Универсальный Т - векторный колонизатор

НобледУниверсальный Т - векторный колонизатор

Универсальный комплект для идентификации колоний Т - носителей методом PCR

Номер каталога:42015

Состав комплекта, хранение, стабильность:

Хранение: 20°C Сохранение.

Параметры конкретного продукта зависят от параметров полученного описания продукта

Презентация продукции:

Идентификация колонии PCR является наиболее быстрым методом определения наличия положительного клонирования (включая вставленные фрагменты) после клонирования Т - вектора. Тем не менее, все доступные на рынке наборы для идентификации колонии PCR используют специальные Т - носители, такие как T3, T7 или SP6, и могут использоваться только для идентификации положительного клонирования, связанного с определенным Т - носителем. При использовании различных Т - носителей необходимо одновременно приобрести несколько наборов для идентификации, что значительно увеличивает стоимость использования. Компания использует универсальную T - векторную цитату для идентификации колонии PCR, разработанную нашей компанией, достаточно приобрести набор реагентов, который может быть использован для идентификации положительного клонирования всех распространенных T - носителей на рынке (включая pGEM, pUC, pBluescript серии). Кроме того, набор для PCR - идентификации колоний, использующий T3, T7 или SP6 в качестве экстракта, находится на очень коротком расстоянии от точки вставки, поэтому при идентификации вставки фрагментов размером около 100 bp или меньше полоса димера отрицательного клона и полоса положительного клонирования являются близкими по размеру и неотличимыми. Лента димера экстракта часто рассматривается как положительная полоса амплификации, вызывающая ложную положительную реакцию. Напротив, вызывает ложноотрицательный. Универсальный T - носитель этого комплекта для реагентов имеет расстояние не менее 150 bp и выше, когда фрагмент не вставлен, и длина вставленного фрагмента может четко различать, является ли полоса, усиленная фрагментом, или полоса, усиленная димером. Избежание ложноположительных или ложноотрицательных значительно повышает точность.Наша компания разработала портативную систему предварительного смешивания PCR MasterMix, которая не требует, чтобы вы добавляли различные ингредиенты один за другим, непосредственно добавляя одну колонию, требующую скрининга, после примерно часа реакции PCR и электрофореза, чтобы получить результаты идентификации рекомбинантной колонии.

Ожидаемый фрагмент расширения:

Внимание:

1. При идентификации рекомбинантных колоний, прежде чем выбрать один колоний, следует сделать маркировку, чтобы облегчить идентификацию и последующее использование.

2. При заборе колоний следует выбирать одиночные колонии и не выделять слишком много, чтобы не повлиять на результат PCR.

3. При настройке программы PCR, определяйте время удлинения в зависимости от размера вставленного фрагмента, если размер вставленного фрагмента составляет менее 1 кб, время удлинения может быть достаточно 30 - 45 секунд, а если фрагмент длиннее, время удлинения может быть увеличено в этом соотношении.

Шаги действия (в 25mlПримеры системы, клиенты также могут использовать 20mlСистемы):

1. Реакционный раствор 1 x Taq MasterMix, содержащий экстракт, должен быть снабжен следующей системой.

2.После нумерации колоний на планшетах, культивируемых в течение ночи, часть отдельных колоний выделяется стерилизованной головкой пистолета, чтобы добавить их в реакционную жидкость, которая хорошо перемешивается, чтобы колония полностью рассеялась в реактивную жидкость.

Для облегчения анализа результатов эксперимента можно установить еще одну трубку с отрицательным контрастом без колоний.

3.Поместите трубку PCR на тепловой циркулятор, чтобы начать реакцию при следующих условиях:

94℃ 10 мин

94℃ 30 сек

55℃ 30 сек 30-33 циклов

72 ℃ 0,5-1 мин

72 ℃ 5 мин

Примечание: Время расширения должно быть скорректировано в зависимости от размера вставленного фрагмента. Время преденатурации увеличивается до 10 минут, в основном для расщепления колоний и высвобождения шаблонов ДНК.

После окончания реакции взять 5 - 10mL Тестирование непосредственно на электрофорез.

Примечание: Если бактерии трудно расщепляются или примеси полиложноотрицательны, попробуйте следующий метод после расщепления высвобождения ДНК.

1. Добавить колонию 50mВода DD (или 10)ml dd в воде), вибрация.

2. 99 градусов, 10 минут ферментов в инактивированной бактериальной жидкости и высвобождение ДНК.

3. 12000 rpm центрифуга за 1 минуту для удаления фрагментов клеток.

4. Получить PCR, 25mСистема PCR 5.mВ начале 50ml dd вода), или 1mВ начале 10ml dd вода) сделать шаблон.

Универсальный Т - векторный колонизатор