Набор реагентов ZETA LIFE для обнаружения размножения клеток и токсичности

Набор реагентов ZETA LIFE для обнаружения размножения клеток и токсичности

Цены: ¦615 - 2800

Марка:Жизнь ЗЕТА.

Номер груза:K009

Происхождение:США

поставщикА.ШанхайАБиотехнологическая компания с ограниченной ответственностью

количество: 1000

Английское имя: cck8

срок годности:24 месяца

Условия сохранения: 4°C Защитное от света сохранение

спецификация:500T-3000T

Набор реагентов ZETA LIFE для обнаружения размножения клеток и токсичности

Набор CellCounting Kit, сокращенный как CCK, представляет собой набор быстродействующих высокочувствительных детекторов на основе WST (водорастворимая тетразольная соль, химическое название: 2 - (2 - метилоксид - 4 - нитрофенил) - 3 - (4 - нитрофенил) - 5 - (2,4 - дисульфонилбензол) - 2H тетразолмононатриевая соль), которая широко используется для клеточной пролиферации и клеточной токсичности.

CCK - это обновленная альтернатива МТТ, которая имеет очевидные преимущества по сравнению с МТТ или другими подобными МТТ продуктами, такими как XTT. MTS:

Формазан, который CCK восстанавливает дегидрогеназой в митохондриях, является растворимым в воде и не требует специального раствора для растворения, в то время как ни WST, ни XTT, ни MTS не являются растворимыми в воде, что позволяет избежать последующих этапов растворения.

CCK более стабилен, чем XTT и МТС, что делает результаты более стабильными.

CCK и MTT, XTT и другие имеют более широкий линейный диапазон и более высокую чувствительность.

Сравнение метода CCK с другими методами обнаружения:

Описание операции:

I. Изготовление стандартных кривых (при определении конкретного количества клеток)

Количество клеток в подготовленной клеточной суспензии исчисляется с помощью клеточной счетной пластины, а затем вводится клетка.

2, пропорционально (например: 1 / 2 пропорции) последовательно разбавляется в равных пропорциях питательной среды - градиент клеточной концентрации, обычно делается 3 - 5 градиентов клеточной концентрации, по 3 - 6 комплексных отверстий в группе.

После вакцинации культивируйте 2 - 4 часа, чтобы клетка прикреплялась к стенке, а затем добавьте культуру реагента CCK - определение значения OD после определения времени, чтобы сделать горизонтальную координату (ось X) с количеством клеток,

Значение OD является стандартной кривой продольных координат (ось Y). На основе этой стандартной кривой можно определить количество клеток в неизвестном образце (проба этой стандартной кривой зависит от условий эксперимента.

Это облегчает определение количества вакцинированных клеток и времени культивирования после добавления CCK).

II. Тестирование активности клеток

Прививка клеточной суспензии (100ul отверстия) в пластине 96 отверстий. Поместите питательную пластину в инкубатор для предварительной культивации (при 379C, 5% CO2).

Добавляйте в каждое отверстие раствор CCK 110ul (обратите внимание, что в отверстии не образуются пузырьки, которые влияют на показания OD).

В течение 14 часов инкубационная доска должна находиться в инкубаторе.

При помощи энзимометра измеряется абсорбция на 450 нм.

Если значение OD временно не измеряется, то для последующего измерения в каждое отверстие может быть добавлен раствор HCL 10ul 0.1m или 1% раствор WIV SDS, который прикрывает культуру.

Защитные панели сохраняются при комнатной температуре. В течение 24 часов светопоглощение не меняется.

III. Клеточная добавленная стоимость ~ Тест на токсичность

Настройка 100u клеточной суспензии в пластине 96 отверстий. Воспитательные пластины предварительно культивируются в инкубаторе в течение 24 часов (при 379C, 5% CO2).

2. Добавление в культурную плиту 10ul различных концентраций вещества, подлежащего измерению.

3) Разводить питательную пластину в инкубаторе в течение соответствующего периода времени (например, 6, 12, 24 или 48 часов).

Желательно добавлять в каждое отверстие раствор 10ul CCK (обратите внимание, что пузырьки не образуются в отверстиях, они влияют на показания OD).

5. инкубация питательной пластины в инкубаторе в течение 1 - 4 часов.

При помощи энзимометра измеряется абсорбция на 450 нм.

Если значение OD временно не измеряется, то для последующего измерения в каждое отверстие может быть добавлен раствор HCL 10ul 0.1m или 1% раствор WIV SDS, а экран для защиты от света хранится при комнатной температуре. В течение 24 часов светопоглощение не меняется.

Примечание: Если вещество, подлежащее измерению, обладает окислительной или восстановительной способностью, свежую питательную среду можно заменить перед добавлением CCK (удалить питательную среду и дважды промыть клетку питательной средой, а затем добавить новую питательную среду), устранив лекарственное воздействие. Конечно, в тех случаях, когда влияние препарата относительно невелико, можно не заменять питательную среду, непосредственно вычесть пустое поглощение после добавления препарата в питательную среду.

Готовы:

①Рекомендуется сначала сделать несколько отверстий, чтобы узнать количество вакцинированных клеток и время культивирования после добавления реагента CCK.

БПри определенных условиях рекомендуется использовать многоканальные детекторы, которые уменьшают разницу между уменьшением параллельных отверстий. Присоединение

При реагенте CCK рекомендуется наклонно прикреплять к стенке культивирования, не вставлять под страницу среды для добавления, легко создавать пузырьки, которые будут мешать показаниям OD.

ББелые кровяные клетки могут культивироваться дольше.

Iv)При использовании стандартной 96 - пористой пластины небольшое количество прививок для клеток, прикрепленных к стенке, составляет не менее 1 000 / порций L (питательная среда 100u). Чувствительность при обнаружении лейкоцитов относительно низка, поэтому

Рекомендуемая доза прививки не менее 2500 / F отверстий (питательная среда 100ul). Если вы хотите экспериментировать с 24 - или 6 - пористой пластиной, сначала рассчитайте соответствующее количество прививок на отверстие и добавьте раствор CCK в соответствии с 10% от общего объема питательной среды на отверстие.

АЕсли нет 450 - нм фильтра, можно использовать фильтр с поглощением от 430 до 490 нм, но 450 - нм фильтр имеет более высокую чувствительность к обнаружению.А.

ААбсорбция фенольного красного цвета в питательной среде может быть устранена путем вычитания поглощения фона в пустом отверстии при расчете и, следовательно, не влияет на обнаружение.

Мобильные вычисления:

Клеточная жизнеспособность * (%) = [А (дозировка) - А (пустота)] / [А (0 дозировка) - А (пустота)] x100

А (добавка): поглощение света отверстиями с клетками, раствором CCK и фармацевтическим раствором

A (пустота): поглощение отверстий без клеток с питательной средой и раствором CCK

А (0 добавок): светопоглощение отверстий с клетками, раствором CCK без фармацевтического раствора

* Клеточная жизнеспособность: клеточная или цитотоксическая жизнеспособность

Условия сохранения:

49C Светоизоляция, срок действия один год.

Теплозвуковой совет: не может быть использован для клинического лечения.