TOPO-TA/Blunt Простой набор клонирования молнии

НобледTOPO-TA/Blunt Простой набор клонирования молнии

TOPO-TA Blunt Простой набор клонирования молнии

Номер каталогаА.42212

Содержание продукции:

Условия сохранения:

-20°C, хранение12 Месяц без ущерба для эффективности использования.

Описание продукции:

Клонирование TA или Blunt может быть завершено в течение 20 минут при комнатной температуре с положительной частотой около 100%, а также без ледяной ванны, без теплового возбуждения, без синего белого пятна скрининга, а также с возможностью подключения фрагментов ДНК до 10 кб.

Шаги клонирования(Фрагмент 3 kb)А.

Упрощенные шаги(≤10 кб) Фрагмент) Избежать восстановления, без жидкости ЛБ

1, Соединение: комнатная температура 5 часов*

1, Соединение: Соединение 37°C 5 минА.

2 Преобразование: комнатаВэнь 5 колокол*

2 Преобразование: ледяные ванны 5 min， Тепловое возбуждение при 42°C 1 min， На льду. 2 минА.

3. Восстановление: 180rpm, 37колебательная культура10 Минуты; Покрытие досками.

3, взять всю пластину для нанесения бактериальной жидкости, 37°C инвертировать культуру.

Шаги действия:

1. ПЦРПодготовка продуктов:

а. Требования к экстракту: экстракт не может быть фосфатирован.

b. Выбор фермента: выбор по мере необходимостиДНК Полимераза, этот носитель совместимПЦР ПродуктA Конец мира.

с. ЭлектрофорезКоличество и качество продуктов PCR:

(1) Только полоса назначения, может быть непосредственно соединительная реакция, не требует очистки;

Если имеется несколько полос, рекомендуется, чтобы гель перерабатывал фрагменты ДНК (DC011 - 100);

(3) В случае расширения с использованием плазмиды в качестве шаблона должна быть проведена рекуперация геля, поскольку плазмиды шаблона также образуют нецелевые колонии.

2. Реакция соединения:

1) Комнатная температура (20°C - 37°C) Установление системы соединения (10ul) Система* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *

Рекомендуемое количество вставленных фрагментов различного размера:

После добавления реагента дно легкой трубки смешивается (или слегка сдувается и смешивается))Точка сброса центрифуг собирает всю жидкость на дне центрифуги.

2) Комнатная температура (20°C - 37°C)Подключение5 Минут. Соединительные продукты могут преобразовываться непосредственно в сенсорные клетки или помещаться на лед для резервного использования.

3. Преобразование, восстановление, нанесение плит:

1）100ul Почувствуйте состояние клеток, поместите их при комнатной температуре и разморозите (А1 Около минуты), легкий шан несколько раз, чтобы равномерно взвесить клетки.

2) Присоединение10ul соединительная жидкость, слегка смешанная, комнатная температура (20°C - 37°C)ПоместитьПять минут.

3) Присоединение500улРавновесие до комнатной температурыЛБИли...SOC Культивирующая среда (без антибиотиков), 37℃180 об/минколебательная культура10 минА.

（Внимание: больше, чем3 кб Фрагменты, время культивирования колебаний увеличено до 30 - 60 Минуты, можно увеличить преобразователи. Или с помощью упрощенных шагов.)

4) 取200l Пластинка (Аминобензил50-100ug/ml）， Воспитание на ночь. (Чтобы получить больше клонов, 4000 об/мин Центрифугирование1 min， Отсосать часть выше чистки, сохранить100-150ul， Легкая пуля суспензионных бактерий, взятие всех пластин для покрытия бактериальной жидкостью)

Примечание: Если используется5ул Система, каждый компонент уменьшается вдвое пропорционально, количество использования может быть удвоено.

4. Отбор преобразователей:

Коэффициент положительной реакции на данный продукт довольно высок, как правило, может достичь того, что вы видите, то есть получить, до тех пор, пока вырастающая колония нормальная (не загрязненная)Микробы, трансформеров не так уж и мало.)В основном содержит вставки. Таким образом, вставка не превышает2-3 кб В этом случае можно обойтись без экспертизы.Прямой выбор1 - 2 бактерии для секвенирования.

1) МикробыПЦР Тест: Выберите одну колонию в 10ul Асептическая вода, смешать, взять 1ulПоместить25ул ПЦР Системы,АЭкстракт PCR или экстракт M13 общего назначения для определения положительного клонирования.

2)Для определения того, содержит ли клон цель, используется общее секвенирование цитат M13F (- 20) / M13R (- 26).

PTOPO TA / BluntКарта носителя:

PTOPO TA / Blunt Последовательность носителя:

TOPO-TA/Blunt Простой набор клонирования молнии