Мыши интерлейкин - 1aELISA

Мыши интерлейкин - 1aELISA

Справочная информация:

IL - 1 имеет две различные молекулярные формы, один IL - 1α, состоящий из 159 аминокислот; Другой, называемый IL - 1β, содержит 153 аминокислоты; Они кодируются разными генами. Ген IL - 1 человека и мыши локализован в хромосоме № 2 и содержит семь экзосом. Прекурсор IL - 1 (ProIL - 1) составляет 31kDa, образуя зрелую молекулу IL - 1 путем крекинга белковой гидролизной ферменты. IL - 1 обладает высокой гомогенностью в различных видах. На уровне аминокислот IL - 1α и IL - 1β имеют гомогенность 60 - 70% и 75 - 78% в разных родословных; Но в том же роде гомология IL - 1α и IL - 1β составляет всего 25%. Молекулы IL - 1 α и IL - 1 β имеют молекулярную массу около 17,5 кDa, изоэлектрические точки 5 и 7, гомология 28%, а IL - 1 α и IL - 1 β объединяются с одной и той же сродствомКлеточная поверхностьРецепторы выполняют те же биологические функции.

Принцип обнаруженияА.

Соларбио (Соларбио ®)В комплекте ELISA используется метод иммуноадсорбции ферментов, основанный на двойных антителах. Поместите анти - мышиный моноклональный антитело IL - 1a на энзимную планку; Добавьте стандартные продукты с градиентным разбавлением и предварительно разбавленные образцы, соответственно, и мыши IL - 1a в стандартных продуктах и образцах будут полностью связаны антителами с пакетами на ферментных маркерах; После стирки пластины добавляется биохимическое антитело IL - 1a у мышей, которое специфически связывается с IL - 1a у мышей в стандартных продуктах и образцах, захваченных антителами на пластине; После стирки пластины добавьте стрептопенициллин, маркированный пероксидазой хрена (HRP), и биотин и стрептопенициллин будут иметь высокоинтенсивное нековалентное соединение; После стирки пластины добавляется субстрат TMB, а при наличии различных концентраций IL - 1a у мышей в пробах реакционного отверстия HRP превращает бесцветный TMB в голубое вещество различной глубины (положительной корреляции), а отверстие реакции после добавления концентрирующей жидкости становится желтым; После этого, в max = 450 Концентрация IL - 1a у мышей в пробах была определена на нм (OD = 450 нм), а концентрация IL - 1a у мышей в пробах была прямо пропорциональна концентрации OD. Концентрация IL - 1a у мышей в пробах была рассчитана с помощью программного обеспечения для построения стандартных кривых и четырех параметров.

Принципиальная схема:

Внимание:※

• Набор должен использоваться в течение срока годности, не используйте просроченный реагент.
• При неиспользовании комплект должен храниться в холодильнике при температуре 2–8°C, а стандартные изделия, которые были растворены, но не израсходованы, выбрасывайте.
• Пожалуйста, восстановите 30 при комнатной температуре. min， И полностью смешивает различные компоненты в коробке с реагентами и подготовленные образцы.
• В ходе испытаний стандартные изделия и образцы рекомендуются для проверки проб, и последовательность добавления реагентов должна поддерживаться *.
• Чтобы избежать перекрестного загрязнения, используйте 1 - ю пробирку, головку пистолета, уплотнительную пленку (※) и чистые пластиковые контейнеры. А.
• Концентрированные биохимические антитела и концентрированные ферменты имеют меньший объем, и во время перевозки небольшие количества жидкости попадают в стенки труб и бутылки.

Крышка, перед использованием центробежная обработка (5 - 10 S достаточно), так что жидкость на стенке трубы концентрируется на дне трубы, при извлечении, осторожно дуйте с помощью детектора несколько раз.

• Пожалуйста, не используйте тест, содержащийся в комплекте из других источников, за исключением концентрата и концентрата в наборе, который может быть использован

Агент заменяет один компонент в этом наборе.

• Для обеспечения точности результатов каждый тест должен быть стандартным кривым.

Советы по безопасности:Конец жидкости в комплекте - кислотный раствор, при использовании операторы должны носить перчатки и следить за защитой; Во время работы также избегайте контакта реагентов с кожей и глазами, если вы случайно соприкасаетесь, используйте большое количество чистой воды для очистки; При тестировании образцов крови и других жидкостей организма, пожалуйста, следуйте соответствующим правилам безопасности Национальной биологической лаборатории.

Состав и хранение комплектовА.

