Интерлейкин - 1β у мышей

Мыши интерлейкин - 1 бета - ELISA

Справочная информацияА.

IL - 1 делится на два вида: IL - 1a и IL - 1β, а гены IL - 1 человека и мыши локализованы в хромосоме 2, каждая из которых содержит семь экзосом. Прекурсор IL - 1 (ProIL - 1) составляет 31kDa, образуя зрелую молекулу IL - 1 путем крекинга белковой гидролизной ферменты. IL - 1 обладает высокой гомогенностью в различных видах. На уровне аминокислот IL - 1α и IL - 1β имеют гомогенность 60 - 70% и 75 - 78% в разных родословных; Молекулы IL - 1 α и IL - 1 β имеют молекулярную массу около 17,5 кDa и изоэлектрические точки 5 и 7, соответственно, с гомологией 28%.Зрелые мыши с 17kDa IL - 1β имеют ту же последовательность аминокислот, что и IL - 1β у хлопчатобумажных крыс и крыс, и 65 - 78% идентичность, что и IL - 1β у собак, лошадей, кошек, людей, свиней и обезьян.

IL - 1β вырабатывается в основном мононуклетами и макрофагами в крови, астроцитами, малоотростковыми глиями, кортикальными клетками надпочечников, NK - клетками, эндотелиальными клетками, рогообразовательными клетками, макроядерными клетками, тромбоцитами, нейронами, нейтральными гранулоцитами, костными клетками, клетками Сюванга, клетками питательного слоя, Т - клетками и фибробластами также может производить IL - 1β. IL - 1 обладает широким спектром иммуномодулирующих эффектов и оказывает тепловое и опосредованное воспаление.А.

Принцип обнаруженияА.

Соларбио (Соларбио ®)В комплекте ELISA используется метод иммуноадсорбции ферментов, основанный на двойных антителах.А.СопротивлениеМышиИл-1бетаМоноклональные антитела помещаются на энзимную пластину; Добавьте градиентно - разбавленные стандартные продукты и предварительно разбавленные образцы, стандартные продукты и образцы соответственноМышиИл-1бетаЭто антитело к пакету на ферментной пластине.ПолностьюОбъединение;После стиркиДобавьте биотин.МышиИл-1бетаАнтителаАнтитела будут упакованы в стандартные продукты, захваченные антителами, и образцы мышей IL - 1бетаВозникновение специфических связей; После стиркиДобавьте стрептопенициллин, отмеченный пероксидазой хрена (HRP), биотин и стрептопенициллин.Нековалентность высокой прочностиОбъединение;После стиркиДобавить субстрат цвета TMB，Если образцы в реакционном отверстии имеют разную концентрациюМышиИл-1бетаТогда HRP превращает бесцветный TMB в голубое вещество различной глубины (положительной корреляции), а отверстие реакции после добавления концевой жидкости становится желтым; После этого, в max = 450 нм(ОД = 450 нм)определение поглощения проб в реакционном отверстии(ОД)В выборкеМышиИл-1бетаКонцентрация иОДПоложительно пропорционально, можно вычислить с помощью программного обеспечения для построения стандартных кривых и четырех параметров.выходВ выборкеМышиИл-1бетаКонцентрация.

Принципиальная схема:

Внимание:※

• Набор должен использоваться в течение срока годности, не используйте просроченный реагент.
• При неиспользовании комплект должен храниться в 2 - 8Холодильник при температуре °С, растворилсяноНе израсходованные стандартные товары, пожалуйста, выбрасывайте.
• Перед использованием комплектаПожалуйстаПри комнатной температуре восстанавливается 30 мин，Полностью смешать все ингредиенты в коробке иПодготовленоОбразец.
• В ходе испытаний стандартные изделия и образцы рекомендуются для проверки проб, и последовательность добавления реагентов должна поддерживаться *.
• Чтобы избежать перекрестного загрязнения, используйте 1 - ю пробирку, головку пистолета в испытании，мембрана уплотнителя（※)И чистые пластиковые контейнеры..
• Концентрированные биохимические антитела и концентрированные ферменты имеют меньший объем, и во время перевозки небольшие количества жидкости попадают в стенки труб и бутылки.

