Амбициллин- Н-Деметилирование (И)Описание комплекта для определения активности

Микрометод 100 труба/ 48 образец

Обязательно перед официальным тестированием. 2 - 3 Прогнозы по выборке с большой разницей.Измерение значения:

ЦитохромP450 Ферменты - это группа ферментов, которые играют важную роль в метаболизме экзогенных веществ, особенно лекарств и ядов.И какP450Один из важных элементов ферментативной системы,CYP3A4 Подтип, тесно связанный с реакцией деметилирования препарата.

Принцип измерения:

И Каталитический аминобисилин высвобождает формальдегид через Нэш Для определения содержания формальдегида методом колориметрии можно вычислитьвыход И Активность.

Набор для определения активности аминобисилина - N - деметилазы P450

Состав:

Реактор один: порошок× 1 Бутылка,4℃Сохранить. Добавить перед использованием 100 мл Дистилляционная вода полностью растворяется.

Реактор 3: порошок× 1 Труба,4℃Светозащитное сохранение. Присоединяйтесь перед началом использования 1 мл Безводный этанол, полностью растворенный. Реактор 4: порошок× 1Труба,4℃Сохранить. Присоединяйтесь перед началом использования 0,5 млДистиллированная вода, полностью растворенная.

Реактор 5: порошок× 1 Бутылка, комнатная температура сохранена. Перед вводом в эксплуатацию дистиллированная вода 4 мл Полностью растворяется.

Стандартная жидкость: жидкость× 1 Бутылка,-20℃Сохранить. Перед вводом в эксплуатацию 1,5 мл EP Труба, присоединение 10 мкл Стандартная жидкость, плюс 990 мкл Дистиллированная вода, смешанная как0.05 ммол/л Стандартный раствор джиа - альдегида,4℃Сохранить.

Параметры конкретного продукта зависят от параметров полученного описания продукта

Собственные приборы и принадлежности:

Обычная центрифуга, гиперцентрифуга, водяная ванна, регулируемый дренажный пистолет, ультрафиолетовый спектрофотометр/Ферментометр, микрокварцевый колориметр/ 96 дыраПластина, дистиллированная вода, безводный этанол и лед.

экстракция сырого ферментаА.

1、Удаление больших молекулярных веществ, таких как ядро, митохондрии и т.п.:А 0.5g Организация, присоединение 1 мл Реактор один, полностью измельченный на льду,10 000g 4℃БСердце 30 минутВозьмите очищающую жидкость и перейдите в сверхскоростную центрифужную трубку.

2、Грубые микрочастицы:4℃А,100 000gЦентрифуга 60 минутБросьте очищающую жидкость.

3Удаление примесей, таких как гемоглобин: шаги в направлении 2 Добавить в осадок 1 мл Реактор один, полностью сотрясающий растворенный после плотной крышки,100 000g Центрифугирование 30 минутБВерхняя жидкость.

4、Конечные микрочастицы:Шаги 3 Испытание в осадке 2. 0.5 млПосле плотной крышки полное сотрясающее растворение, то есть сырой ферментативной жидкости, подлежащей измерению. Для измерения жидкости требуется

Использовать в этот день.

И Операции по измерению активности:

1. спектрофотометр/подогрев энзимометра 30 минРегулируйте длину волны до 412 нмДистиллированная вода настроена на ноль.

2. Реактор 2. 37℃подогрев в водяной бане 30 минутА.

3. Уход:取 1 ветвьEP Труба, присоединение 10 мкл Сырая энзимная жидкость,170 мкл Реактор 2,10 мкл Реактор 3,10 мкл Дистиллированная вода, смешанная и помещенная 37℃

Водная ванна 30 минут; Присоединяйтесь немедленно 35 мкл Реактор 5, перемешаем и помещаем в ледяную ванну. 5 минут；取выходПосле присоединения 35 мкл Реактор 6, комнатная температура после смешиванияСтатус 5 минут• Комнатная температура 8000об/мин Центрифугирование 5 минут& Выбрать новыйEP Труба, присоединение 100 мкл Жидкость для очищения,100 мкл Реактор 7, после смешивания. 60℃Водная баня 10 минутИ затем взятьвыходОхлаждение холодной водой. 5 минутВ 412 нмИзмеряет поглощение света, записывает какAУход за детьми.

