Белый мезон - 7 ELISA KIT использует метод ELISA с двойным антителочным заполнителем, который может точно количественно измерять белый мезон - 7 в образцах сыворотки крови, удобной в эксплуатации и широко используется в таких областях научных исследований, как иммунология.
Белый мезон - 7 Elisa Kit
Белый мезон - 7 Elisa KitЭто инструмент обнаружения, используемый в научных исследованиях для количественного определения содержания белого мезонина - 7 в биологических образцах. Белый мезон - 7 - это растворимый секреционный белок размером 25 кД, кодированный геном IL - 7, принадлежащий к семейству кроветворных факторов, которые играют ключевую роль в дифференциации, размножении и выживании лимфоцитов. Набор реактивов может помочь в исследованиях механизмов связанных заболеваний, разработке лекарств и других работ.
Состав комплекта
Ассоциированные энзимы:: 96 или 48 отверстий, предварительно завернутых антителами против ИЛ - 7, в качестве носителя реакции.
Стандартная продукция: Обычно для замороженных сухих продуктов, как правило, есть 2 бутылки. Перед вводом в эксплуатацию необходимо использовать стандартный разбавленный раствор продукта для повторного растворения и разбавления в различные градиенты концентрации, такие как 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 пг / мл, для построения стандартной кривой.
Образец xi:: Поддающиеся измерению образцы, используемые для разбавления с чрезмерной концентрацией, чтобы убедиться, что их концентрация находится в пределах эффективного диапазона обнаружения в комплекте.
Антитела ферментативного маркера:: Антиантитела IL - 7, маркированные HRP, представляют собой концентрат, который при использовании должен быть разбавлен разбавленным раствором с ферментным маркером антител по требованию.
разбавление ферментативных антител:: Специально используется для разбавления ферментных антител.
Подводный раствор:: Например, TMB - субстраты могут реагировать с HRP в ферментных маркерных антителах, что приводит к изменению цвета.
Стиральная жидкость:: Как правило, концентрат, при использовании должен быть разбавлен дистиллированной водой или деионизированной водой в определенных пропорциях, используется для промывки ферментативных соединительных пластин, удаления несвязанных веществ, эффективного снижения фоновых помех.
Конец жидкости:: В основном сильнокислые растворы (например, серная кислота), используемые для прекращения выраженной цветовой реакции субстрата, чтобы сделать цвет реактивной жидкости стабильным, чтобы облегчить последующие показания.
мембрана уплотнителя:: Используется для покрытия ферментных антенн во время термотроду для предотвращения испарения жидкости и внешнего загрязнения.
инструкция по эксплуатации:: Подробное описание методов использования комплекта реагентов, мер предосторожности, показателей производительности и т.д.
Требования к образцу
Сыворотка:: После сбора крови комнатная температура помещается на ночь на 2 часа или 4 ° C, а затем центрифугируется на 1000 × g в течение 20 минут, тщательно всасывая верхнюю жидкость в резерв. Для сбора крови следует использовать одноразовые средства без термогенов и эндотоксинов.
Плазма крови:: В качестве антикоагулянтов могут использоваться этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), гепарин и т.д. В течение 30 минут после сбора образца, при 2 - 8 °C, центрифугирование 1000 × g в течение 15 минут, чтобы очистить его.
Клеточная культура очищается:: Клеточная культура очищается от 1000 × g центрифуг в течение 20 минут, после удаления фрагментов клеток и примесей, очищается для обнаружения.
Структурная симметрия:: Промыть ткань предварительно охлажденным фосфатным буфером (PBS, 0.01M, pH = 7.4) и удалить остатки крови на дне. После измельчения ткани добавляйте PBS в пропорции около 1: 9 (w / v) и полностью измельчите на льду. После 5000 × g центрифуг 5 - 10 минут, снимите очистку для обнаружения.
Если образец был обнаружен в течение короткого периода времени после сбора, он может храниться при температуре 4°C; Если требуется длительное хранение, его необходимо поместить в - 20°C или - 80°C для замораживания, и чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания, образцы крови, как правило, не подходят для тестирования.
Операционный процесс
Подготовка:: Удалите набор из холодильника и сбалансируйте его до комнатной температуры на 30 минут раньше. В то же время концентрированный промывочный раствор разбавляется в требуемых пропорциях дистиллированной или деионизированной водой.
Добавить образец:: Установите пустые отверстия, стандартные отверстия для продуктов и отверстия для образцов. Пустое отверстие добавляется к образцу xi для высвобождения жидкости, стандартное отверстие для продукта добавляется к различным концентрациям стандартного продукта, отверстие для образца добавляется к обработанному образцу, количество добавок на отверстие обычно составляет 100 мкл, мягкое смешивание, температура 37 ° C 90 минут.
Мойка:: После окончания термотроду жидкость в отверстии сбрасывается, отверстия заполняются моющим раствором, высыхают через 1 - 2 минуты после погружения, повторно промывают 5 раз, чтобы убедиться, что дно che смывает несвязанное вещество.
Антитела с ферментативными маркерами:: На отверстие добавляется 100 мкл разбавленного рабочего раствора ферментативного маркера антитела, температура 37 °C 60 минут.
Снова промыть:: Повторить вышеуказанные этапы стирки.
Цвет:: В каждое отверстие добавляется 90 мкл раствора субстрата, который слегка смешивается, а светонепроницаемый цвет при температуре 37 ° C составляет 15 - 30 минут (следует судить по фактическому цвету).
Конец реакции:: В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, при этом цвет раствора меняется с синего на желтый.
Показания:: В течение 15 минут после добавления концентрирующей жидкости с помощью энзимометра измеряется поглощение (OD) отверстий на длине волны 450 нм.
Результаты расчетов:: Используйте стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, рисуйте стандартную кривую. Соответствующая концентрация была обнаружена из стандартной кривой на основе значения OD образца, и если образец был разбавлен, то фактические концентрации должны были быть получены путем умножения соответствующего кратного разбавления.
Показатели эффективности
Диапазон обнаружения:: Различные наборы варьируются, и общий диапазон обнаружения составляет 15,6 - 1000 пг / мл, что соответствует требованиям обнаружения содержания IL - 7 в различных образцах.
чувствительность:: Как правило, он может быть ниже 7,8 пг / мл или даже ниже и может обнаруживать небольшие количества IL - 7 в образцах.
Специфичность:: Высокая специфичность к IL - 7, практически без перекрестных реакций с другими веществами, такими как цитокины.
-
повторяемость:: Коэффициент вариации внутри пластины обычно составляет менее 10%, а коэффициент вариации между пластинами - менее 15%, что обеспечивает стабильность и надежность результатов испытаний.
