Категории продукта

Пекинская торгово - промышленная компания & lt; & lt; Лэмбольдт & gt; & gt;

Электронная почта
Телефон
Адрес
Парк программного обеспечения Чжунгуаньцунь, район Хайдянь, Пекин, 8 Huaxia Technology Building 307

Реактор на основе хлороформа для экстрактора нуклеиновой кислоты trizol pal

ДоговариваемыйОбновление на05/06

Модель

Природа производителя: Производители

Категория продукта

Место происхождения

Онлайн Консультация

Обзор

Реактор на основе хлороформа для экстракции нуклеиновой кислоты trizol pal используется для экстракции РНК. Trizol pal (реагент - заменитель хлороформа) может использоваться в сочетании с Trizol Reagent (грузовой номер: R1000), может заменить хлороформ, многократное извлечение системы крекинга для удаления белка, широко используется, может быть получена общая РНК из тканей животных, растительных материалов, различных микроорганизмов и питательных клеток и других образцов. Образец полностью расщепляется в тризоле, обеспечивая максимальную целостность РНК.

Подробности о продукте

Реактор тризол - пал для экстракции РНКНомер груза: R1200

Условия хранения: 0 - 30°C светонепроницаемое сохранение

Реактор тризол - пал для экстракции РНКОписание продукции:

Trizol PAL может использоваться в сочетании с Trizol Reagent (грузовой номер: R1000), может заменить хлороформ, многократное извлечение системы крекинга для удаления белка, широко используется для извлечения общей РНК из образцов тканей животных, растительных материалов, различных микроорганизмов и питательных клеток. Образец полностью расщепляется в тризоле, обеспечивая максимальную целостность РНК. После добавления центрифуги Trizol PAL раствор делится на три слоя: верхнюю бесцветную водную фазу, среднюю и нижнюю красную органическую фазу, где РНК распределена в верхнем слое очистки. После сбора верхнего слоя общая РНК может быть восстановлена путем осаждения изопропиловым спиртом. Извлеченная общая РНК имеет хорошую целостность, без белков и загрязнения ДНК и может быть использована в различных обычных экспериментах молекулярной биологии, таких как RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、 Внетелесный перевод и т.д.

Собственный реактив

Trizol Reagent (грузовой номер: R1000), изопропиловый спирт, 75% этанол, вода без РНК (только для нового вскрытия или извлечения РНК)

Экстрактор нуклеиновой кислотыВнимание:

Для предотвращения загрязнения RNASE необходимо обратить внимание на следующие аспекты:

1) Использование пластмассовых изделий и головок пистолетов без РНАСЕ во избежание перекрестного загрязнения.

2) Стеклянная посуда должна быть сухо обжарена при температуре 180°C до ее использования в течение 4 часов, пластиковая посуда может быть погружена в 0,5 м NaOH в течение 10 минут и стерилизована под высоким давлением после промывки водой chedi.

3) Для приготовления раствора следует использовать воду без РНК.

4) Операторы носят одноразовые маски и перчатки, а во время эксперимента им приходится менять перчатки.

Извлеченные образцы избегают повторного замораживания и таяния, иначе это повлияет на скорость и качество извлечения РНК.

3. При использовании данного изделия следует носить защитные средства, такие как перчатки, повязки для глаз, маски и т.д. При неосторожном контакте с глазом следует немедленно промыть его большим количеством воды и отправиться в больницу для лечения. При использовании вдали от очагов огня и тепла.

Осаждение РНК, сохраненное в 75% этанола, может сохраняться в течение недели при 2–8 °C и в течение 1 года при 20°C.

Период полураспада РНК относительно короткий, легко разлагаемый, и рекомендуется как можно скорее после извлечения провести последующие эксперименты, такие как обратная транскрипция в cDNA, Northern Blot и так далее.

Если эксперименты в нижнем течении очень чувствительны к ДНК, рекомендуется обрабатывать РНК с помощью DNase I без РНК.

Шаги действия:

1. Обработка различных материалов.

1.1 Растительная ткань: извлечение свежих растительных тканей полностью измельчается в жидком азоте или быстро измельчается непосредственно в тризоле после измельчения растительных жилетов, добавляя 1 мл тризола на 30 - 50 мг ткани, смешивая.

Примечание: Объем образца обычно не должен превышать 10% объема тризола.

