Красный плесень - N - деметилаза (ERND)Описание комплекта для определения активности

Микрометод 100T/48S

Обязательно перед официальным тестированием. 2 - 3 Прогнозы по выборке с большой разницей.Измерение значения:

Цитохром P450 Ферменты - это группа ферментов, которые в основном присутствуют в печени, в метаболизме экзогенных веществ, особенно наркотиков и токсинов.Важная роль. ERND вP450 В ферментативном эквивалентеCYP2B Подтип, тесно связанный с деметилированием метаболизма наркотиков. CYP2B ИметьКаталитические субстраты образуют неактивные и легко выводимые метаболиты, которые обладают детоксикационным эффектом, а также могут вызывать некоторые лекарстваМетаболическая активация CYP2B.

Принцип измерения:

ЭРНДКаталитическая красная плесень высвобождает формальдегид, проходитНэш измеряет содержание формальдегида по цвету. ЭРНД 活性。

Набор реактивов для определения активности эритроциу - N - деметилазы серии P450

Состав:

Реактор 1: порошок × 1 Бутылка, 4С Сохранение. Добавить перед использованием100 мл Дистиллированная вода растворяется.

Реактор III: порошок × 1 трубка, 4С Сохранение. Добавить перед использованием1 мл дистиллированной воды, полностью растворенной.Реактор 4: порошок × 1 Бутылка, 4С Сохранение. Добавить перед использованием0,5 мл Дистиллированная вода, полностью растворенная.Реактор 5: порошок × 1 Бутылка, 4С Сохранение. Перед использованием добавьте дистиллированную воду.4.5 мл полностью растворяется.

Стандартная жидкость: жидкость × 1 Бутылка, - 20С Сохранение. Перед вводом в эксплуатацию1,5 мл ЭП Труба, присоединение 10 мклСтандартная жидкость, плюс 990 мкл дистиллированной воды, то есть 0,05 ммоль / лСтандартный раствор Jia, 4℃保存。

Параметры конкретного продукта зависят от параметров полученного описания продукта

Собственные приборы и принадлежности:

Обычные центрифуги, сверхскоростные центрифуги, регулируемые детекторы, видимые спектрофотометры / энзимометры, микрокварцевый колориметр / 96 Дистилляция, диафрагмаВода и лед.

Экстракция сырой ферментативной жидкости:

1.Удаление больших молекулярных веществ, таких как ядро, митохондрии и т.п.:А 0.5g Организация, присоединение 1 мл Реактор один, полностью измельченный на льду, 10 000g Расстояние 4°CСердце 30min， Возьмите очищающую жидкость и перейдите в сверхскоростную центрифужную трубку.

2.Грубые микрочастицы:100 000g，4°C, центрифуга60min， Выбросить очищающую жидкость.

3.Для удаления примесей, таких как гемоглобин:Шаги 2 Добавить в осадок 1 млРеактор 1, полное сотрясающее растворение после плотной крышки, 100000gЦентрифугирование 30min， Б

Верхняя жидкость.

4.Конечные микрочастицы:Шаги 3 Испытание в осадке 2. 0.5ml， Полное сотрясающее растворение, то есть сырой ферментный раствор, подлежит измерению. Этот раствор необходимо использовать в тот же день.

Операции измерения:

1. спектрофотометр /подогрев энзимометра 30 минутРегулируйте длину волны до 412 nm， Дистиллированная вода на ноль.

2. Реактор 2. 37подогрев в водяной бане30 минутА.

3. Уход:取 0,5 мл EP Труба, присоединение10 мкл Сырая энзимная жидкость, 170 мкл Реактор 2, 10 мкл Реактор 3, 10 мкл Дистиллированная вода, смешанная и помещенная37℃Водная ванна 30 минут; Присоединяйтесь немедленно 35 мклРеактор 5, перемешаем и помещаем в ледяную ванну. 5 минут; 取出После присоединения 35 мкл реагент 6, комнатная температура после смешивания

Статус 5 минут• Комнатная температура 8000об/минЦентрифугирование 5min； Выберите новый EPТруба, присоединение 100 мкл Растворительная жидкость, 100 мкл Реактор 7, после смешивания. Ванна с водой 60°C10min， И вынуть.Охлаждение холодной водой. 5 минутВ 412 нмИзмеряет поглощение света, записывает какА. Уход за детьми.

