Белая мезонина - 6 ELISA KIT использует метод двойного анти - макаронного ELISA, точную количественную сыворотку и другие образцы белого мезонина - 6, удобные в эксплуатации, чтобы предоставить ключевые данные для иммунологических, воспалительных и других исследований.
Белый мезон - 6 Elisa Kit
Белый мезон - 6 Elisa KitЭто инструмент для количественного определения содержания белого мезоида - 6 в биологических образцах, который широко используется в таких научных областях, как иммунология и исследования воспаления. Ниже мы представляем вам:
Принцип обнаружения:: Использование технологии ELISA с двойным антитело - заполнителем. Ферментная связка в комплекте была предварительно завернута в антитело против ИЛ - 6. После добавления образца IL - 6 в образце связывается с специфичностью твердофазных антител, образуя антигенно - антитело - комплекс. Затем добавляются маркированные ферментами антитела против IL - 6, которые дополнительно связываются с IL - 6, который уже связывается с твердофазными антителами, образуя сэндвич - структуру « твердофазного антитела - IL - 6 - ферментного маркерного антитела». После этапа промывки удаляется несвязанное вещество, затем добавляется раствор субстрата (например, TMB). Под катализатором фермента в субстрате происходит выраженная цветовая реакция, а глубина цвета пропорциональна содержанию IL - 6 в образце. Концентрация IL - 6 в образце может быть рассчитана путем измерения поглощения на определенной длине волны (обычно 450 нм) с помощью энзимометра по сравнению со стандартной кривой.
Состав комплекта
Ассоциированные энзимы:: Есть спецификация 96 или 48 отверстий, предварительно завернутых антителами против ИЛ - 6, являются носителями реакции.
стандартный образец: Как правило, замороженные сухие продукты, обычно есть 2 бутылки. Перед вводом в эксплуатацию необходимо повторно растворить раствор в разбавленном растворе стандартного продукта и разбавить его до различных градиентов концентрации, таких как 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 пг / мл, для построения стандартной кривой.
Образец xi:: Поддающиеся измерению образцы, используемые для разбавления с чрезмерной концентрацией, чтобы убедиться, что концентрация образца находится в пределах диапазона обнаружения комплекта реагентов.
Антитела ферментативного маркера:: АнтиIL - 6 антитела, помеченные HRP, являются концентратами, которые должны быть разбавлены по требованию с использованием разбавленного раствора для ферментативных антител.
разбавление ферментативных антител:: Специально используется для разбавления ферментных антител.
Подводный раствор:: Например, TMB - субстраты реагируют с HRP в ферментных маркерных антителах, вызывая изменения цвета.
Стиральная жидкость:: В основном концентрат, при использовании должен быть разбавлен дистиллированной или деионизированной водой пропорционально, используется для промывки ферментативных сцепок, удаления несвязанных веществ, снижения фоновых помех.
Конец жидкости:: Как правило, растворы сильной кислоты (например, серная кислота), используемые для прекращения выраженной цветовой реакции субстрата, чтобы сделать цвет реактивной жидкости стабильным и удобным для чтения.
мембрана уплотнителя:: Покрытие ферментативной соединительной пластины во время термотроду для предотвращения испарения жидкости и внешнего загрязнения.
инструкция по эксплуатации:: Подробное описание методов использования комплекта реагентов, мер предосторожности, показателей производительности и т.д.
Требования к выборке
Сыворотка:: После сбора крови комнатная температура помещается на 2 часа или 4 ° C на ночь, 1000 × g центрифуг 20 минут, чтобы взять чистую и запасную. Для сбора крови следует использовать одноразовые средства без термогенов и эндотоксинов.
Плазма крови:: Применяются антикоагулянты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) и гепарин. В течение 30 минут после сбора образца, 1000 × g центрифуг при 2 - 8 °C в течение 15 минут, чтобы очистить его.
Клеточная культура очищается:: Клеточная культура очищается от 1000 × g центрифуги в течение 20 минут, после удаления фрагментов и примесей клетки, снимаются и очищаются для обнаружения.
Структурная симметрия:: Промыть ткань предварительно охлажденным фосфатным буфером (PBS, 0.01M, pH = 7.4) и удалить остатки крови. После измельчения ткани, нажмите 1: 9 (w / v), чтобы добавить PBS, полностью измельчить на льду. После 5000 × g центрифуг 5 - 10 минут, снимите очистку для обнаружения.
Если образец был обнаружен в течение короткого периода времени после сбора, он может быть сохранен при температуре 4°C; Если требуется длительное хранение, его необходимо поместить в - 20°C или - 80°C для замораживания, и чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания, образцы крови, как правило, не подходят для обнаружения.
Операционный процесс
Подготовка:: Удалите набор из холодильника и сбалансируйте его до комнатной температуры на 30 минут раньше. В то же время концентрированный промывочный раствор разбавляется в требуемых пропорциях дистиллированной или деионизированной водой.
Добавить образец:: Установите пустые отверстия, стандартные отверстия для продуктов и отверстия для образцов. Пустое отверстие добавляется к образцу xi для высвобождения жидкости, стандартное отверстие для продукта добавляется к различным концентрациям стандартного продукта, отверстие для образца добавляется к обработанному образцу, количество добавок на отверстие обычно составляет 100 мкл, мягкое смешивание, температура 37 ° C 90 минут.
стирка:: После окончания термотроду жидкость в отверстии сбрасывается, отверстия заполняются моющим раствором, высыхают через 1 - 2 минуты после погружения, повторно промывают 5 раз, чтобы убедиться, что дно che смывает несвязанное вещество.
Антитела с ферментативными маркерами:: На отверстие добавляется 100 мкл разбавленного рабочего раствора ферментативного маркера антитела, температура 37 °C 60 минут.
Снова промыть:: Повторить вышеуказанные этапы стирки.
Цвет:: В каждое отверстие добавляется 90 мкл раствора субстрата, который слегка смешивается, а светонепроницаемый цвет при температуре 37 ° C составляет 15 - 30 минут (следует судить по фактическому цвету).
Конец реакции:: В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, при этом цвет раствора меняется с синего на желтый.
Показания:: В течение 15 минут после добавления концентрирующей жидкости с помощью энзимометра измеряется поглощение (OD) отверстий на длине волны 450 нм.
результаты вычислений:: Используйте стандартную концентрацию продукта в качестве горизонтальных координат, значение OD в качестве вертикальных координат, рисуйте стандартную кривую. Соответствующая концентрация была обнаружена из стандартной кривой на основе значения OD образца, и если образец был разбавлен, то фактические концентрации должны были быть получены путем умножения соответствующего кратного разбавления.
показатель производительности
Диапазон обнаружения:: Различные наборы варьируются, общий диапазон обнаружения составляет 15,6 - 1000 пг / мл и т. Д., Чтобы удовлетворить потребности в обнаружении содержания IL - 6 в различных образцах.
чувствительность:: Как правило, он может быть ниже 7,8 пг / мл или даже ниже и может обнаруживать небольшое количество IL - 6 в образце.
Специфичность:: Высокая специфичность к IL - 6, практически без перекрестных реакций с другими веществами, такими как цитокины.
Повторяемость:: Коэффициент вариации внутри пластины обычно составляет менее 10%, а коэффициент вариации между пластинами - менее 15%, что обеспечивает стабильность и надежность результатов испытаний.