Собственное лабораторное оборудование (не предоставляется, может быть приобретено по заказу)

• Ферментометр (основная длина волны 450 нм, референтная длина волны 630 нм)
• Высокоточные пипетки и одноразовые всасывающие головки: 0,5 - 10,2 - 20,20 - 2002 - 1000 мкл
• Стиральная машина или бутылка
• 37℃инкубатор
• Двойной пар, деионизированная вода, метроны и т.д.
• Полипропиленовая пробирка для разбавления

Сбор и хранение образцов:

• Клеточная культура очищается:

Клеточная среда перемещает стерильные центробежные трубки, 1000 × g центробежные 10 мин при 4 ° C, затем равное количество верхней очистки упаковывается в небольшие EP - трубки и сохраняется при 20 ° C (обнаружение может быть помещено в хранилище 2 - 8 ° C в течение 24 часов), чтобы избежать повторного замерзания.

• Образцы сыворотки:

После естественного затвердевания крови при комнатной температуре в течение 20 мин, 1000 × g центрифуга 10 мин при 4 ° C, затем эквивалентное количество верхней очистки упаковывается в небольшие EP - трубки и сохраняется при 20 ° C (обнаружение может быть помещено в хранилище 2 - 8 ° C в течение 24 часов), в случае осаждения в процессе хранения, пожалуйста, снова центрифугируйте, чтобы избежать повторного замерзания и оттаивания.

• Образец плазмы:

Вся кровь собирается в трубку, содержащую антикоагулянт, в соответствии с фактическими требованиями образца выбирается EDTA, лимонат натрия или гепарин в качестве антикоагулянта, смешивается 20 мин, при 4°C 1000 ×g центрифуг 10 мин, затем равное количество верхней очистки упаковывается в небольшую трубку EP и сохраняется при 20°C (тест в течение 24 часов может быть помещен в хранение 2–8 °C), избегая повторного замерзания и таяния.

※Внимание:Образцы сывороточной плазмы избегают использования гемолитических и гиперлипидных образцов крови, чтобы не повлиять на результаты тестирования; Если концентрация мишени в образце выше, чем у стандартного продукта, сделайте образец соответствующим кратным после разбавления, и рекомендуется провести предварительный эксперимент перед официальным экспериментом, чтобы определить кратность разбавления.

Приготовьтесь.А.

• Рециркуляция реагента: сначала за 30 минут до эксперимента коробка реагента, образец, подлежащий измерению, помещается при комнатной температуре, концентрированный моющий раствор, если кристаллизация, помещайте в ванну с температурой 37°C до полного растворения кристаллов.
• Приготовление скруббера: предварительно рассчитать объем разбавленного скруббера, затем разбавить 20 - кратное концентрированное скрубберное средство в 1 - кратное применение с помощью двойного пара или деионизированной воды, а неиспользованный концентрированный скрубберный раствор поместить в холодильник 4°C для хранения.

3. Степень градиентного разбавления стандартного продукта: Добавьте стандартный продукт / образец разбавления (SR1) 1 мл замороженного сухого стандартного продукта, оставьте в покое в течение 15 минут, пока он * не растворится и слегка перемешается (концентрация 2000 пг / мл), а затем разбавляйте в соответствии со следующей концентрацией: 2000, 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 0 пг / мл. Неоконченный исходный растворенный стандартный раствор (2000 пг / мл) должен быть утилизирован или упакован по мере необходимости в соответствии с однократным использованием и храниться в холодильнике от - 20 до - 80°С, как показано на рисунке ниже.

Биотизированный рабочий раствор антитела: предварительно рассчитайте количество, необходимое для испытания, и разбавите 100 - кратный концентрат антитела в 1 - кратное применение с помощью контрольного разбавленного раствора (SR2) (полностью перемешайте перед разбавлением), добавьте его в отверстие реакции в течение 30 минут.

Рабочие жидкости биогенных антителМетод разбавленияНиже приводится информация:

Рабочий раствор ферментативного соединения: в количестве, требуемом для каждого испытания, 100 - кратный концентрат ферментативного соединения разбавляется в 1 - кратное применение рабочей жидкости (центрифуга перед разбавлением) разбавленным раствором ферментативного соединения (SR3), используйте в течение 30 минут.

Рабочие жидкости ферментативных соединенийМетод разбавленияНиже приводится информация:

6. Способы стирки:

• Автоматизированная стиральная пластина: сбрасывание жидкости из отверстия ферментативной пластины, высыхание на толстой насосной бумаге, впрыскивание стирающей жидкости 300ul / отверстие, интервал между наполнением и всасыванием 30 секунд, промывка пластины 5 раз.
• Ручная стирка пластины: сбрасывать жидкость из отверстия ферментативной пластины, высушивать ее на толстой насосной бумаге, добавлять промывочную жидкость 300ul / отверстие в бутылку, после 30 секунд покоя сбрасывать жидкость из отверстия ферментативной пластины, высушивать на толстой насосной бумаге, промывать пластину 5 раз.

Шаги обнаружения:

РезультатыА.

