Белая мезонина - 5 ELISA KIT, с использованием технологии двойного анти - макаронного ELISA, точной количественной сыворотки и других образцов белого мезонина - 5, удобной в эксплуатации, помогающей иммунной системе, воспалению и другим научным исследованиям.
Белый мезон - 5 Elisa Kit
Белый мезон - 5 Elisa KitЯвляется ключевым инструментом в научных исследованиях для количественного определения содержания белого мезонина - 5 в биологических образцах и обеспечивает мощную поддержку для углубленного изучения иммунных реакций и воспалительных механизмов.
Принцип обнаружения:: Иммунодесорбция с использованием фермента с двойным антитело - заполнителем. Ферментная связка комплекта была предварительно завернута специфическими антителами против IL - 5. При добавлении образца IL - 5 в образце связывался с специфичностью твердофазных антител. Затем добавьте антитела против IL - 5, маркированные ферментами, и сформируйте комплекс « твердофазных антител - IL - 5 - ферментных маркеров». После промывки удаляется несвязанное вещество, добавляется раствор субстрата (например, TMB), и под катализатором фермента происходит выраженная цветовая реакция субстрата, а глубина цвета пропорциональна содержанию IL - 5 в образце. Концентрация IL - 5 в образце была рассчитана путем измерения поглощения на длине волны 450 нм с помощью ферментометра по сравнению со стандартной кривой.
Состав комплекта
Ассоциированные энзимы:: Есть 96 или 48 отверстий, предварительно завернутых антителами против ИЛ - 5, которые являются носителями реакции.
Стандартная продукция: Как правило, замороженные сухие продукты, обычно есть 2 бутылки. Перед вводом в эксплуатацию необходимо растворить раствор в разбавленном растворе стандартного продукта и разбавить его до различных градиентов концентрации, таких как 0, 7.8, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500 пг / мл, для построения стандартной кривой.
Образец xi:: Поддающиеся измерению образцы, используемые для разбавления с чрезмерной концентрацией, чтобы убедиться, что концентрация образца находится в пределах диапазона обнаружения реактивного комплекта.
Антитела ферментативного маркера:: Антиантитела IL - 5, маркированные HRP, представляют собой концентрат, который при использовании должен быть разбавлен разбавленным раствором с антителами ферментативного маркера по требованию.
разбавление ферментативных антител:: Специально используется для разбавления ферментных антител.
Подводный раствор:: Например, TMB - субстрат, реакция HRP с ферментным маркером антитела вызывает изменение цвета.
Стиральная жидкость:: В основном концентрат, при использовании должен быть разбавлен дистиллированной водой или деионизированной водой пропорционально, используется для промывки ферментативных соединительных пластин, удаления несвязанных веществ, снижения фоновых помех.
Конец жидкости:: Как правило, растворы сильной кислоты (например, серная кислота), используемые для прекращения выраженной цветовой реакции субстрата, чтобы сделать цвет реактивной жидкости стабильным и удобным для чтения.
мембрана уплотнителя:: Покрытие ферментативной соединительной пластины при температурном размножении для предотвращения испарения жидкости и внешнего загрязнения.
инструкция по эксплуатации:: Подробное описание методов использования комплекта реагентов, мер предосторожности, показателей производительности и т.д.
Требования к образцу
Сыворотка:: После сбора крови комнатная температура помещается на 2 часа или 4 ° C на ночь, 1000 × g центрифуг 20 минут, чтобы взять чистую и запасную. Для сбора крови следует использовать одноразовые средства без термогенов и эндотоксинов.
Плазма крови:: Применяются антикоагулянты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) и гепарин. В течение 30 минут после сбора образца, 1000 × g центрифуг при 2 - 8 °C в течение 15 минут, чтобы очистить его.
Клеточная культура очищается:: Клеточная культура очищается от 1000 × g центрифуги в течение 20 минут, после удаления фрагментов и примесей клетки, снимаются и очищаются для обнаружения.
Структурная симметрия:: Промыть ткань предварительно охлажденным фосфатным буфером (PBS, 0.01M, pH = 7.4) и удалить остатки крови. После измельчения ткани, нажмите 1: 9 (w / v), чтобы добавить PBS, полностью измельчить на льду. После 5000 × g центрифуг 5 - 10 минут, снимите очистку для обнаружения.
Если образец был обнаружен в течение короткого периода времени после сбора, он может быть сохранен при температуре 4°C; Если требуется длительное хранение, его необходимо поместить в - 20°C или - 80°C для замораживания, и чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания, образцы крови, как правило, не подходят для обнаружения.
Операционный процесс
Подготовка:: Удалите набор из холодильника и сбалансируйте его до комнатной температуры на 30 минут раньше. В то же время концентрированный промывочный раствор разбавляется в требуемых пропорциях дистиллированной или деионизированной водой.
Добавить образец:: Установите пустые отверстия, стандартные отверстия для продуктов и отверстия для образцов. Пустое отверстие добавляется к образцу xi для высвобождения жидкости, стандартное отверстие для продукта добавляется к различным концентрациям стандартного продукта, отверстие для образца добавляется к обработанному образцу, количество добавок на отверстие обычно составляет 100 мкл, мягкое смешивание, температура 37 ° C 90 минут.
Мойка:: После окончания термотроду жидкость в отверстии сбрасывается, отверстия заполняются моющим раствором, высыхают через 1 - 2 минуты после погружения, повторно промывают 5 раз, чтобы убедиться, что дно che смывает несвязанное вещество.
Антитела с ферментативными маркерами:: На отверстие добавляется 100 мкл разбавленного рабочего раствора ферментативного маркера антитела, температура 37 °C 60 минут.
Снова промыть:: Повторить вышеуказанные этапы стирки.
Цвет:: В каждое отверстие добавляется 90 мкл раствора субстрата, который слегка смешивается, а светонепроницаемый цвет при температуре 37 ° C составляет 15 - 30 минут (следует судить по фактическому цвету).
Конец реакции:: В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, при этом цвет раствора меняется с синего на желтый.
Показания:: В течение 15 минут после добавления концентрирующей жидкости с помощью энзимометра измеряется поглощение (OD) отверстий на длине волны 450 нм.
Результаты расчетов:: Используйте стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, рисуйте стандартную кривую. Соответствующая концентрация была обнаружена из стандартной кривой на основе значения OD образца, и если образец был разбавлен, то фактические концентрации должны были быть получены путем умножения соответствующего кратного разбавления.