Крышка, перед использованием центробежная обработка (5 - 10 S достаточно), так что жидкость на стенке трубы концентрируется на дне трубы, при извлечении, осторожно дуйте с помощью переносчика несколько раз.

• Кроме концентрата в комплекте.иТерминальная жидкость может быть универсальной, пожалуйста, не используйте наборы из других источниковСодержащиеся реактивыЗамена отдельных компонентов в этом наборе.
• Для обеспечения точности результатов каждый тестнужноСделайте стандартную кривую.

Советы по безопасности:Конец жидкости в комплекте - кислотный раствор,Оператор находитсяВремя использованияПожалуйстаНаденьте перчатки и позаботьтесь о защите;Также в процессе эксплуатации.Избегайте контакта реагентов с кожей и глазами, если вы случайно соприкасаетесь, промывайте их большим количеством чистой воды; При тестировании образцов крови и других жидкостей организма, пожалуйста, следуйте соответствующим правилам безопасности Национальной биологической лаборатории.

Состав и хранение комплектовА.

Собственное лабораторное оборудование (не предоставляется, может быть приобретено по заказу)

• Ферментометр (основная длина волны 450 нм, референтная длина волны 630 нм)
• Высокоточные пипетки и одноразовые всасывающие головки: 0,5 - 10,2 - 20,20 - 2002 - 1000 мкл
• Стиральная машина или бутылка
• 37℃ИнкубацияБящик
• Двойной пар, деионизированная вода, метроны и т.д.
• Полипропиленовая пробирка для разбавления

Сбор и хранение образцов:

• Клеточная культура очищается:

Поместите клеточную среду в стерильную центрифужную трубку, 1000 при 4°CХg Центрифуга 10 мин, затем установите эквивалент верхней очистки в небольшие трубки EP и в -2Сохранить при 0°C(Обнаружение в течение 24 часов может быть помещено в хранилище при температуре 2–8 °C)Избегайте повторного замораживания и оттаивания.

• Образцы сыворотки:

Кровь при комнатной температуре естественным образом застывает в течение 20 мин, при 4 °С 1000Хg Центрифуга 10 мин, затем установите эквивалент верхней очистки в небольшие трубки EP и в -2Сохранение при 0°C (обнаружение может быть помещено в хранилище 2–8°C в течение 24 часов), если в процессе хранения есть осадок, пожалуйста, снова центрифугируйте, чтобы избежать повторного замораживания и таяния.

• Образец плазмы:

Вся кровь собирается в трубку, содержащую антикоагулянты, и в соответствии с фактическими требованиями образца выбирается EDTA, лимонат натрия или гепарин в качестве антикоагулянта, смешивается 20 мин и 1000 при 4°CХg Центрифуга 10 мин, затем установите эквивалент верхней очистки в небольшие трубки EP и в -2Сохранение при 0°C (обнаружение может быть помещено в хранилище 2–8°C в течение 24 часов), чтобы избежать повторного замораживания и таянияА.

※Внимание:Образцы сывороточной плазмы избегают использования гемолитических и липидных образцов крови, чтобы не повлиять на результаты теста*Если в выборкеЦельОбнаруженные концентрации выше, чем высокие значения стандартного продукта, пожалуйста, сделайте образец соответствующим кратным после разбавления, рекомендуется провести предварительный эксперимент перед официальным экспериментом, чтобы определить кратность разбавления.

Приготовьтесь.А.

