Рецептор белого мезонина - 6 ELISA KIT, с использованием технологии двойного антиинтерфейса ELISA, может быть точно количественно измерен в сыворотке крови и других образцах рецептора белого мезонина - 6, удобный в эксплуатации и облегчающий научные исследования.
Рецептор белого мезонина - 6 ELISA KIT
Рецептор белого мезонина - 6 ELISA KITЭто инструмент, используемый в научных исследованиях для количественного определения содержания рецепторов белого мезонина - 6 в биологических образцах. IL - 6R играет ключевую роль в процессах иммуномодуляции и воспалительных реакций, и обнаружение его содержания имеет большое значение для соответствующих исследований.
Принцип обнаружения:: В наборе реактивов в основном используется метод иммуноадсорбции с двойным антитело - заполнительным ферментом. Предварительная упаковка ферментативной связки была специфическим антителом к IL - 6R. После добавления образца IL - 6R в образце связывался с особенностями твердофазных антител. Затем добавляются маркированные ферментами антитела против IL - 6R, которые образуют комплекс « твердофазных антител - IL - 6R - ферментных маркеров» с IL - 6R, которые уже соединены с твердофазными антителами. После полной промывки, чтобы удалить несвязанное вещество, добавьте раствор субстрата (например, TMB), и под катализатором фермента субстрат реагирует ярко, а глубина цвета пропорциональна содержанию IL - 6R в образце. Концентрация IL - 6R в образце была рассчитана путем измерения поглощения на определенной длине волны (обычно 450 нм) с помощью ферментного маркера по сравнению со стандартной кривой.
Состав комплекта
Ассоциированные энзимы:: 96 или 48 отверстий, предварительно завернутых антителами против IL - 6R, являются носителями, на которых происходит реакция.
стандартный образец: Как правило, замороженные сухие продукты, есть 2 бутылки. Перед вводом в эксплуатацию необходимо повторно растворить раствор в разбавленном растворе стандартного продукта и разбавить его до различных градиентов концентрации, таких как 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 пг / мл, для построения стандартной кривой.
Образец xi:: Поддающиеся измерению образцы, используемые для разбавления с чрезмерной концентрацией, чтобы убедиться, что концентрация образца находится в пределах диапазона обнаружения комплекта реагентов.
Антитела ферментативного маркера:: Анти - IL - 6R антитела, маркированные HRP, являются концентратами, которые должны быть разбавлены разбавленными растворами для ферментативных антител по мере необходимости.
Ферментное антитело:: Специально используется для разбавления ферментных антител.
Подводный раствор:: Например, TMB - субстраты могут реагировать с HRP в ферментных маркерных антителах, вызывая изменения цвета.
Стиральная жидкость:: Как правило, концентрат, который при использовании должен быть разбавлен пропорционально дистиллированной или деионизированной водой, используется для промывки ферментативных сцепок, удаления несвязанных веществ и снижения фоновых помех.
Конец жидкости:: В основном сильнокислые растворы (например, серная кислота), используемые для прекращения выраженной цветовой реакции субстрата, чтобы сделать цвет реактивной жидкости стабильным и удобным для чтения.
мембрана уплотнителя:: Используется для покрытия ферментных антенн во время термотроду для предотвращения испарения жидкости и внешнего загрязнения.
инструкция по эксплуатации:: Подробное описание методов использования комплекта реагентов, мер предосторожности, показателей производительности и т.д.
Требования к выборке
Сыворотка:: После взятия крови комнатная температура помещается на ночь на 2 часа или 4 ° C, а затем центрифугируется на 1000 × g в течение 20 минут, чтобы получить резерв. Для сбора крови следует использовать одноразовые средства без термогенов и эндотоксинов.
Плазма крови:: В качестве антикоагулянтов могут использоваться этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), гепарин и т.д. В течение 30 минут после сбора образца, при 2 - 8 °C, центрифугирование 1000 × g в течение 15 минут, чтобы очистить его.
Клеточная культура очищается:: Клеточная культура очищается от 1000 × g центрифуг в течение 20 минут, после удаления фрагментов клеток и примесей, очищается для обнаружения.
