Экстрактор нуклеиновой кислоты

Реактор для экстракции РНК TriZol

Номер товара:R1000

Условия хранения:Реактор для экстракции РНК TriZolСтабильно сохраняется при комнатной температуре в течение 12 месяцев.Мы предлагаем сохранитьВ среде от 2 до 8°C.

Важное примечание:

Этот продукт содержит фенол, токсичный и коррозионный. При вдыхании внутрь, при контакте с кожей, при проглатывании и т. Д. могут возникнуть отравления, ожоги и другие телесные повреждения. При использовании данного изделия следует носить защитные средства, такие как перчатки, повязки для глаз, маски и т.д. В случае неосторожного контакта следует немедленно промыть большим количеством воды и отправиться в больницу для лечения.

Презентация продукции:

Реактор для экстракции РНК TriZolРеактор для экстракции РНК широкого спектра. Экспериментальные операции быстрые и удобные, яркие цвета, легко расслоенные. Этот реагент имеет широкий спектр применений и может извлекать общую РНК из образцов тканей животных, растительных материалов, различных микроорганизмов и культивируемых клеток. Метод имеет лучшие эффекты разделения для небольшого количества тканей (50 - 100 мг) и клеток (5 × 106), а также большого количества тканей (≥1 г) и клеток (> 107). Образцы полностью расщепляются в общем РНК - экстракте TriZol, обеспечивая при этом максимально возможную целостность РНК. После добавления центрифуги хлороформа раствор делится на три слоя: верхнюю бесцветную водную фазу, среднюю и нижнюю красную органическую фазу, а РНК распределена в верхнем слое очистки. После сбора верхнего слоя общая РНК может быть восстановлена путем осаждения изопропиловым спиртом. Извлеченная общая РНК имеет хорошую целостность, не содержит белков и загрязнения ДНК и может быть использована в различных обычных экспериментах молекулярной биологии, таких как RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、 Внетелесный перевод и т.д.

Реактор экстракции РНК TriZol способствует выделению нескольких РНК разных размеров. Например, электрофорез геля РНК - агарида, извлеченного из печени крысы и окрашенного бромидом этиленглидина, показывает множество разрывных полос высокой молекулярной массы (мРНК и компоненты hnRNA) между 7 и 15 кб, две доминирующие рибосомы ~ 5 кб (28S) и ~ 2 кб (18S) и низкомолекулярные РНК между 0,1 и 0,3 кб (tRNA, 5S). Когда извлеченная РНК разбавляется TE, ее отношение A260 / A280 ≥ 1.8. Обратите внимание, что если речь идет о обычном электрофорезе агаринового геля, 28S находится примерно в 2 кб, 18S находится примерно в 1 кб, а положение геля в разных концентрациях меняется больше.

Внимание:

1.Для образцовПосле равномерного раствора реагента для извлечения РНК TriZol, если он не добавляется немедленно до хлороформа, он может быть помещен при температуре - 70°C более месяца. Осаждение РНК, сохраненное в 75% этанола, может сохраняться при 2 - 8°C в течение недели и при 20°C в течение 1 года. Период полураспада РНК относительно короткий и легко разлагаемый, и рекомендуется как можно скорее после извлечения провести последующие эксперименты, такие как обратная транскрипция в cDNA, Northern Blot и так далее.

Если эксперименты в нижнем течении очень чувствительны к ДНК, рекомендуется обрабатывать РНК с помощью Rnase free DNase I.

3.Собственные реактивы: хлороформ, изопропиловый спирт (Новое открытие или извлечениеСпециально для РНК), 75% этанола (приготовленного из воды, обработанной DEPC), Rnase free water или воды, обработанной DEPC.

Компания производит Реагент общей РНК - экстракции Trizol отличного качества, который может заменить Trizol Reagent от Invitrogen. Качество извлечения такое же, как и в последующих экспериментах *.

Этапы операции извлечения РНК: (Перед экспериментом ознакомьтесь с мерами предосторожности)

Подсказка:

использоватьПри экстракции РНК реагентами TriZol используются перчатки и защитные маски для глаз. Избегайте контакта с кожей и одеждой. Завершение операции в химическом вентиляционном шкафу. Избегайте вдыхания дыхательных путей. Без специальных инструкций все операции должны проводиться при комнатной температуре от 15 до 30 °C.