• Рециркуляция реагента: за 30 минут до экспериментаНабор реагентов,Предстоит проверитьобразецПоместить вКомнатная температуравнизВ случае кристаллизации концентрированного моющего раствора поместите его в ванну с температурой 37°C до полного растворения кристаллов.А.
• ПриготовлениеСтиральная жидкость:Предварительно рассчитайте объём разбавленного скруббера, а затемДвойной пар или деионизированная водаДвадцать раз.Разбавить концентратВ два разаПрименяемая жидкость, неиспользованный концентрат4℃Холодильники сохранены.

3. стандартный образецградиентное разбавлениеА.Добавление стандартных товаров /образецРазбавленная жидкость (SР1)1 млВ стандартном изделии, замороженном и высушенном, оставьте его в покое в течение 15 минут после растворения * и слегка перемешайте (концентрация:2000pg/ml)， затемсогласноСледующие концентрации:2000 год,1000, 500, 250, 125, 62,5, 31.25, 0 пг / мл для разбавления. Стандартный раствор (2000пг/мл)Неиспользованные должны быть утилизированы или, по мере необходимости, распределены по количеству одного использования и храниться в холодильнике от - 20 до - 80°С,В частности:рисунокА.

4. Рабочий раствор биогенных антител:Вычислить заранееКоличество, необходимое для испытания, с помощью обнаружения разбавленной жидкости (SР2)В 100 раз больше концентрата антител.РазбавлениеВ 1 раз больше рабочей жидкости (Полное смешивание перед разбавлением)，ПожалуйстаЧерез 30 минут.Добавьте в отверстие реакции.

Рабочие жидкости биогенных антителМетод разбавленияНиже приводится информация:

5. Рабочий раствор ферментативного соединения: в количестве, необходимом для каждого испытания, разбавляется раствором ферментативного соединения (SR3 Разбавление 100 - кратного концентрата ферментовУдвоить применениеРабочая жидкость（Перед разбавлениемЦентрифугирование)Пожалуйста, используйте в течение 30 минут.А.

Рабочие жидкости ферментативных соединенийМетод разбавленияНиже приводится информация:

6. Способы стирки:

• Автомойка пластины: сбрасывание жидкости из отверстия ферментативной пластины, высушивание на толстой насосной бумаге, впрыскивание моющей жидкости 300ul / отверстие, интервал между наполнением и высасыванием 30 секунд, стирка пластины 5 раз.
• Ручная стирка пластины: сбрасывание жидкости из отверстия ферментативной пластины, высушивание на толстой насосной бумаге, добавление моющей жидкости в бутылку 300ul / отверстие, после 30 секунд покоя, чтобы очистить жидкость в отверстии ферментативного маркера, высушить на толстой насосной бумаге, промыть пластину 5 раз.

Шаги обнаружения:

РезультатыА.

1. Значение OD измеряется с помощью ферментометра на длине волны 450 нм. Выберите двухволновое детектирование с опорной длиной волны 630 нм. Если двухволновое детектирование невозможно, используйте 450 нмОДИзмеренные значенияМинус630 нмОДИзмеренные значения.

Расчет среднего значения OD для стандартных изделий и образцов: значение OD для каждого стандартного изделия и образца вычитается из значения OD для нулевых отверстий

3.Используйте стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, абсорбцию OD в качестве вертикальных координат, используя программное обеспечение для построения стандартной кривой, образцачжунИл-1бетаСодержание может пройтисоответствующийЗначения OD преобразуются из стандартной кривой в соответствующую концентрацию.

Если значение OD образца превышает верхний предел стандартной кривой,делатьПосле правильного разбавленияПовторное тестированиеПри расчете концентрации умножается на разжижение.А.

ПараметрыА.

1. Данные и стандартные кривые

Эта диаграмма предназначена только для справочных целей и должна быть рассчитана на основе стандартной кривой, составленной стандартным продуктом данного испытанияМышиИл-1бетаСодержание выборки

2. Чувствительность:

Низкий уровень обнаруженияМышиИл-1бетаКонцентрация до15пг/мл,

Средние значения 20 НОК OD плюс два стандартных отклонения рассчитывают соответствующую обнаруживаемую концентрацию.