Структурная симметрия:: Промыть ткань предварительно охлажденным фосфатным буфером (PBS, 0.01M, pH = 7.4) и удалить остатки крови. После измельчения ткани добавляйте PBS в пропорции около 1: 9 (w / v) и полностью измельчите на льду. После 5000 × g центрифуг 5 - 10 минут, снимите очистку для обнаружения.
Если образец был обнаружен в течение короткого периода времени после сбора, он может быть сохранен при температуре 4°C; Если требуется длительное хранение, его необходимо поместить в - 20°C или - 80°C для замораживания, и чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания, образцы крови, как правило, не подходят для тестирования.
Операционный процесс
Подготовка:: Удалите набор из холодильника и сбалансируйте его до комнатной температуры на 30 минут раньше. В то же время концентрированный промывочный раствор разбавляется в требуемых пропорциях дистиллированной или деионизированной водой.
Добавить образец:: Установите пустые отверстия, стандартные отверстия для продуктов и отверстия для образцов. Пустое отверстие добавляется к образцу xi для высвобождения жидкости, стандартное отверстие для продукта добавляется к различным концентрациям стандартного продукта, отверстие для образца добавляется к обработанному образцу, количество добавок на отверстие обычно составляет 100 мкл, мягкое смешивание, температура 37 ° C 90 минут.
стирка:: После окончания термотроду жидкость в отверстии сбрасывается, отверстия заполняются моющим раствором, высыхают через 1 - 2 минуты после погружения, повторно промывают 5 раз, чтобы убедиться, что дно che смывает несвязанное вещество.
Антитела с ферментативными маркерами:: На отверстие добавляется 100 мкл разбавленного рабочего раствора ферментативного маркера антитела, температура 37 °C 60 минут.
Снова промыть:: Повторить вышеуказанные этапы стирки.
Цвет:: В каждое отверстие добавляется 90 мкл раствора субстрата, который слегка смешивается, а светонепроницаемый цвет при температуре 37 ° C составляет 15 - 30 минут (следует судить по фактическому цвету).
Конец реакции:: В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, при этом цвет раствора меняется с синего на желтый.
Показания:: В течение 15 минут после добавления концентрирующей жидкости с помощью энзимометра измеряется поглощение (OD) отверстий на длине волны 450 нм.
результаты вычислений:: Используйте стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, рисуйте стандартную кривую. Соответствующая концентрация была обнаружена из стандартной кривой на основе значения OD образца, и если образец был разбавлен, то фактические концентрации должны были быть получены путем умножения соответствующего кратного разбавления.
показатель производительности
Диапазон обнаружения:: Различные наборы варьируются, общий диапазон обнаружения 31,2 - 2000 пг / мл и т. Д. Для удовлетворения потребностей в обнаружении содержания IL - 6R в различных образцах.
чувствительностьКак правило, он может быть ниже 15,6 пг / мл или даже ниже, что позволяет обнаружить небольшое количество IL - 6R в образце.
Специфичность:: Высокая специфичность к IL - 6R, почти без перекрестных реакций с другими веществами, такими как рецепторы цитокинов.
Повторяемость:: Коэффициент вариации внутри пластины обычно составляет менее 10%, а коэффициент вариации между пластинами - менее 15%, что обеспечивает стабильность и надежность результатов испытаний.
Меры предосторожности
Действуя строго в соответствии с инструкциями, реагенты из разных партий наборов не могут смешиваться.
Использование одноразовой всасывающей головки во время операции для предотвращения перекрестного загрязнения, плюс образец должен быть точным.
Полная промывка является ключом к обеспечению точных результатов, а неправильная промывка пластины может привести к ложноположительным результатам.
Раствор субстрата чувствителен к свету и должен быть защищен от сохранения и использования света, а реакция цвета должна осуществляться в условиях светозащиты.
Концовочный раствор является коррозионным, при работе обратите внимание на защиту, чтобы избежать контакта с кожей и глазами.
Рекомендуется, чтобы как стандартные продукты, так и образцы были проверены на повторное отверстие, чтобы повысить точность результатов. Набор предназначен только для научных целей и не может быть использован для клинической диагностики.