1.2 Животные ткани: Возьмите свежие или замороженные при температуре 70°C ткани животных, насколько это возможно, и добавьте 1 мл тризола на 30 - 50 мг тканей, а симметризатор для равномерной обработки. Или после измельчения в жидком азоте добавить Trizol 1 мл смешивания.

Примечание: Объем образца обычно не должен превышать 10% объема тризола.

1.3 Однослойные культивируемые клетки: высасывают питательную жидкость, добавляя соответствующее количество тризола (1 мл тризола на 10 см2 площади) непосредственно в культурную пластину, многократно продувая пробоотборник, чтобы расщепить клетку. Также может быть обработан ферментом поджелудочной яйцеклетки, клеточный раствор переносится в центрифужную трубку Rnase - Free, 300 × g центробежная 5 мин, сбор клеточного осаждения, тщательное всасывание всех очищений, добавление Trizol 1 мл смешивания.

Примечание: 1) Количество собранных клеток не должно превышать 1×10 7.

2) Добавка TRNzol определяется по площади культивируемой пластины, а не по количеству клеток. Если доза тризола недостаточна, это может привести к загрязнению ДНК в извлеченной РНК.

3) При сборе клеток необходимо удалить клеточную питательную жидкость, иначе это приведет к расщеплению неполного, что приведет к снижению производства РНК.

1.4 Клеточная суспензия: центробежный сбор клеток. Каждые 5 × 10 6 - 1 × 10 7 клеток животных, растений и дрожжей или 1 мл тризола на 10 7 бактериальных клеток.

Примечание: 1) Не промывайте клетки перед добавлением тризола, чтобы предотвратить разложение РНК.

2) Некоторые дрожжи и бактериальные клетки могут нуждаться в симуляторе или измельчении жидким азотом.

1.5 Обработка крови: Возьмите свежую кровь напрямую, добавьте в 3 раза больше тризола (рекомендуется 0,25 мл цельной крови плюс 0,75 мл тризола), полностью вибрируйте и перемешайте.

1.6 Дополнительные шаги: для образцов с высоким содержанием белков, жиров, полисахаридов или внеклеточных веществ, таких как мышечная ткань, жировая ткань или клубни растений, нерастворимое вещество может быть удалено при 4 °C после равномерной обработки, 12 000 rpm (~ 13 400 × g) центрифугирования в течение 10 минут, когда осаждение содержит ДНК, содержащую внеклеточную массу, полисахариды и высокомолекулярную массу, в то время как РНК присутствует в верхней Цин.

После добавления тризола в образец его многократно надували несколько раз, в результате чего образец полностью расщеплялся. Комнатная температура помещается в течение 5 минут, так что комплекс белковых нуклеиновых кислот полностью отделяется от квана.

Добавляйте Trizol Pal в вышеуказанный раствор, добавляйте 0,2 мл Trizol Pal на 1 мл Trizol, закрывайте крышку трубки, сильно колеблясь 15 секунд, комнатная температура помещается в течение 2 - 3 минут.

4, 4°C 12000 rpm центрифуга в течение 15 минут, когда образец разделен на три слоя: красная органическая фаза, промежуточный слой и верхний слой бесцветной водной фазы, РНК в основном в водной фазе, перенося водную фазу (около 600 мкл) в новую центрифужную трубку RNase - Free (собственная).

5. Добавьте изопропиловый спирт равного объема в полученный раствор в водной фазе, перемешайте его наизнанку и поместите при комнатной температуре в течение 10 минут.

6, 4 ° C 12000 rpm центрифуг в течение 10 минут, отбросить очищение.

Добавьте 75% этанола (приготовленного из воды без РНАСЕ) для промывки и осаждения. Каждый 1 мл тризола промывается осаждением с использованием 1 мл 75% этанола.

8, 4°C 12000 rpm центрифуг в течение 3 минут, будьте осторожны, чтобы высосать очищение, обратите внимание, чтобы не высасывать осаждение РНК.

Примечание: Оставшееся небольшое количество жидкости может быть ненадолго центрифугировано, а затем высосано головкой пистолета, обратите внимание, чтобы не высасывать осаждение.

9, комнатная температура помещается 2 - 3 минуты, сушится. Добавьте 30 - 100 мкл воды без РНК, полностью растворив РНК, и полученная РНК сохраняется при - 70°С, предотвращая разложение.

Примечание: Осадки не должны быть слишком сухими, чтобы их не было трудно растворить.

Похожий продукт рекомендовать