Рецептор белого мезонина 5 (растворимый) ELISA KIT, с использованием технологии двойного антиинтерфейса ELISA, точной количественной сыворотки и других образцов этого рецептора, простой в эксплуатации, вспомогательный иммунитет и другие исследования в области научных исследований.
Рецептор белого мезонина 5 (растворимый) ELISA KIT
Рецептор белого мезонина 5 (растворимый) ELISA KITЭто инструмент для количественного определения содержания растворимого белого мезонина 5 - рецептора в биологических образцах и играет важную роль в области научных исследований, помогая глубоко понять физиологические и патологические процессы, такие как иммуномодуляция и воспалительные реакции. Ниже мы представляем вам несколько примеров:
Принцип обнаружения:: Применение технологии комбинированного иммуноадсорбционного измерения (ELISA) с использованием ферментов с двойным антитело - заполнителем. Ферментная соединительная пластина комплекта была предварительно покрыта специфическими антителами к растворимым рецепторам белого мезонина 5. Когда образец был добавлен, растворимый рецептор белого мезонина 5 в образце связывался с специфичностью твердофазных антител. Затем добавляются маркированные ферментами антитела против растворимого белого мезонина 5 - рецептора, которые образуют комплекс « твердофазное антитело - растворимый беломезонин 5 - рецептор ферментативного эталона» с рецептором, который уже связывается с твердофазным антителом. После полной промывки удаляется несвязанное вещество, затем добавляется донный раствор (например, 3,3 ', 5,5' - тетраметилдифениламин, ТМБ). Под катализатором ферментов в ферментных антителах субстрат реагирует ярко, а глубина цвета пропорциональна содержанию растворимого рецептора белого мезонина 5 в образце. Концентрация этого рецептора в образце может быть рассчитана путем измерения поглощения на определенной длине волны (обычно 450 нм) с помощью энзимометра по сравнению со стандартной кривой.
Состав комплекта
Ассоциированные энзимы:: Имеет спецификации 96 или 48 отверстий, предварительно завернутых в антитела к растворимым рецепторам белого мезонина 5, которые являются носителями реакции.
стандартный образец: Обычно для замороженных сухих продуктов, как правило, оснащены 2 бутылками. Перед вводом в эксплуатацию необходимо использовать стандартный разбавленный раствор продукта для повторного растворения и разбавления в различные градиенты концентрации, такие как 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 пг / мл, для построения стандартной кривой.
Образец xi:: Поддающиеся измерению образцы, используемые для разбавления с чрезмерно высокой концентрацией, чтобы убедиться, что концентрация образца находится в пределах эффективного диапазона обнаружения в наборе реагентов.
Антитела ферментативного маркера:: Анти - растворимые антитела рецептора белого мезоида 5, маркированные HRP (пероксидаза хрена), представляют собой концентрат, который должен быть разбавлен разбавленным раствором ферментативного антитела по требованию.
разбавление ферментативных антител:: Специально используется для разбавления ферментных антител.
Подводный раствор:: Например, TMB - субстраты могут реагировать с HRP в ферментных маркерных антителах, что приводит к изменению цвета.
Стиральная жидкость:: Как правило, концентрат, при использовании должен быть разбавлен дистиллированной водой или деионизированной водой в определенной пропорции, используется для промывки ферментативных соединительных пластин, удаления несвязанных веществ, снижения фоновых помех.
Конец жидкости:: В основном сильнокислые растворы (например, серная кислота), используемые для прекращения выраженной цветовой реакции субстрата, чтобы сделать цвет реактивной жидкости стабильным и удобным для чтения.
мембрана уплотнителя:: Покрытие ферментативной соединительной пластины во время термотроду для предотвращения испарения жидкости и внешнего загрязнения.
инструкция по эксплуатации:: Подробное описание методов использования комплекта реагентов, мер предосторожности, показателей производительности и т.д.
Требования к выборке
Сыворотка:: После взятия крови комнатная температура помещается на ночь на 2 часа или 4 ° C, а затем центрифугируется на 1000 × g в течение 20 минут, чтобы получить резерв. Для сбора крови следует использовать одноразовые средства без термогенов и эндотоксинов.
Плазма крови:: В качестве антикоагулянтов могут использоваться этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), гепарин и т.д. В течение 30 минут после сбора образца, при 2 - 8 °C, центрифугирование 1000 × g в течение 15 минут, чтобы очистить его.
Клеточная культура очищается:: Клеточная культура очищается от 1000 × g центрифуг в течение 20 минут, после удаления фрагментов клеток и примесей, очищается для обнаружения.
Структурная симметрия:: Промыть ткань предварительно охлажденным фосфатным буфером (PBS, 0.01M, pH = 7.4) и удалить остатки крови. После измельчения ткани добавляйте PBS в пропорции около 1: 9 (w / v) и полностью измельчите на льду. После 5000 × g центрифуг 5 - 10 минут, снимите очистку для обнаружения.
Если образец был обнаружен в течение короткого периода времени после сбора, он может быть сохранен при температуре 4°C; Если требуется длительное хранение, его необходимо поместить в - 20°C или - 80°C для замораживания, и чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания, образцы крови, как правило, не подходят для обнаружения.
Операционный процесс
Подготовка:: Удалите набор из холодильника и сбалансируйте его до комнатной температуры на 30 минут раньше. В то же время концентрированный промывочный раствор разбавляется в требуемых пропорциях дистиллированной или деионизированной водой.
Добавить образец:: Установите пустые отверстия, стандартные отверстия для продуктов и отверстия для образцов. Пустое отверстие добавляется к образцу xi для высвобождения жидкости, стандартное отверстие для продукта добавляется к различным концентрациям стандартного продукта, отверстие для образца добавляется к обработанному образцу, количество добавок на отверстие обычно составляет 100 мкл, мягкое смешивание, температура 37 ° C 90 минут.
стирка:: После окончания термотроду жидкость в отверстии сбрасывается, отверстия заполняются моющим раствором, высыхают через 1 - 2 минуты после погружения, повторно промывают 5 раз, чтобы убедиться, что дно che смывает несвязанное вещество.
Антитела с ферментативными маркерами:: На отверстие добавляется 100 мкл разбавленного рабочего раствора ферментативного маркера антитела, температура 37 °C 60 минут.
Снова промыть:: Повторить вышеуказанные этапы стирки.
Цвет:: В каждое отверстие добавляется 90 мкл раствора субстрата, который слегка смешивается, а светонепроницаемый цвет при температуре 37 ° C составляет 15 - 30 минут (следует судить по фактическому цвету).
Конец реакции:: В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, при этом цвет раствора меняется с синего на желтый.
Показания:: В течение 15 минут после добавления концентрирующей жидкости с помощью энзимометра измеряется поглощение (OD) отверстий на длине волны 450 нм.
результаты вычислений:: Используйте стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, рисуйте стандартную кривую. Соответствующая концентрация была обнаружена из стандартной кривой на основе значения OD образца, и если образец был разбавлен, то фактические концентрации должны были быть получены путем умножения соответствующего кратного разбавления.