4. Измерительная трубка:取 1 ветвьEP Труба, присоединение 10 мкл Сырая энзимная жидкость,170 мкл Реактор 2,10 мкл Реактор 3,10 мкл Реактор 4, смешивается и помещается 37℃

Водная ванна 30 минут; Присоединяйтесь немедленно 35 мкл Реактор 5, перемешаем и помещаем в ледяную ванну. 5 минут；取выходПосле присоединения 35 мкл Реактор 6, комнатная температура после смешиванияСтатус 5 минут• Комнатная температура 8000об/мин Центрифугирование 5 минут；取 1 НовыйEP Труба, присоединение 100 мкл Жидкость для очищения,100 мкл Реактор 7, после смешивания. 60℃водаванна 10 минутИ затем взятьвыходОхлаждение холодной водой. 5 минутВ 412 нмИзмеряет поглощение света, записывает какAИзмерительная трубка.

5. Стандартная трубка:取 1 ветвьEP Труба, присоединение 100 мкл Стандартная продукция,100 мкл Реактор 7, после смешивания. 60℃Водная баня 10 минутИ затем взятьвыходС холодомВодяное охлаждение5 минутВ412 нм Измеряет поглощение света, записывает какA Стандартная трубка.

Примечание: Каждый образец требует правильного ухода.

И Расчет активности:

а.Используя микрокварцевую колориметрию, формула вычисления выглядит следующим образом:

（1）По концентрации белка.

Определение активной единицы:37℃Каталитическая выработка белка на миллиграмм в минуту 1нмоль Формальдегид для 1 Активная единица фермента.

И Активность(нмоль/мин/мг) Прот) =C Стандартная продукцияХV Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)ЧжиA Стандартная трубкаХкратное разбавленияЧжи(Cpr× ВТип)÷Т

*45×(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубка÷CprА.

（2）По качеству выборки

Определение активной единицы:37℃Каталитическая генерация на грамм ткани в минуту 1нмоль Формальдегид для 1 Активная единица фермента.

И Активность(нмоль/мин/г) Свежий вес ) =C Стандартная продукция× В Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубкаХкратное разбавления÷(В) образец

В Тип в целом×W)÷T

*45×(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубка÷WА.

C Стандартная продукция:0.05 ммол/л = 50 мкмоль/л*V Стандартная продукция:500 мкл = 0,0005 L& Разбавленное кратное:V Контр - генеральныйВ Верхняя очищающая жидкость*（50 + 850

+ 50 + 50 + 175 + 175)A500 = 2.7*КПР:: Концентрация белка в сырой ферментной жидкости (мг/мл)Требуется дополнительное измерение, рекомендуется использовать данную компанию BCAНабор для определения содержания белка;VТип: Добавьте объем сырой ферментативной жидкости,50 мкл = 0,05 мл*VОбщая выборка: объем экстракта,0,5 мл*TВремя реакции (мин),30 минутА.

b.использовать 96 Расчетная формула, измеренная диафрагмой, выглядит следующим образом.

（1）По концентрации белка.

Определение активной единицы:37℃Каталитическая выработка белка на миллиграмм в минуту 1нмоль Формальдегид для 1 Активная единица фермента.

И Активность(нмоль/мин/мг) Прот) =C Стандартная продукция× В Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)ЧжиA Стандартная трубкаХкратное разбавленияЧжи(Cpr× ВТип)÷Т

*45×(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)ЧжиA Стандартная трубкаЧжиКПРА.

（2）По качеству выборки

Определение активной единицы:37℃Каталитическая генерация на грамм ткани в минуту 1нмоль Формальдегид для 1 Активная единица фермента.

И Активность(нмоль/мин/г) Свежий вес) =C Стандартная продукция× В Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубкаХкратное разбавления÷(В) образецВТип в целом×W)÷T

*45×(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)ЧжиA Стандартная трубка÷WА.

C Стандартная продукция:0.05 ммол/л = 50 мкмоль/л*V Стандартная продукция:500 мкл = 0,0005 L& Разбавленное кратное:V Контр - генеральныйВ Верхняя очищающая жидкость*（50 + 850

+ 50 + 50 + 175 + 175)A500 = 2.7*КПР:: Концентрация белка в сырой ферментной жидкости (мг/мл)Требуется дополнительное измерение, рекомендуется использовать данную компанию BCAНабор для определения содержания белка;V Тип: Добавьте объем сырой ферментативной жидкости,50 мкл = 0,05 мл*V Общая выборка: объем экстракта,0.5 мл*TВремя реакции (мин),30 минутА.

Внимание:

1Сырая ферментная жидкость должна быть измерена в тот же день, если ее нужно сохранить, то стадия извлечения сырой ферментной жидкости 3 Добавить в осадок 0,5 мл 20%Глицерин, после разделки,

-80℃Сохранить;

2Реакторы III и IV должны быть приготовлены перед использованием, если они не закончились в тот же день,4℃Светопоглощающее сохранение, доступно 1 Неделя;

3Сырая энзимная жидкость может быть использована непосредственно для определения концентрации белка, рекомендуется BCA Метод определения содержания белка.

Набор для определения активности аминобисилина - N - деметилазы P450