Рецептор белого мезонина - 6 (растворимый) ELISA KIT, с использованием метода двойного антиинтерфейса ELISA, точная количественная сыворотка и другие образцы растворимых рецепторов, простая в эксплуатации, широко используется в научных исследованиях.
Рецептор белого мезонина - 6 (растворимый) ELISA KIT
Рецептор белого мезонина - 6 (растворимый) ELISA KITОн предназначен для количественного определения содержания растворимого белого мезонина - 6 рецепторов в биологических образцах и имеет большое значение для иммунологических и воспалительных исследований в области научных исследований.
Принцип обнаружения:: Иммунодесорбция на основе комбинированного иммуноадсорбционного метода с двумя антителами. Ферментные связывающие пластины предварительно упакованы специфическими антителами к растворимым рецепторам белого мезонина - 6. После того, как образец был добавлен, растворимый беломезонин - 6 рецептор связывался с твердофазными антителами. Затем добавляются маркированные ферментами антитела к растворимым белым мезонам - 6 - рецепторам, образующие комплекс « твердофазные антитела - растворимые белые мезонины - 6 - рецепторы - ферментные антитела - эталоны». После промывки удаляется несвязанное вещество, добавляется раствор субстрата (например, TMB), при катализаторе фермента субстрат окрашен, а глубина цвета пропорциональна содержанию этого рецептора в образце. Концентрация растворимого белого мезонина - 6 - рецептора в образце была получена путем измерения поглощения на длине волны 450 нм с помощью энзимометра.
Состав комплекта
Ассоциированные энзимы:: Имеет спецификации 96 или 48 отверстий, предварительно завернутых антителами, которые являются реакционными носителями.
Стандартная продукция:: Как правило, замороженные сухие продукты, которые должны быть повторно растворены и разбавлены в серию градиентов концентрации с использованием стандартного разбавленного раствора продукта, например 0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000 пг / мл, для построения стандартной кривой.
Образец xi:: Поддающиеся измерению образцы, используемые для разбавления с чрезмерной концентрацией, с тем чтобы концентрация образца соответствовала диапазону обнаружения комплекта реагентов.
Антитела ферментативного маркера:: Антирастворимый беломезонин - 6 - рецепторный антитела, маркированный HRP, для концентрата, который должен быть разбавлен по требованию разбавленным раствором ферментативного антитела.
разбавление ферментативных антител:: Специально используется для разбавления ферментных антител.
Подводный раствор:: Например, TMB - субстрат, реакция HRP с ферментным маркером антитела вызывает изменение цвета.
Стиральная жидкость:: Как правило, концентрат, разбавленный пропорционально дистиллированной или деионизированной водой, используется для промывки ферментативных сцепок, удаления несвязанных веществ, снижения фоновых помех.
Конец жидкости:: В основном сильные кислотные растворы (например, серная кислота), используемые для прекращения реакции цвета субстрата, стабилизации цвета реакционной жидкости для считывания.
мембрана уплотнителя:: Покрытие ферментативной соединительной пластины при температурном размножении для предотвращения испарения жидкости и внешнего загрязнения.
инструкция по эксплуатации:: Подробное описание методов использования, мер предосторожности, показателей производительности и т.д.
Требования к образцу
Сыворотка:: После сбора крови комнатная температура помещается на 2 часа или 4 ° C на ночь, 1000 × g центрифуг 20 минут, чтобы очистить, сбор крови требует одноразового оборудования без термогена, без эндотоксина.
Плазма крови: Можно использовать EDTA, гепарин и другие антикоагулянты, образец взят в течение 30 минут после сбора, 2 - 8 °C при центрифуге 1000 × g в течение 15 минут.
Клеточная культура очищается:: 1000 × g центрифуга в течение 20 минут, после удаления фрагментов клеток и примесей, чтобы получить анализ очистки.
Структурная симметрия:: Промыть ткань предварительно охлажденным PBS (0.01M, pH = 7.4), удалить остаточную кровь, после измельчения ткани нажмите 1: 9 (w / v) плюс PBS, лед полностью измельчен, 5000 × g центрифуга 5 - 10 минут для очистки.
Если образец был обнаружен в течение короткого периода времени после сбора, он может быть сохранен при температуре 4°C; Долгосрочное хранение требует - 20°C или - 80°C замораживания и избегает повторного замораживания и оттаивания, образцы крови, как правило, не подходят для обнаружения.
Операционный процесс
Подготовка:: Извлечь из холодильника набор реагентов, сбалансировать до комнатной температуры (около 30 минут), разбавить концентрированный моющий раствор.
Добавить образец:: Установить пустые отверстия, стандартные отверстия для продуктов и отверстия для образцов. Пустое отверстие плюс образец xi высвобождения жидкости, стандартное отверстие продукта плюс различные концентрации стандартного продукта, отверстие образца плюс обработанный образец, количество образца на отверстие обычно 100 мкл, мягкое смешивание, 37 ° C температура размножения 90 минут.
Мойка:: Выбросить жидкость из отверстия, заполнить отверстия моющим раствором, через 1 - 2 минуты после погружения сбрасывать, повторно промыть 5 раз, чтобы убедиться, что смыть несвязанное вещество.
Антитела с ферментативными маркерами:: Добавление 100 мкл на отверстие разбавленного рабочего раствора ферментативного маркера антитела при температуре 37°C в течение 60 минут.
Снова промыть:: Повторить вышеуказанные этапы стирки.
Цвет:: Добавление 90 мкл донного раствора на отверстие, мягкое смешивание, 37 ° C светонепроницаемый цвет 15 - 30 минут (в зависимости от фактического цвета).
Конец реакции:: На отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, цвет раствора меняется с синего на желтый.
Показания:: В течение 15 минут после добавления концентрирующей жидкости измеряется поглощение света в отверстиях (OD - значение) с помощью энзимометра на длине волны 450 нм.
Результаты расчетов:: Составление стандартной кривой с использованием стандартной концентрации продукта в качестве горизонтальных координат, а значения OD - в качестве вертикальных координат. Соответствующая концентрация была обнаружена из стандартной кривой на основе значения OD образца, и если образец был разбавлен, фактическая концентрация должна быть умножена на соответствующий множитель разбавления.
Показатели эффективности
Диапазон обнаружения: Обычный диапазон 15,6 - 1000 пг / мл для удовлетворения различных потребностей в тестировании образцов.
чувствительность:: Может быть ниже 7,8 пг / мл или даже ниже, может обнаруживать небольшое количество растворимого белого мезонина - 6 рецепторов.
Специфичность:: Высокая специфичность к этому рецептору, почти нет перекрестных реакций с другими цитокиновыми рецепторами и т.д.
повторяемость:: Коэффициент вариации внутри пластины, как правило, менее 10%, коэффициент вариации между пластинами менее 15%, чтобы гарантировать стабильные и надежные результаты тестирования.
