раз.

Шаги обнаружения:

РезультатыА.

1. Значение OD измеряется с помощью ферментометра на длине волны 450 нм. Выберите двухволновое измерение с опорной длиной волны 630 нм. Если двухволновое обнаружение невозможно, используйте значение OD 450 нм для вычитания значения OD 630 нм.

Расчет среднего значения OD для стандартных изделий и образцов: значение OD для каждого стандартного изделия и образца вычитается из значения OD для нулевых отверстий

3. Используя стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, оптическую абсорбцию в качестве вертикальных координат, используя программное обеспечение для построения стандартной кривой, содержание IL - 2 в образце может быть преобразовано из стандартной кривой через соответствующее значение OD.

4. Если значения OD в образце превышают верхний предел стандартной кривой, то они должны быть повторно обнаружены после надлежащего разбавления и умножены на кратное разбавление при расчете концентрации.

ПараметрыА.

1. Данные и стандартные кривые

Этот рисунок предназначен только для справки, и содержание проб IL - 2 у мышей должно быть рассчитано на основе стандартной кривой, составленной стандартным продуктом испытания.

2. Чувствительность:

Низкая концентрация IL - 2 у мышей до 7 пг / мл,

Средние значения 20 НОК OD плюс два стандартных отклонения рассчитывают соответствующую обнаруживаемую концентрацию.

3. Специфичность:

Не реагирует с мышами IL - 2, 4, 6, 8, 10, крысами IL - 2, 4, 6, 8 и т.д.

4. Повторяемость:

Коэффициент вариации внутри пластины < 10%

5. Коэффициент возврата:

Добавьте три различных концентрации IL - 2 в плазму крови и клеточную культуру выбранных здоровых мышей для расчета коэффициента восстановления.

6. Линейное разбавлениеА.

Высокая концентрация мыши IL - 2 была добавлена в четыре отдельных образца плазмы и клеточной культуры здоровых мышей, соответственно, для разбавления в пределах стандартной кривой динамики и оценки линейности.

Список литературыА.

1. Yokota, T. et al. (1985) Proc. Натал. Аксид. Наука. USA 82:68.

2. Kashima, N. et al. (1985) Nature 313:401.

3. Fuse, A. et al. (1984) Nucl. Резолюция кислот 12:9323.

4. Томас Р. и др. (2003 год)J Лейкоцит Био.961 - 965

5. Bronte, V. et al. (1995) J. Immunol.5282-5292

6. Yokota, T. et al. (1985) Proc. Натал. Акад. Наука. USA 82:68.

7. Kashima, N. et al. (1985) Nature 313:401.

Часто задаваемые вопросы и решенияА.

Интерлейкин - 2 у мышейНабор ELISAОписание заказа:

Подавляющее большинство продуктов имеется в наличии и, как правило, может быть отправлено в день заказа.
2. Некоторые продукты для очень полезного использования, нужно забронировать заранее на 1 - 2 дня, зарубежные фьючерсы нужно забронировать за 3 - 6 недель.
3. Цены на некоторые продукты будут меняться в зависимости от срока поставки, партии и других факторов, если есть изменения, в зависимости от новой цены в день заказа.
4. Ежедневный заказ заканчивается ровно в 16 часов, некоторые города могут быть целы до 17 часов, из - за превышения крайнего срока доставка не может быть организована на следующий день.
5. После оплаты товара, пожалуйста, сообщите нам нижний лист и т. Д. вместе с адресом грузополучателя, именем и т. Д. по факсу, СМС и т. Д.

Набор ELISAОписание перевозки:

Продукты с очень низкими температурами: перевозка сухим льдом при перевозке продуктов с очень низкими температурами. Упакуйте продукт сухим льдом, а затем запечатайте его пеноматериалом, клейкая лента слоями склеивает пеноматериал, помещает его в коробку Solebal, а затем доставляет в кооперативную курьерскую доставку, безопасную, быструю и эффективную и уверенную доставку клиентам, чтобы гарантировать, что характер продукта стабилен, как один, чтобы защитить ваш эксперимент.
Криогенные продукты: транспортировка низкотемпературных продуктов в пакетах со льдом Solebol во время транспортировки. Предварительно заверните продукт в ледяной мешок, а затем запечатайте пеноматериал, плотно запечатав пеноматериал лентой, а затем поместите его в коробку Solebal (эффект изоляции может длиться меньше недели), а затем доставите в кооперативный экспресс, безопасную, быструю и эффективную и уверенную доставку клиентам, чтобы гарантировать, что характер продукта стабилен, как один, чтобы сопровождать ваш эксперимент.
Продукты при комнатной температуре: При перевозке продуктов при комнатной температуре не требуется льда или специальной упаковки. Продукция быстро распределяется персоналом склада компании, точная, быстрая и эффективная экспресс - доставка гарантирует, что продукт быстро доставляется в ваши руки.