Анилин - 4 - гидроксилаза (AH)Описание комплекта для определения активности

Микрометод 100 труба/ 48 образец

Обязательно перед официальным тестированием. 2 - 3 Прогнозы по выборке с большой разницей.Измерение значения:

ЦитохромP450 Ферменты - это группа изоферментов, которые в основном присутствуют в печени и играют важную роль в метаболизме экзогенных веществ, особенно лекарств иМетаболизм яда.АХ вP450 В ферментативном эквивалентеСИП2Э1 Подтип,СИП2Э1 Он не только участвует в метаболизме лекарств, но и катализирует их.Процесс активации прекурсоров канцерогенов и прекурсоров.

Принцип измерения:

АХ каталитический анилин 4 -Аминофенолы, далее преобразованные в фенолы-Индольный комплекс, в 630 нм Есть характерные пики поглощения; проходитьПереизмерение 630 нмРастущая скорость поглощения, чтобы вычислитьАХАктивность.

Набор для определения активности анилина - 4 - гидроксилазы (AH)

Состав:

Реактор один: порошок× 1 Бутылка,4℃Сохранить. Присоединяйтесь перед началом использования 100 мл Дистиллированная вода, полностью растворенная. Реактор 3: порошок× 1Бутылка,4℃Сохранить. Присоединяйтесь перед началом использования 10 млДистиллированная вода, полностью растворенная. Реактор 4: порошок× 1Бутылка,4℃Сохранить. Присоединяйтесь перед началом использования 5 млДистиллированная вода, полностью растворенная.

Реактор 6: порошок× 1 Бутылки (коррозионные реагенты),4℃Светозащитное сохранение. Присоединяйтесь перед началом использования 10 мл Дистиллированная вода, полностью растворенная. Реактор 7: порошок× 1Бутылка,4℃Сохранить. Присоединяйтесь перед началом использования 10 млДистилляционная вода полностью растворяется.

Стандартная жидкость: жидкость× 1 Бутылка,10 мкмоль/лА,4℃Светозащитное сохранение.

Параметры конкретного продукта зависят от параметров полученного описания продукта

Собственные приборы и принадлежности:

Обычная центрифуга, гиперцентрифуга, спектрофотометр видимого спектра/Ферментометр, микростекло и чашка Петри/ 96 Перфорация, двойной пар и лед.

Экстракция сырой ферментативной жидкости:

1、Удаление больших молекулярных веществ, таких как ядро, митохондрии и т.п.:А 0.5g Организация, присоединение 1 мл Реактор один, полностью измельченный на льду,10 000g 4℃，Центрифугирование 30 минутВозьмите очищающую жидкость и переведите ее в сверхскоростную центрифужную трубку.

2、Грубые микрочастицы: 100 000g 4℃Центрифуга 60 минутБросьте очищающую жидкость.

3、Для удаления примесей, таких как гемоглобин:Шаги 2 Добавить в осадок 1 мл Реактор один, полностью сотрясающий растворенный после плотной крышки,100 000g Центрифугирование 30 минутБ

Верхняя жидкость.

4、Конечные микрочастицы:Шаги 3 Испытание в осадке 2. 0,5 млПосле плотной крышки полное сотрясающее растворение, то есть сырой ферментативной жидкости, подлежащей измерению.

Измерительная операцияА.

1. спектрофотометр/подогрев энзимометра 30 минРегулируйте длину волны до 630 нмДистиллированная вода настроена на ноль.

2. Реактор 3. 37℃подогрев в водяной бане 30 минутА.

3. Реактор 5 - в ледяной ванне. 30 минутА.

4. Стандартная трубка:取 0.5 мл EP Труба, присоединение 100 мкл Стандартная жидкость,100 мкл Реактор 6,100 мкл Реактор VII, после усвоения комнатной температуры 30 минут，Высасывать 200 мклВ микростеклянной чашке/ 96Дисковые пластины,630 нмИзмеряет поглощение света, записывает какAСтандартная трубка.

5. Уход:取 0.5 мл EP Труба, присоединение 50 мкл Сырая энзимная жидкость,100 мкл Реактор 3,50 мкл Дистиллированная вода, после смешивания 37℃Термоизоляция в водяной бане 30 минут*

Повторное присоединение 100 мкл Реактор 5, после смешивания ванна со льдом. 5 минутА,11000 об/минА,4℃Центрифуга 10 минут；取 100 мкл Улучшить жидкость, добавить новый 0.5 млEP Трубы; Повторное присоединение 100 мкл Реактор 6,100 мкл Реактор VII, после усвоения комнатной температуры 30 минутИ впитывать 200 мкл В микростеклянной чашке/ 96 дыраПластина,630 нмИзмеряет поглощение света, записывает как AУход за детьми.