4. Измерительная трубка:取 0,5 мл EP Труба, присоединение10 мкл Сырая энзимная жидкость, 170 мкл Реактор 2, 10 мкл Реактор 3, 10 мкл Реактор 4, смешивается и помещается37℃

Водная ванна 30 минут; Присоединяйтесь немедленно 35 мклРеактор 5, перемешаем и помещаем в ледяную ванну.5 минут; 取出После присоединения 35 мкл реагент 6, комнатная температура после смешиванияСтатус 5 мin• Комнатная температура 8000об/минЦентрифугирование 5 мв; Взять новый EPТруба, присоединение 100 мкл очищающей жидкости.А,100 мкл Реактор 7, после смешивания. 60водяная баня10min， И вынуть.Охлаждение холодной водой. 5 минутВ 412 нмИзмеряет поглощение света, записывает какА - измерительная трубка.

5. Стандартная трубка:取 0,5 мл ЭПТруба, присоединение 100 мклСтандартная продукция, 100 мкл Реактор 7, после смешивания. 60водяная баня10min， Затем вынуть,Холодно.

Водяное охлаждение 5 минутВ 412 нм Измеряет поглощение света, записывает какA Стандартная трубка.

Примечание: Каждый образец требует правильного ухода.

ЭРНД Формула расчета активности:

а.Используя микрокварцевую колориметрию, формула вычисления выглядит следующим образом:

(1).По концентрации белка.А.

Определение активной единицы: 37При температуре Цельсия каталитическая выработка 1 нмоль на миллиграмм белка в минутуФормальдегид для Одна энзимная живая единица.

ЭРНД Активность (nmol / min / mg)prot) = С Стандартная модель x V Стандартная продукцияХ(А) Измерительная трубка - А Уход за детьми)÷А кратное разжижения стандартной трубки xЧжи(Cpr × V)

образец÷Т

*45× (А) Измерительная трубка - А Уход за ребенком) Zu A Стандарт CPRА.

(2).По качеству выборкиА.

Определение активной единицы: 37При температуре Цельсия каталитическое образование 1 нмоль на грамм образца в минутуФормальдегид для Одна энзимная живая единица.

ЭРНД Активность (nmol / min / g) Свежий вес) = C Стандартная модель x V Стандартная модель x (A) Измерительная трубка - А Уход за ребенком) Zu A Стандартная трубка × разбавленное кратное ��������

*45× (А) Измерительная трубка - А Уход за ребенком) Zu A Стандартная трубка÷W

ССтандартная продукция: 0.05ммол/л = 50 мкмоль/л; ВСтандартная продукция: 100 мкл = 1 × 10^-4 l; кратное разбавления: VАнти - генеральный � V Верхняя жидкость = (50 + 850)

+ 50 + 50 + 175 + 175) 500 = 2,7; Cpr: Концентрация белка в сырой ферментной жидкости (мг / мл)Требуется дополнительное измерение, рекомендуется использовать данную компаниюBCA

Набор для определения содержания белка; W: Качество образца, g；V Пример: Добавьте объем сырой ферментативной жидкости, 10 мкл = 0,01 мл; Т: Время каталитической реакции(м)в)А,

30 минутА.

b.использовать Формула 96 - го калибра выглядит следующим образом.

(1).По концентрации белка.А.

Определение активной единицы: 37При температуре Цельсия каталитическая выработка 1 нмоль на миллиграмм белка в минутуФормальдегид для Одна энзимная живая единица.

ЭРНД Активность (nmol / min / mg)prot) = С Стандартная модель x VСтандартная продукцияХ(А) Измерительная трубка - А Уход за детьми)÷А кратное разжижения стандартной трубки xЧжи(Cpr × V)

образец÷Т

*45× (А) Измерительная трубка - А Уход за ребенком) Zu A Стандарт CPRА.

(2).По качеству выборкиА.

Определение активной единицы: 37При температуре Цельсия каталитическое образование 1 нмоль на грамм образца в минутуФормальдегид для Одна энзимная живая единица.

ЭРНД Активность (nmol / min / g) Свежий вес) = C Стандартная модель x V Стандартная модель x (A) Измерительная трубка - А Уход за ребенком) Zu A Стандартная трубка × разбавленное кратное ��������

*45× (А) Измерительная трубка - А Уход за ребенком) Zu A Стандартная трубка÷W

ССтандартная продукция: 0.05ммол/л = 50 мкмоль/л; ВСтандартная продукция: 100 мкл = 1 × 10^-4 l; кратное разбавления: VАнти - генеральный � V Верхняя жидкость = (50 + 850)

+ 50 + 50 + 175 + 175) 500 = 2,7; Cpr: Концентрация белка в сырой ферментной жидкости (мг / мл)Требуется дополнительное измерение, рекомендуется использовать данную компанию BCAНабор для определения содержания белка; W: Качество образца, g；V Пример: Добавьте объем сырой ферментативной жидкости, 10 мкл = 0,01 мл*Т: Время каталитической реакции(м)in)А, 30 минут.

Набор реактивов для определения активности эритроциу - N - деметилазы серии P450