1. Равновесие раствора

a. Организации растений:

Взять свежие растительные ткани полностью измельчить в жидком азоте или обработать растительные ткани непосредственноРеактор для экстракции РНК TriZolСредняя и быстрая шлифовка, каждые 50 - 100 мг ткани добавляется 1 мл общего РНК - экстракта реагента TriZol, смешивается. Примечание: Объем образца, как правило, не должен превышать 10% от общего объема реагента для извлечения РНК TriZol.

b. Организации животных:

Свежие илиЗамороженные ткани животных при температуре 70 ° C максимально разрезаются, каждые 30 - 100 мг тканей добавляется 1 мл реагента для извлечения общей РНК TriZol, а симметризатор обрабатывается равномерным раствором. Или после измельчения в жидком азоте добавить 1 мл общего РНК - экстракта TriZol. Примечание: Объем образца, как правило, не должен превышать 10% от общего объема реагента для извлечения РНК TriZol.

c. Однослойные культивируемые клетки:

Постарайтесь удалить остатки питательной жидкости и перейти прямо к диаметру.Добавление 1 мл реагента для экстракции общей РНК TriZol в культурную пластину размером 3,5 см покрывает и многократно продувает крекинговые клетки. Требуемое количество реагента для экстракции РНК TriZol (1 мл на 10 см2) определяется размером питательной пластины, а не количеством клеток. При недостаточном количестве реагентов для экстракции общей РНК TriZol может привести к загрязнению ДНК в извлеченной РНК.

Внимание:

Клетки, культивирующие стенки, часто не могут * оторваться от бутылки культуры (чашки Петри), что не означает, что крекинг не *, когда клеточная мембрана фактически * разорвана и высвобождена полностьюRNA， Продолжайте делать это.

d. Клеточная суспензия:

Центробежный сбор клеток. вРеактор общей РНК - экстракции TriZol многократно продувает клетки с помощью пипеток. Каждые 5 - 10 ×10⁶Клетки животных, растения или дрожжевые клетки или 1 мл на 1 × 107 бактерийРеактор для экстракции РНК TriZolСледует избегать промывки клеток, прежде чем добавлять реагенты TriZol для извлечения РНК, так как это увеличивает вероятность распада мРНК. Разрыв некоторых дрожжей и бактерий может потребовать использования симулятора.

f. Кровь:

использоватьРеактор для экстракции РНК TriZolРеагент LS.

2.Поместите однородный образец при комнатной температуре после сильного сотрясения.Пять минут, чтобы вывести нуклеотиды *.

3. Дополнительные шаги:

вЦентробежная сила при 4 °C при 12 000 rpmЦентробежные 10 минут, чтобы очистить.

Если образцы содержат больше белка, жира, полисахаридов или мышц, клубнеплодные узлы растений и так далее могут быть удалены центробежным образом. В осадках после центрифугирования содержатся внеклеточные мембраны, полисахариды и высокомолекулярная масса.DNA， В нем содержится РНК. При обработке образцов жировой ткани верхний слой - это большое количество жира, которое следует удалить. Возьмите очищенный раствор для следующего шага.

4.каждый1 млРеактор для экстракции РНК TriZolПлюс 0,2 мл хлороформа. Закройте крышку трубки, сильное сотрясение в течение 15 секунд и поместите ее при комнатной температуре в течение 2 - 3 минут.

5.вЦентробежная сила при 4°C 12000 rpm высокоскоростная центрифуга замораживания в течение 10 - 15 минут. Постцентробежная смесь разделена на три слоя: нижний слой хлороформа красного органического фенола, средний слой и верхний бесцветный слой проб воды. РНК присутствует в пробах воды без исключения. Мощность водного слоя составляет примерно 50 - 60% от общей емкости добавочного РНК - экстракта TriZol. (Органический и промежуточный слои - это белки и ДНК, и если требуется экстракция, пожалуйста, свяжитесь с нами для получения метода экстракции).

6.Переместите образец воды в чистую центробежную трубку, добавьте изопропиловый спирт равного объема. Размещение при комнатной температуреДесять минут.

Осадки РНК обычно не видны до центрифугирования, а после центрифугирования образуют коллоидное осаждение на стороне и дне трубы.

7.При комнатной температуре или4°C 12000 rpm центрифуг в течение 10 минут, отбросить очистить.

8.присоединиться75% этанол очищается от осаждения. Каждый миллилитр реагента для экстракции РНК TriZol очищается от осаждения 1 мл 75% этанола.

9.При комнатной температуре или4 °C 12000 rpm центрифуг в течение 3 минут, оставьте очищенным, обратите внимание, чтобы не потерять осаждение РНК.

Примечание: Оставшееся небольшое количество жидкости может быть ненадолго центрифугировано, а затем высосано головкой пистолета, обратите внимание, чтобы не высасывать осаждение.

10.Помещение при комнатной температуре2 - 3 минуты, сушить. Добавьте 30 - 100 мкл Rnase free water, чтобы полностью растворить РНК, полученная РНК сохраняется при - 70°C, предотвращая разложение.

Примечание: Оставшееся небольшое количество жидкости может быть ненадолго центрифугировано, а затем высосано головкой пистолета, обратите внимание, чтобы не высасывать осаждение.