1. Значение OD измеряется с помощью ферментометра на длине волны 450 нм. Выберите двухволновое измерение с опорной длиной волны 630 нм. Если двухволновое обнаружение невозможно, используйте значение OD 450 нм для вычитания значения OD 630 нм.

Расчет среднего значения OD для стандартных изделий и образцов: значение OD для каждого стандартного изделия и образца вычитается из значения OD для нулевых отверстий

3. Используя стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, оптическую абсорбцию в качестве вертикальных координат, используя программное обеспечение для построения стандартной кривой, содержание IL - 1a в образце может быть преобразовано из стандартной кривой через соответствующее значение OD.

4. Если значения OD в образце превышают верхний предел стандартной кривой, то они должны быть повторно обнаружены после надлежащего разбавления и умножены на кратное разбавление при расчете концентрации.

ПараметрыА.

1. Данные и стандартные кривые

Этот рисунок предназначен только для справки, и содержание проб IL - 1A у мышей должно быть рассчитано на основе стандартной кривой, составленной стандартным продуктом испытания.

2. Чувствительность:

Низкие обнаруживаемые концентрации IL - 1a до 15 пг / мл у мышей,

Средние значения 20 НОК OD плюс два стандартных отклонения рассчитывают соответствующую обнаруживаемую концентрацию.

3. Специфичность:

Не реагирует с мышью IL - 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 12, 13, крыса IL - 1бетаРавная реакция

4. Повторяемость:

Коэффициент вариации внутри пластины < 10%

5. Коэффициент возврата:

Добавьте три различных концентрации IL - 1a в плазму крови и клеточную культуру отдельных здоровых мышей для расчета коэффициента восстановления.

6. Линейное разбавлениеА.

Высокая концентрация мыши IL - 1a была добавлена в четыре отдельных образца плазмы и клеточной культуры здоровых мышей, соответственно, для разбавления в пределах стандартной кривой динамики и оценки линейности.

Список литературыА.

1. Greenfeder, S.A. et al. (1995) J. Biol. Химия.270: 13575.

2. Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Химия.272: 7727.

3. Sims, J.E. et al. (1994) Clin. Иммунитет. Иммунопатолог.72: 9.

4. Sims, J.E. et al. (1993) Proc. Натал. Акад. Наука. США90: 6155.

5. Colotta, F. и A. Mantovani (1994) Trends Pharmacol. Наука.14: 138.

6. Svenson, M. et al. (1993) Цитокин5: 427.

7. Giri, J. G. et al. (1994) J. Immunol.153: 5802.

Часто задаваемые вопросы и решенияА.

Мыши интерлейкин - 1aELISAОписание заказа:

Подавляющее большинство продуктов имеется в наличии и, как правило, может быть отправлено в день заказа.
2. Некоторые продукты для очень полезного использования, нужно забронировать заранее на 1 - 2 дня, зарубежные фьючерсы нужно забронировать за 3 - 6 недель.
3. Цены на некоторые продукты будут меняться в зависимости от срока поставки, партии и других факторов, если есть изменения, в зависимости от новой цены в день заказа.
4. Ежедневный заказ заканчивается ровно в 16 часов, некоторые города могут быть целы до 17 часов, из - за превышения крайнего срока доставка не может быть организована на следующий день.
5. После оплаты товара, пожалуйста, сообщите нам нижний лист и т. Д. вместе с адресом грузополучателя, именем и т. Д. по факсу, СМС и т. Д.

Описание перевозки:

Продукты с очень низкими температурами: перевозка сухим льдом при перевозке продуктов с очень низкими температурами. Упакуйте продукт сухим льдом, а затем запечатайте его пеноматериалом, клейкая лента слоями склеивает пеноматериал, помещает его в коробку Solebal, а затем доставляет в кооперативную курьерскую доставку, безопасную, быструю и эффективную и уверенную доставку клиентам, чтобы гарантировать, что характер продукта стабилен, как один, чтобы защитить ваш эксперимент.
Криогенные продукты: транспортировка низкотемпературных продуктов в пакетах со льдом Solebal во время транспортировки. Предварительно заверните продукт в ледяной мешок, а затем запечатайте пеноматериал, плотно запечатав пеноматериал лентой, а затем поместите его в коробку Solebal (эффект изоляции может длиться меньше недели), а затем доставите в кооперативный экспресс, безопасную, быструю и эффективную и уверенную доставку клиентам, чтобы гарантировать, что характер продукта стабилен, как один, чтобы сопровождать ваш эксперимент.
Продукты при комнатной температуре: При перевозке продуктов при комнатной температуре не требуется льда или специальной упаковки. Продукция быстро распределяется персоналом склада компании, точная, быстрая и эффективная экспресс - доставка гарантирует, что продукт быстро доставляется в ваши руки.