Универсальный Т - векторный колонизатор

Универсальный комплект для идентификации колоний Т - носителей методом PCR

Универсальный Т - векторный колонизатор

Номер каталога:42015

Состав комплекта, хранение, стабильность:

Хранение:-20 ℃ 保存。

Презентация продукции:

МикробыПЦРИдентификацияTЛегкий и быстрый способ определения наличия положительного клонирования (включая вставленные фрагменты) zui после клонирования носителя. Но колонии, которые можно увидеть на рынке,ПЦРВсе наборы для опознания используютсяТ3, Т7илиСП6ИзотермияTЭкстракт носителя, который может быть использован только для какого - то конкретногоTПодключение носителя к положительному клонированию. Если использовать по - другомуTПеревозчик, необходимо одновременно приобрести несколько наборов для идентификации, что значительно увеличивает стоимость использования. Компания использует универсальныйTУниверсальность разработки экстракта носителяTПереносная колонияПЦРИдентификационные наборы, достаточно приобрести один комплект, который можно использовать во всех распространенных на рынкеTноситель(включаяpGEMА,pUCА,в pBluescriptсерия)Подключение к положительному клонированию. Кроме того, принятоТ3, Т7илиСП6Микробы, которые делают цитатыПЦРОценить набор реагентов на очень короткое расстояние от места вставки, поэтому в идентификации100bpПри вставке левого или правого фрагментов полоса димера отрицательного клона и полоса положительного клона - ампликатора близки по размеру и не могут быть различимы. Лента димера экстракта часто рассматривается как положительная полоса амплификации, вызывающая ложную положительную реакцию. Напротив, вызывает ложноотрицательный. Этот комплект универсален.TРасстояние между экстрактерами носителя, когда фрагмент не вставлен, по крайней мере150bpС учетом вышесказанного и длины вставленного фрагмента можно четко определить, является ли полоса, на которой вставляется фрагмент, усиленной полосой, или полоса, на которой расширяется димер экстракта. Избежание ложноположительных или ложноотрицательных значительно повышает точность.Компания разработала портативныйПЦР MasterMixСистема предварительного смешивания, вам не нужно добавлять различные ингредиенты один за другим, непосредственно добавлять нужно фильтровать одиночные колонии, после1Около часа.ПЦРАнализы реакций и электрофореза позволяют получить результаты идентификации рекомбинантных колоний.

Ожидаемый фрагмент расширения:

Внимание:

1. При идентификации рекомбинантных колоний, прежде чем выбрать один колоний, следует сделать маркировку, чтобы облегчить идентификацию и последующее использование.

2. При заборе колоний следует выбирать одиночные колонии, не выбирая слишком много, чтобы не влиятьПЦРВ Результаты.

3. настройкаПЦРВо время программы, пожалуйста, определите время расширения в зависимости от размера вставленного фрагмента, если размер вставленного фрагмента равен1 кбНиже, Продолжительность30 - 45Достаточно секунд, и если фрагмент длиннее, время удлинения может быть увеличено в этом соотношении.

Шаги действия (в25mlСистемные примеры, которые клиенты также могут использовать20mlСистемы):

{С}1. Используйте следующую систему, содержащую экстракт.1 х Taq MasterMixРеакционная жидкость.

2. После нумерации колоний на планшетах, культивируемых в течение ночи, часть отдельных колоний выделяется стерилизованной головкой пистолета, чтобы добавить их в реакционную жидкость, которая хорошо перемешивается, чтобы колония полностью рассеялась в реактивную жидкость.

Для облегчения анализа результатов эксперимента можно установить еще одну трубку с отрицательным контрастом без колоний.

3. поставитьПЦРТрубка, помещенная на тепловой циркулятор, начинает реагировать при следующих условиях:

94℃10 минут

94℃30 секунд

55℃30 сек 30-33 цикла

72℃0,5-1 мин

72℃5 минут

Примечание: Время расширения должно быть скорректировано в зависимости от размера вставленного фрагмента. Продолжительность преображения увеличивается до10Минуты, в основном для расщепления колоний, высвобожденияДНКШаблоны.

После окончания реакции берёмОт 5 до 10mlТест непосредственно на электрофорез.

Примечание: Если бактерии трудно поддаются расщеплению или если примеси полиложноотрицательны, попробуйте следующий метод, расщепление высвобождаетсяДНКПоследующие мероприятия.

1. Добавить колонию 50mл ddВода (или10mл ddВода), вибрация.

2. 99Степень,10Ферменты в минутном инактивирующем растворе и высвобождаютсяДНКА.

3. 12000об/минЦентрифугирование1Минуты удаления фрагментов клеток.

4. Снять чисткуПЦРА,25ml ПЦРСистема берет5mlВыше (начало)50mл ddВода), или1mlВыше (начало)10mл ddВода) делает шаблоны.

Универсальный Т - векторный колонизатор