Рецептор белого мезонина 7 (растворимый) ELISA KIT - это инструмент для количественного определения содержания растворимого рецептора белого мезонина 7 в биологических образцах, который широко используется в иммунологических исследованиях и других областях.
Рецептор белого мезонина 7 (растворимый) ELISA KIT
Рецептор белого мезонина 7 (растворимый) ELISA KITЭто инструмент для количественного определения содержания растворимого белого мезонина 7 в биологических образцах, который широко используется в иммунологических исследованиях и других областях.
Принцип обнаружения:: Применение метода ELISA с двойным антитело. Микроводырочные пластины в наборе были предварительно завернуты в специфические антитела к растворимым рецепторам белого мезонина 7. После добавления в образец растворимый рецептор белого мезонина 7 в образце связывался с твердофазными антителами. Затем добавьте антитела к антирастворимому белому мезонину 7 - рецептору, маркированному ферментом, который образует комплекс « твердофазное антитело - растворимый белок 7 - рецептор ферментативного эталона» с рецептором, который уже связывается с твердой фазой. После этапа промывки, чтобы удалить несвязанное вещество, добавьте раствор субстрата (например, TMB), и под каталитическим действием фермента субстрат реагирует ярко, а глубина цвета пропорциональна содержанию растворимого рецептора белого мезонина 7 в образце. Концентрация этого рецептора в образце может быть рассчитана путем измерения поглощения на определенной длине волны (обычно 450 нм) с помощью энзимометра по сравнению со стандартной кривой.
Состав комплекта
Ассоциированные энзимы:: 96 или 48 отверстий, предварительно завернутых антителами к растворимому белому мециллину 7 - рецептору, который является носителем реакции.
стандартный образец: Обычно это замороженные сухие продукты, есть 2 бутылки. Перед вводом в эксплуатацию необходимо повторно растворить и разбавить в различные градиенты концентрации раствор стандартного разбавленного продукта, например 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 пг / мл, для построения стандартной кривой.
Образец xi:: Поддающиеся измерению образцы, используемые для разбавления с чрезмерной концентрацией, гарантируют, что их концентрация находится в пределах диапазона обнаружения реактивного комплекта.
Антитела ферментативного маркера:: Антирастворимые антитела рецептора белого мезоида 7, маркированные HRP, представляют собой концентрат, который при использовании должен быть разбавлен разбавленным раствором ферментативного антитела по требованию.
разбавление ферментативных антител:: Специально используется для разбавления ферментных антител.
Подводный раствор:: Например, TMB - субстраты могут вступать в реакцию с HRP в ферментных маркерных антителах, вызывая изменения цвета.
Стиральная жидкость:: Как правило, концентрат, при использовании должен быть разбавлен дистиллированной или деионизированной водой пропорционально, используется для промывки ферментативных сцепок, удаления несвязанных веществ, снижения фоновых помех.
Конец жидкости:: В основном сильнокислые растворы (например, серная кислота), используемые для прекращения выраженной цветовой реакции субстрата, чтобы сделать цвет реактивной жидкости стабильным и удобным для чтения.
мембрана уплотнителя:: Используется для покрытия ферментных антенн во время термотроду для предотвращения испарения жидкости и внешнего загрязнения.
инструкция по эксплуатации:: Подробное описание методов использования комплекта реагентов, мер предосторожности, показателей производительности и т.д.
Требования к выборке
Сыворотка:: После сбора крови комнатная температура помещается на 2 часа или 4 ° C на ночь, 1000 × g центрифуг 20 минут, чтобы взять чистую и запасную. Для сбора крови следует использовать одноразовые средства без термогенов и эндотоксинов.
Плазма крови:: Доступны антикоагулянты, такие как EDTA и гепарин. В течение 30 минут после взятия образца 1000 × g центрифуг при 2 - 8°C в течение 15 минут после взятия образца был очищен.
Клеточная культура очищается:: Клеточная культура очищается от 1000 × g центрифуг в течение 20 минут, после удаления фрагментов и примесей клетки очищается.