6. Измерительная трубка:取 0.5 мл EP Труба, присоединение 50 мкл Сырая энзимная жидкость,100 мкл Реактор 3,50 мкл Реактор 4, после смешивания. 37℃Термоизоляция в водяной бане 30 минут*

Повторное присоединение 100 мкл Реактор 5, после смешивания ванна со льдом. 5 минутА,11000 об/минА,4℃Центрифуга 10 минут；取 100 мкл Улучшить жидкость, добавить новый 0.5 млEP Трубы; Повторное присоединение 100 мкл Реактор 6,100 мкл Реактор VII, после усвоения комнатной температуры 30 минутИ впитывать 200 мкл В микростеклянной чашке/ 96 дыраПластина,630 нмИзмеряет поглощение света, записывает как AИзмерительная трубка.

АХ формула расчета активностиА.

а.Используя микрокварцевую колориметрию, формула вычисления выглядит следующим образом:

（1）По концентрации белка.

Определение активной единицы:37℃Каждый миллиграмм белка катализируется каждую минуту. 1нмоль 4 -Аминофенолы являются 1 Активная единица фермента.

АХ Активность(нмоль/мин/мг) Прот) =C Стандартная продукция× В Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубкаХкратное разбавленияЧжи(Cpr × VТип)÷Т

*2 х(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубка÷CprА.

（2）По качеству выборки

Определение активной единицы:37℃Каждый грамм образцов катализируется каждую минуту. 1нмоль 4 -Аминофенолы являются 1 Активная единица фермента.

АХАктивность(нмоль/мин/г) Свежий вес) =C Стандартная продукция× В Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)ЧжиA Стандартная трубкаХкратное разбавления÷(Ш×В) образец÷T

*2 х(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубка÷W

CСтандартная продукция:10 мкмоль/л*VСтандартная продукция:100 мкл = 1 × 10^-4L& Разбавленное кратное: VКонтр - генеральныйВВерхняя очищающая жидкость= 300 мкл ÷ 100 мкл = 3*КПР: ГрубыйКонцентрация белка (мг/мл)Требуется дополнительное измерение, рекомендуется использовать данную компанию BCA Набор для определения содержания белка;W : Качество образцов;VТип: Добавьте объем сырой ферментативной жидкости в реакционную систему, 50 мкл = 0,05 мл* TВремя реакции (мин),30 минутА.

b.использовать 96 Расчетная формула, измеренная диафрагмой, выглядит следующим образом.

（1）По концентрации белка.

Определение активной единицы:37℃Каждый миллиграмм белка катализируется каждую минуту. 1нмоль 4 -Аминофенолы являются 1 Активная единица фермента.

АХ Активность(нмоль/мин/мг) Прот) =C Стандартная продукция× В Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубкаХкратное разбавленияЧжи(Cpr × VТип)÷Т

*2 х(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубка÷Cpr

（2）По качеству выборки

Определение активной единицы:37℃Каждый грамм образцов катализируется каждую минуту. 1нмоль 4 -Аминофенолы являются 1 Активная единица фермента.

АХ Активность(нмоль/мин/г) Свежий вес) =C Стандартная продукция× В Стандартная продукцияХ(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)ЧжиA Стандартная трубкаХкратное разбавления÷(Ш×В) образец÷T

*2 х(A Измерительная трубка -A Уход за детьми)÷А Стандартная трубка÷W

C Стандартная продукция:10 мкмоль/л*V Стандартная продукция:100 мкл = 1 × 10^-4L& Разбавленное кратное:V Контр - генеральныйВВерхняя очищающая жидкость= 300 мкл ÷ 100 мкл = 3*КПР:: Концентрация белка в сырой ферментной жидкости (мг/мл),Требуется дополнительное измерение, рекомендуется использовать компанию BCA Набор для определения содержания белка; W : Качество образцов; VТип: Добавьте объем сырой ферментативной жидкости в реакционную систему, 50 мкл = 0,05 мл* TВремя реакции (мин),30 минутА.

Набор для определения активности анилина - 4 - гидроксилазы (AH)