Молекулярное взаимодействие: эксперимент по блокированию миграции геля EMSA

I. Технический обзор

Технология EMSA, т.е. эксперимент по переносу геля или электрофореза, используется для изучения взаимодействия DNA / RNA - связывающих белков и связанных с ними последовательностей DNA / RNA;

II. ТЕХНИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ

Очищенный белок или клеточный экстракт вылупляется вместе с маркированным ДНК или РНК - зондом, и в неинвазивном полиакриламидном геле электрофорез DNA - белковый комплекс или РНК - белок перемещается медленнее, чем несвязанный зонд, обнаруживая активированные транскрипционные или регуляторные факторы белка, связанные с ДНК или РНК.

III. Сценарии применения

Исследования по регулированию экспрессии генов: определение точек связывания и свойств связывания факторов транскрипции с ДНК и изучение механизмов регулирования экспрессии генов.

2. Исследование механизмов заболевания: анализ аномалий в регулировании экспрессии генов, связанных с болезнью, и изучение механизмов развития болезни.

3. Фармацевтическое целевое обнаружение: скрининг и идентификация ДНК - связывающих белков, связанных с болезнью, которые обеспечивают целевые точки для исследований и разработок лекарств.

Исследование сигнальных путей: изучение изменений активности ДНК - связывающих белков в сигнальных путях и их влияния на гены в нижнем течении.

IV. Преимущества технологии

1. Экспериментальные операции относительно просты и не требуют жестких условий эксперимента.

Может обнаруживать размеры и структуру различных молекул нуклеиновых кислот, а также широкий диапазон размеров белков, а также связывать различные белки с различными молекулами нуклеиновых кислот в одной реакционной системе.

3. Зонд биомаркера стабилен, безопасен, точен и имеет высокую сродство.

V. Тип выборки

Свежие клетки (стенные / суспензионные клетки), замороженные клетки, замороженные ткани, образцы клеточного белка или очищенные транскрипционные факторы, некоторые эксперименты также могут использовать рекомбинантные экспрессированные белки.

VI. Потребности в выборке

Образцы клеток: около 1 × 10 ^ 7 (может быть 1 чашка 10 см или храниться в виде взвешенных клеток в центрифуге, или 1 бутылка T75);

Замороженные ткани: около 400 мг;

Растительная ткань: около 2 г; цитогенный белок, очищенный транскрипционный фактор, рекомбинантный экспрессивный белок и т. Д.: Каждая мембрана обеспечивает не менее 50 уль, концентрация не менее 0,5 мг / мл.

VII. Подготовка и транспортировка образцов

Образцы живых клеток: свежие образцы клеток, содержащиеся в чашках Петри / T75 бутылок / центробежных трубах, могут быть перевезены с помощью экспресс - доставки при комнатной температуре (не позднее следующего дня) на более близком расстоянии, в городе могут быть мигающими или лично доставлены, а на более дальнем расстоянии могут быть заморожены клетки сухого льда при температуре 80°C;

Образцы тканей & другие образцы жидкостей: перевозка замороженного сухого льда при температуре 80°C.

VIII. Необходимые реактивы

Ассоциированные белковые специфические антитела 50 ul и выше, концентрация более 0,5 мг / мл.

IX. Экспериментальный цикл

2 - 3 недели

X. Прочее

Последовательность зонда, если нет последовательности зонда, пожалуйста, предоставьте информацию о ДНК - связывающих белках или соответствующую литературу.