Структурная симметрия:: Промыть ткань предварительно охлажденной PBS, удалить остаточную кровь, после измельчения ткани нажмите 1: 9 (w / v), чтобы добавить PBS, лед полностью измельчен. После 5000 × g центрифуг 5 - 10 минут, снимите очистку для обнаружения.
Если образец был обнаружен в течение короткого периода времени после сбора, он может быть сохранен при температуре 4°C; При длительном хранении необходимо - 20°C или - 80°C заморозить и избежать повторного замораживания и оттаивания, образцы крови, как правило, не подходят для обнаружения.
Операционный процесс
Подготовка:: Удалите набор реагентов из холодильника и сбалансируйте его до комнатной температуры (около 30 минут). Разбавленный концентрат.
Добавить образец:: Установите пустые отверстия, стандартные отверстия для продуктов и отверстия для образцов. Пустое отверстие плюс образец xi для высвобождения жидкости, стандартное отверстие для продукта, чтобы добавить различные концентрации стандартного продукта, отверстие для выборки, чтобы добавить обработанный образец, количество проб на отверстие обычно составляет 100 мкл, мягкое смешивание, 37 ° C температура размножения 90 минут.
стирка:: Выбросить жидкость из отверстия, заполнить отверстия моющим раствором, через 1 - 2 минуты после погружения сбрасывать, повторно промыть 5 раз, чтобы убедиться, что смыть несвязанное вещество.
Антитела с ферментативными маркерами:: На отверстие добавляется 100 мкл разбавленного рабочего раствора ферментативного маркера антитела, температура 37 °C 60 минут.
Снова промыть:: С указанными выше этапами стирки.
Цвет:: В каждое отверстие добавляется 90 мкл донного раствора, мягко смешивается, 37 ° C избегает световой окраски в течение 15 - 30 минут (в зависимости от фактической окраски).
Конец реакции:: В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, при этом цвет раствора меняется с синего на желтый.
Показания:: В течение 15 минут после добавления концентрирующей жидкости с помощью энзимометра измеряется поглощение (OD) отверстий на длине волны 450 нм.
результаты вычислений:: Используйте стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, рисуйте стандартную кривую. Соответствующая концентрация была получена из стандартной кривой на основе значения OD образца, и если образец был разбавлен, фактическая концентрация должна быть получена путем умножения соответствующего кратного разбавления.
показатель производительности
Диапазон обнаружения:: Обычно в разных интервалах, таких как 31,2 - 2000 пг / мл, для удовлетворения потребностей в обнаружении содержания растворимого белого мезонина 7 в различных образцах.
чувствительность:: Может быть ниже 15,6 пг / мл или даже ниже и может обнаруживать небольшое количество этого рецептора в образце.
Специфичность:: Высокая специфичность к растворимым рецепторам белого мезонина 7 и отсутствие явных перекрестных реакций с другими веществами, такими как рецепторы цитокинов.
Повторяемость:: Коэффициент вариации внутри пластины обычно составляет менее 10%, а коэффициент вариации между пластинами - менее 15%, что обеспечивает стабильность и надежность результатов испытаний.
Меры предосторожности
Строго следуя инструкциям, различные партии реагентов не могут быть смешаны.
Использование одноразовых всасывающих головок во время операции, чтобы избежать перекрестного загрязнения, добавьте образец, чтобы быть точным.
Полная промывка является ключом к обеспечению точных результатов, а неправильная промывка пластины может привести к ложному положительному результату.
Раствор субстрата чувствителен к свету и должен быть защищен от сохранения и использования света, а реакция цвета должна осуществляться в условиях светозащиты.
Концовочная жидкость является коррозионной, обратите внимание на защиту во время работы, избегая контакта с кожей и глазами.
Рекомендуется, чтобы стандартные продукты и образцы были проверены на повторное отверстие для повышения точности результатов. Набор предназначен только для научных исследований и не может быть использован для клинической диагностики.