3. Специфичность:

НетМышиИл-2、3.4, 6,7И 10Ил-1а, Ил-1РаРавная реакция

4. Повторяемость:

Коэффициент вариации внутри пластины < 10%

5. Коэффициент возврата:

& ВыбратьЗдоровьеМышиПлазма кровиКлеточная культура очищается.Добавьте три различных уровня концентрации.МышиИл-1бетаРасчет ставки возврата.

6. Линейное разбавлениеА.

Отдельно выбранные4 ЗдоровьеПлазма и клеточная культура мышей очищаютсяДобавление высокой концентрацииМышиИл-1бетаРазбавление в пределах стандартной кривой динамики, оценка линейности.

Список литературыА.

1Dinarello, C.A. (1994) Eur. Cytokine Netw.5: 517.

2March, C.J. et al. (1985) Природа315: 641.

3Sims, J.E. et al. (1989) Proc. Натал. Акад. Наука. США86:: 8946.

4Sims, J.E. et al. (1988) Наука241: 585.

5Huang, J. et al. (1997) Proc. Натал. Акад. Наука. США94: 12829.

6Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Химия.272: 7727.

7Sims, J.E. et al. (1993) Proc. Натал. Акад. Наука. США90: 6155.

8Giri, J. G. et al. (1994) J. Immunol.153: 5802.

9Symons, J.A. et al. (1995) Proc. Натал. Акад. Наука. США92: 1714.

10Wewers, M.D. et al. (1997) J. Immunol.159: 5964.

11Gonzales-Hernandez, J.A. et al. (1995) Clin. Эксп. Иммунол.99: 137.

Часто задаваемые вопросы и решенияА.

Мыши интерлейкин - 1 бета - ELISAОписание заказа:

Подавляющее большинство продуктов имеется в наличии и, как правило, может быть отправлено в день заказа.
2. Некоторые продукты для очень полезного использования, нужно забронировать заранее на 1 - 2 дня, зарубежные фьючерсы нужно забронировать за 3 - 6 недель.
3. Цены на некоторые продукты будут меняться в зависимости от срока поставки, партии и других факторов, если есть изменения, в зависимости от новой цены в день заказа.
4. Ежедневный заказ заканчивается ровно в 16 часов, некоторые города могут быть целы до 17 часов, из - за превышения крайнего срока доставка не может быть организована на следующий день.
5. После оплаты товара, пожалуйста, сообщите нам нижний лист и т. Д. вместе с адресом грузополучателя, именем и т. Д. по факсу, СМС и т. Д.

Описание перевозки:

Продукты с очень низкими температурами: перевозка сухим льдом при перевозке продуктов с очень низкими температурами. Упакуйте продукт сухим льдом, а затем запечатайте его пеноматериалом, клейкая лента слоями склеивает пеноматериал, помещает его в коробку Solebal, а затем доставляет в кооперативную курьерскую доставку, безопасную, быструю и эффективную и уверенную доставку клиентам, чтобы гарантировать, что характер продукта стабилен, как один, чтобы защитить ваш эксперимент.
Криогенные продукты: транспортировка низкотемпературных продуктов в пакетах со льдом Solebol во время транспортировки. Предварительно заверните продукт в ледяной мешок, а затем запечатайте пеноматериал, плотно запечатав пеноматериал лентой, а затем поместите его в коробку Solebal (эффект изоляции может длиться меньше недели), а затем доставите в кооперативный экспресс, безопасную, быструю и эффективную и уверенную доставку клиентам, чтобы гарантировать, что характер продукта стабилен, как один, чтобы сопровождать ваш эксперимент.
Продукты при комнатной температуре: При перевозке продуктов при комнатной температуре не требуется льда или специальной упаковки. Продукция быстро распределяется персоналом склада компании, точная, быстрая и эффективная экспресс - доставка гарантирует, что продукт быстро доставляется в ваши руки.